口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗免疫安全性和抗体消长规律研究

为摸清口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗免疫安全性和抗体消长规律,对试验猪群进行免疫,观察其健康状况,采用口蹄疫非结构蛋白ELISA检测非结构蛋白抗体,采用液相阻断ELISA检测O型和A型口蹄疫抗体。结果显示,疫苗免疫后,猪群健康状况良好,各时间点口蹄疫非结构蛋白抗体均为阴性;免疫前、一免后29 d、61 d、95 d、123 d,二免后30 d、64 d、92 d,A型口蹄疫抗体阳性率分别为7.14%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%,O型口蹄疫抗体阳性率分别为0、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。表明该疫苗免疫猪只后,安全性好,不会诱导动物机体产生口蹄疫非结构蛋白抗体,诱导产生的高水平A型、O型口蹄疫抗体可以维持较长时间,实施一免可维持至少4个月,实施二免可维持至少3个月。     

猪口蹄疫O型灭活疫苗不同组合免疫效果

试验主要通过仔猪口蹄疫母源抗体消减规律来确定仔猪口蹄疫O型灭活疫苗首免日龄,选择不同猪口蹄疫O型灭活疫苗进行组合免疫接种后,观察其免疫抗体效价水平变化,从而评价不同疫苗组合的免疫效果,对养猪生产指导具有重要意义。     

猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫效果评价

选择猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MAY98/BY/2010株)在两个猪场进行不同免疫剂量、不同首免日龄及与高致病性猪蓝耳病疫苗不同免疫次序试验,于加强免疫后14天、28天、42天及60天采血检测抗体,根据检测结果选择最佳免疫程序在4个辐射猪场使用,结果表明,在加强免疫后60天采血检测,抗体合格率为82.9％,超过农业部规定的免疫抗体合格率≥70％,同时也达到江苏省规定的猪口蹄疫疫苗免疫后抗体合格率≥80％要求,说明该疫苗免疫猪群后能产生很好的抗体保护率.     

犊骆驼口蹄疫母源抗体的测定及口蹄疫A-O-Asia Ⅰ型三价灭活疫苗首免日龄的确定

利用O、A型及亚洲Ⅰ型口蹄疫(FMD)抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,参照试剂盒使用说明书通过测定20峰分娩母骆驼的FMD抗体合格率及其分娩的初生犊骆驼母源抗体在0,1,7,21,35,49和63日龄的抗体水平,摸清母源抗体的消长规律,确定犊骆驼的首免日龄,在首次免疫后15,30d采样检测FMD抗体水平。结果表明:母骆驼FMD的抗体水平以及犊骆驼是否能吃到初乳决定着犊骆驼母源抗体持续的时间;在1～7日龄犊骆驼的母源抗体水平达到最高峰,7日龄后,母源抗体水平逐渐衰减,并与日龄呈负相关;根据母源抗体持续时间,确定FMD A-O-AsiaⅠ型三价灭活疫苗免疫的最佳首免日龄为45日龄,首次免疫后15,30dFMD抗体水平逐渐上升。     

猪瘟活疫苗-猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗联合免疫效果的评价

为建立一种既有效又简便的猪瘟活疫苗(CSF)和猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗(FMD O-A)联合免疫方法,达到“一针多防”的目的,通过动物免疫试验,评价了CSF和FMD O-A联合免疫的可行性。采用左、右各一针同步2点接种试验猪群(联合免疫),以2种疫苗分别单独免疫的猪群为对照,在免疫前0 d、免疫后14、40、60和90 d采集血清检测2种疫苗对应的抗体。经统计学分析发现,2种疫苗的联合免疫不影响其抗体的产生,并且能够保持抗体在猪群个体间的稳定分布。     

羊口蹄疫O型、亚洲I型二价灭活疫苗免疫剂量对O型免疫效果的影响

本实验采用不同免疫剂量,对羊免疫接种口蹄疫O型、亚洲I型二价灭活疫苗,应用O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测实验,获得实验数据,分析其抗体消长规律.结果表明:羊常规免疫计量为1ml抗体水平较好,减少剂量虽然抗体效价短时间升高,但是不能达到理想的抗体水平,而且受保护的时间不能持续,大致在90d左右抗体效价就跌到了保护的临界状态;增加剂量虽然体水平能超过预期,但是前期抗体效价上升缓慢,后期抗体水平下降很快.     

口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗(OHM/02株+AKT-Ⅲ株)纯度、免疫持续期、攻毒保护的研究

用口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗(OHM/02株+AKT-Ⅲ株)免疫12头6～9月龄口蹄疫抗体阴性牛,28日后二免,分别于接种后5 d、28 d、56 d、85 d、110 d采血,测定口蹄疫病毒非结构蛋白(NSPs)抗体及口蹄疫O型、A型ELISA抗体水平,并进行攻毒试验。试验牛免疫后5 d、28 d、56 d NSPs抗体阴性,疫苗纯度高。口蹄疫O型、A型ELISA效价28 d-110 d维持较高水平且达到99%以上保护效力,OHM/02株、A/XJNC/2010株攻毒100%保护,免疫过程安全性良好,无不良反应。     

不同厂家猪O型口蹄疫灭活疫苗免疫效果监测

为准确掌握投放安徽省的A、B、C、D 4个厂家的猪O型口蹄疫灭活疫苗在实际生产中的免疫效果,2008年秋季至2011年春季,共采集了844个猪场10 439份免疫接种后1个月左右血清样,采用液相阻断ELISA检测了O型口蹄疫抗体滴度。结果显示,4个厂家疫苗的免疫接种效果差异明显,B厂疫苗免疫效果最好,D厂疫苗次之;不同年份疫苗的免疫接种效果差异显著,2010年的疫苗免疫接种效果最好。     

