玉米初级三体的鉴定及传递率研究

为探究引进的玉米初级三体的细胞学、形态学鉴定及传递率,以玉米初级三体为材料,采用根尖染色体计数法分析染色体数目,参考李懋学和陈瑞阳确定的标准进行核型分析,并通过直接测数法和磺染法分别测定细胞学指标和花粉育性。细胞学鉴定表明,T1~T10是分别增加玉米第1~第10条染色体的玉米初级三体,主要由中部着丝点染色体和近中部着丝点染色体组成,6号染色体具有随体,无B染色体,核型类型均属于较对称的B型;形态学鉴定表明,除T3的植株较二倍体高外,其余三体的各性状均较二倍体小,表明附加1条染色体导致三体的生活力及生长势大多弱于其二倍体。t检测表明,T1可通过测量叶片长度对三体植株进行初步鉴定,T3、T5、T7、T9可通过花粉育性检测对三体植株进行初步鉴定,T6可通过雌穗长度、育性检测对三体植株进行初步鉴定;对初级三体系标记基因表型观察结果表明,植株标记基因的性状表现与该植株是否为三体没有必然联系;额外染色体通过三体自交的传递率为3.4%~25.0%,高于仅通过雌配子(1.7%~21.7%)和仅通过雄配子(0~6.0%)的传递率。引进的玉米初级三体应以细胞学鉴定为主,结合形态学鉴定,其额外染色体通过三体自交能得到较高的传递率和结实率。本研究结果为运用玉米初级三体进行基因定位奠定了一定的理论基础。     

小麦背景中披碱草部分染色体的FISH鉴定

为了建立小麦背景中粗穗披碱草(Elymus trachycaulus)和纤毛披碱草(Elymus ciliaris)染色体的跟踪鉴定方法,本研究利用寡聚核苷酸Oligo-pSc119.2-1和Oligo-pTa-535-1为探针的双色荧光原位杂交(FISH)和以(GAA)8为探针的单色FISH,分别对4个小麦-粗穗披碱...     

大白菜InDels标记开发及其在剩余杂合体鉴定中的应用

大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)参考基因组序列的公布及测序成本的降低为大规模开发插入/缺失(Insertion/Deletion,InDel)标记提供了可能.本研究以性状差异明显的大白菜自交系He102与06-247为亲本,开展了全基因组重测序、标记开发和验证工作.二者测序深度分别为10×和8×,经筛选共获得330 218个InDels差异位点,出现频率为1.2个/kb,其中有11 238个差异位点位于编码区,包括5 184个差异基因,每个基因平均包含2.2个差异位点.分别以He102与06-247测序数据中筛选出的多态性InDels位点为参照,从10条染色体上随机选择933个位点进行了PCR扩增及电泳检测验证.结果表明,测序深度对假阳性率有直接影响,以测序较深的材料中筛选到的差异位点为参照,其验证结果的假阳性率亦较高,反之则较低.本研究中以He102与06-247为参照选择InDels位点验证的平均假阳性率分别是51.9％和22.5％.从933个位点中共筛选出593个在亲本之间实际表现为多态性的位点,这些差异位点中有375个位于编码区,是潜在的功能性标记.利用上述差异位点,检测了He102与06-247衍生的F7代重组自交系群体,明确了F7代各株系在593个位点的纯/杂合状态,为利用剩余杂合株系精细解析和精准定位大白菜耐抽薹、抗病毒、抗干烧心等重要农艺性状奠定了基础.     

应用荧光原位杂交技术检测大麻哈鱼生长激素基因在超级鲤染色体上的插入位点

对外源基因在鱼体内的整合、表达及遗传(夏德全等，2000)情况并不清楚。直接荧光原位杂交方法已在医学、农林牧渔(权法霞等，1999；孙梅和刘红林，2000)等各方面得到广泛的应用。本实验采用直接荧光原位杂交的方法，将荧光素分子(cy5)直接标记在上游引物5′末端，通过。PCR扩增获得标记的探针，将探针与变性的染色体玻片进行杂交，经一系列洗涤和复染过程，在荧光显微镜下观察大麻哈鱼生长激素基因在鲤鱼染色体上的插入位点。     

核酸适配体技术在海洋生物毒素快速检测中的应用

海洋生物毒素是海洋生物体内存在的一类高活性特殊代谢成分,大多数具有剧烈毒性,给人类健康和安全带来严重威胁.目前针对海洋生物毒素的检测主要采取小鼠生物检测法、免疫分析法、大型仪器检测法和毛细管电泳法,但均存在一定的局限性.因此,为更加高效和特异性地检测海洋生物毒素,核酸适配体技术成为这一领域的重要选择之一.本文旨在通过介...     

应用荧光原位杂交技术进行哺乳动物性别鉴定的研究进展

荧光原位杂交（FISH）技术应用于哺乳动物性别鉴定,近年来取得了长足进展。本文阐述了荧光原位杂交技术的原理及其在胚胎性别鉴定方面和精细胞筛选鉴定方面较PCR法和LAMP法所具有的优势,并着重概述了该技术在人类医学和家畜性别鉴定方面的研究进展和应用前景。     

荧光原位杂交技术检测土壤中博德特氏菌探针的设计与应用

根据博德特氏菌(Bordetellasp.)的16S rRNA基因序列,设计荧光原位杂交(FISH)检测博德特氏菌的寡核苷酸探针FW_iso_62和FW_iso_761,在20%～60%甲酰胺均有很强的荧光信号。采用探针FW_iso_62及其竞争探针,结合Nycodenz和DAPI技术,建立定量检测土壤中博德特氏菌的DAPI-FISH方法。该方法可排除土壤颗粒的自动荧光对细菌信号的掩盖,保证图片中有大量微生物供统计分析,还能有效保存微生物的原位信息。应用该方法分析土壤中1,2,4-三氯苯降解菌-博德特氏菌,结果未受氯苯污染的农田土壤中没有检测到博德特氏菌,而氯苯污染土壤中检测到大量的博德特氏菌,每克土壤含3.78×106个。将该污染土壤中分离的博德特氏降解菌及其降解菌群接种至农田土壤中,降解菌的数量均随培养而增加,一个月后分别占DAPI计数的1.7%和3.8%。本研究设计的探针可有效用于复杂环境样品中博德特氏菌的定性与定量检测。     

多粘芽孢杆菌芽孢荧光原位杂交检测技术研究及其在有机肥发酵中的应用

采用化学和萌发两种预处理方法,对多粘芽孢杆菌SQR21芽孢进行荧光原位杂交(FISH),结合扫描电镜比较不同预处理芽孢表面结构和形态变化。结果表明,两种预处理均可在2 h内完成SQR21芽孢的荧光原位杂交,且萌发预处理比化学预处理杂交效率高,荧光信号强。扫描电镜结果显示,萌发预处理芽孢无裂解,而化学预处理芽孢有不同程度的裂解。将萌发预处理荧光原位杂交用于检测猪粪有机肥中二次发酵的SQR21芽孢,发现在37℃,含水量50%的条件下,2 h后芽孢开始生长,4 h后营养体细胞出现,12 h后营养体细胞有显著优势。本研究建立的芽孢荧光原位杂交检测技术,比平板计数更能准确反映多粘芽孢杆菌芽孢的数量和生长动态,在生物有机肥中芽孢杆菌的检测方面有良好的应用前景。     

体细胞核移植技术在猪基因修饰中的应用

基因修饰猪作为一种理想的动物模型已应用于生物医学研究。构建基因修饰猪的方法很多,包括原核注射、慢病毒转染、精子介导和体细胞核移植等,其中体细胞核移植具有显著优势,一直是构建基因修饰猪的重要方法。近几年,随着转座子、设计核酸酶等基因修饰新技术以及诱导性多能干细胞研究的不断进展,将进一步凸显体细胞核移植技术在基因修饰猪构建中的价值。本文比较了猪基因修饰的主要方法,并论述体细胞核移植技术在猪基因修饰中的优势、发展历程和最新应用等。     

反刍动物饲料中乳源性成分与牛羊肉骨粉的区分

利用奶粉的溶解性,通过水和0.5%次氯酸钠溶液洗涤混有乳源性成分和牛、羊肉骨粉的饲料样品,去除饲料中的乳粉成分后,再使用16S rDNA PCR方法进行动物源性检测。结果表明,实验所建立的方法能够完全区分饲料中的乳粉与肉骨粉。当乳粉含量分别为25%、50%和75%时,混合饲料中牛、羊肉骨粉的检出限分别为2%、0.5%和0.1%。此方法操作简单,容易掌握,可用于鉴别反刍动物饲料中非乳源性成分的牛、羊源性成分。     

7株解有机磷细菌的分离和鉴定

从土壤中分离筛选出7株解有机磷的微生物。对这7株解磷细菌进行了形态、生理生化性状测定及16SrDNA序列分析(GenBankaccessionNo:S2,AY651922;S3,AY661923;X1,AY651925;Y1,AY651924;H1,AY663435;H2,AY663436andHe,AY663436)。其中S2、S3、X1和He属于假单胞菌属(Pseudomonas),Y1属于芽孢杆菌属(Bacillus),H1属于不动杆菌属(Acinetobacter),H2属于寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)。进一步通过G C含量和DNA-DNA杂交研究,结果表明,S2、S3和X1为产碱假单胞菌(Pseudomonasalcaligenes),Y1为蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)。     

Identification and characterization of rhizobacteria isolated by enrichment culture on spinach roots

Rhizobacteria can be used for biological control and environmental restoration. In this study, we performed enrichment culture of rhizobacteria, identified isolates, and investigated the physiological properties of the bacterial isolates. Five bacteria differing in their colony morphology were isolated from spinach roots as enriched rhizobacteria. Four isolates were identified by sequencing of 16S rDNA as β and γ-Proteobacteria; 16S rDNA sequencing was not completed on one isolate. Based on microscopic observation, we determined that at least two types of bacteria differing in their morphology co-existed in this isolate, and that it may not be possible to culture the two types separately. Based on tests of substrate utilization, we could not find the characteristics that were common to the isolates. One of the five isolates was inoculated into non-sterile soil, and we examined its root-colonizing ability. The test strain which was not detected in the non-rhizosphere soil, accounted for about 20% of the total bacteria on the roots. These results suggested that enrichment culture might be useful for isolating bacteria with a high root-colonizing ability     

产低温淀粉酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

对低温淀粉酶资源的开发是功能酶研究的新热点,本研究从东帕米尔高原江布拉克冰川冻土中分离获得多株高产低温淀粉酶菌株,最高产酶菌株D5-2经16S rDNA鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)细菌.对D5-2所产淀粉酶性质进行初步分析,结果表明,其最适作用温度和pH值分别为25 ℃和6.5,酶的热稳定性较差,40 ℃处理1h后酶活急剧下降,至70℃酶活力仅存23％;在pH 5.5～8.0条件下,酶活力相对稳定;Mn2+和Mg2+对淀粉酶有激活作用,而乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、Fe2+和Na+则抑制酶活.结果提示,菌株D5-2分泌的淀粉酶符合低温酶特性,应用空间较大,值得深入探究开发.     

一株具有固氮功能的烟草根际微生物的鉴定及其初步效应

应用16S rDNA序列分析构建系统发育树,结合生理指标、生化反应,对分离自烤烟根际的固氮菌菌株N05进行了分类鉴定,并通过小区试验探讨其对烤烟生产的效应。结果表明,自生固氮菌N05属于产碱菌属（Alcaligenes）,粪产碱菌（Alcaligenes faecalis）。将固氮菌N05制成菌肥,烤烟移栽时施入（30 kg/hm2）同时施用80% 的氮肥（B+80% N）,与全量施用氮肥（FN）相比,B+80% N烤烟根际固氮菌的数量平均提高3.6倍,放线菌的数量显著降低;圆顶期烤烟根际土壤中除Mg 元素的有效性略有降低外,P、K、Ca、Cu、Zn、Fe和 Mn 等元素的有效性均有不同程度的提高,提高幅度在 2.51%～ 46.08%。烤烟杀青样中 N 的平均含量也高于FN。在减施氮肥的情况下,应用固氮菌肥可提高烤烟根际固氮菌数量和矿质元素的有效性。     

The origin of the A genome donor of wheats (Triticum: Poaceae) – a perspective based on the sequence variation of the 5S DNA gene units

In a prior study on the haplomes of wheat using the 5S rRNA gene we assigned the long A1 and short A1 unit classes to the A haplome in the diploid T. monococcum. The short A1 unit class is absent in the tetraploids T. turgidum and T. timopheevii and in the hexaploid T. aestivum, although present in the hexaploid T. zhukovskyi. Both T. turgidum and T. aestivum contained a different 5S DNA unit class labeled the short A2.The purpose of this paper was to study the short A2 units in the two diploid species to shed light on the theory that the A haplome donor of T. turgidum and T. aestivum was T. urartu. Fifty eight clones were obtained from 12 accessions, sequenced and analyzed. As expected T. baeoticum, which is often classified as a subspecies of T. monococcum, contained the long A1 and the short A1 5S DNA units. Unexpectedly, T. urartu had the long A1 and the short G1 unit classes instead and other units not found so far in Triticum. These findings support the hypothesis that the donor of the A genome in T. zhukovskyi was T. monococcum, as identified by the short A1 units. However, the short A1 units are absent in T. timopheevii, also a carrier of the A genome. The short G1 units found in T. urartu also identify it as a possible donor of the G genome to T. timopheevii. The short G1 units were also found in T. aestivum in our prior study. The long G1 unit class was not found in T. urartu but reported from T. timopheevii and T. zhukovskyi. The implications of these and related findings on the evolution of wheats are discussed.     

利用高通量测序对三江平原小叶章湿地土壤细菌多样性的研究

利用黑龙江省科学院自然与生态研究所三江平原野外实验研究站内3个不同小叶章生态类型湿地土壤样品,直接提取土壤微生物总DNA,应用Miseq测序技术对16S rDNA进行序列测定和分析。结果表明:不同小叶章湿地土壤细菌群落结构发生了显著变化,土壤细菌多样性和丰富度随着土壤含水率的增加而降低。草甸化湿地和沼泽化草甸湿地优势种群为酸杆菌,变形菌次之;沼泽化湿地优势种群为变形菌,酸杆菌次之。土壤含水率的增加减少了酸杆菌的分布,而增加了变形菌的分布。16S rDNAheatmap分析则表明,湿地水位的变化对酸杆菌和变形菌的群落结构影响最大。     

一株耐碳酸盐Bacillus属细菌的鉴定与特性分析

本研究从松嫩平原pH值在10.0以上、植物难以生存的斑块状裸地中分离到一株细菌SA-5,经鉴定该菌株为革兰氏染色阴性,杆状,接触酶阳性,氧化酶阴性,菌落呈橙黄色的好氧细菌,可水解淀粉。抗逆特性分析显示,菌株SA-5可在高达275mmol/L Na2CO3或pH 12.0以及2.0mol/L NaCl培养基中生长,中性条件下生长明显受到抑制,其中对碳酸盐的耐受性远高于普通植物。根据16SrDNA序列等分析结果显示,菌株SA-5属于Bacillus属,仅与菌株Bacillus aurantiacus K1-5T相似性最高,为99%,与其余已发表菌株均低于97%。由以上结果可见,菌株SA-5是Bacillus属中一株嗜碱耐盐菌,并且菌株SA-5对耐碳酸盐基因的开发具有潜在的价值。