猪瘟高致病性猪蓝耳病和口蹄疫母源抗体的测定及3种疫苗首免日龄的确定

为了确定仔猪免疫猪瘟、高致病性猪蓝耳病和猪口蹄疫3种疫苗的最佳首免日龄,课题组通过酶联免疫吸附试验对米东区一养猪场刚刚生产的30头仔猪开展了3种猪病母源抗体持续期测定,结果表明:母猪的抗体水平和仔猪是否吃到初乳决定着仔猪的母源抗体持续的时间;在1~7日龄仔猪的母源抗体水平达到最高峰,7日龄后,母源抗体水平逐渐衰减,并与日龄呈负相关;猪瘟、高致病性猪蓝耳病和O型口蹄疫的母源抗体持续期分别为28~32 d、30~35 d和29~34 d,根据这3种猪病的母源抗体持续期,确定了这3种疫苗联合免疫的最佳首免日龄为28~35日龄。     

不同毒株制备的两种猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫效果对比试验

本试验采用2种不同毒株的口蹄疫灭活疫苗分别对120头35日龄仔猪进行了免疫效果试验。结果显示:首次免疫时,猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)免疫组的抗体合格率和疫苗稳定性均优于使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OR/80株)免疫组。75日龄二免时,使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株+OR/80株)免疫组的抗体合格率和疫苗稳定性均优于使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)免疫组。表明两种疫苗各有其优缺点,对不同日龄段仔猪的免疫效果存在一定的差异。     

O型口蹄疫灭活疫苗对生长猪的免疫效果观察

为了考察猪O型口蹄疫灭活苗的免疫效果和免疫抗体在生长猪体内的消亡规律,选择日龄相近、体重相当共120头仔猪,按农业部推荐的免疫程序免疫,分别在初免前、初免后30天、加强免疫后30天、60天、150天采血,用O型口蹄疫正向间接血凝实验进行抗体检测。结果显示,120头实验样品初免前抗体血凝价为0.1log2±0.2,初免后30天抗体效价为4.7log2±1.2,样品平均免疫抗体合格率60.0%;加强免疫后30天、60天、120天平均抗体效价分别为:7.6log2±1.6;6.3log2±2.0;4.2log2±1.8。加强免疫后30天、60天、120天样品平均免疫抗体合格率分别为91.0%、80.0%、62.5%     

口蹄疫病毒3D蛋白对表位多肽免疫效果调节作用的研究

为了研究口蹄疫病毒(FMDV)重组蛋白3D对病毒表位抗原的免疫调节功能,笔者克隆了Asia1型FMDV的3D蛋白基因,并实现了重组蛋白在E.coli的表达及纯化。将纯化的重组蛋白3D与重组抗原按     

猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的免疫效果

为了解口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的免疫效果,对试验仔猪在28³5日龄进行了第1次免疫注射,在5835日龄进行了第1次免疫注射,在58⁶5日龄进行了第2次免疫注射,并在二免后10、30、60和90 d采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示:在二免后10 d的平均免疫抗体效价达到6.26 log2,免疫抗体合格率为91.25%;二免后30 d的平均免疫抗体效价达到6.8 log2,免疫抗体合格率为100%;二免后60 d的平均免疫抗体效价达到6.6 log2,免疫抗体合格率为99.17%;二免后90 d的平均免疫抗体效价达到6.27 log2,免疫抗体合格率为92.72%,说明猪口蹄疫O型灭活疫苗能快速诱导产生高水平的抗体,并且能够维持较长的时间。在对仔猪进行疫苗的2次免疫注射时,观察并记录了仔猪的应激反应,结果显示仔猪并没有出现较大的应激反应,说明疫苗的免疫副作用小。在全区进行全覆盖推广应用时,随机共采样1 456份血清样品进行了免疫抗体监测,其中规模养殖场监测了56户,采样数1 378头,平均免疫抗体效价6.42 log2,免疫合格率为95.23%;散养户监测了43户,采样数78头,平均免疫抗体效价6.31 log2,免疫合格率为93.1%。口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的免疫效果较好,值得在全区推广应用。     

各型FMDV VP1基因表位嵌入型蛋白SLP-MultiVP1对免疫不同小鼠血清IgG亚型的影响

利用通过Swiss-Model在线软件分析所得的乳杆菌S-层蛋白高级结构3D模拟图,应用Swiss-Pbd Viewer软件对嵌入型蛋白SLP-MultiVP1中的3型口蹄疫病毒(FMDV)不同表位位点进行标注,并用嵌入型蛋白SLP-MultiVP1和重组蛋白SLP分别免疫6周龄的BALB/c和昆明小鼠,分离3次免疫后的血清,用Mouse IgG1Ready-SET-Go和Mouse IgG2aReady-SET-Go ELISA试剂盒检测血清中IgG抗体亚型IgG1和IgG2a。通过SPSS统计学分析发现:嵌入型蛋白SLP-MultiVP1组IgG1和IgG2a水平显著高于SLP组(P<0.05),其中嵌入型蛋白SLP-MultiVP1免疫组的IgG2a显著高于IgG1(P<0.05),但是BALB/c和昆明小鼠之间无显著性差异(P>0.05)。该结果提示,嵌入型蛋白SLP-MultiVP1可能倾向于激发Th1类细胞介导的免疫应答,而且无个体差异。     

猪蓝耳病疫苗不同首免日龄免疫效果的观察

猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)变异引起的急性高致死性的传染性疾病。仔猪发病率可达100%,死亡率可达50%以上,母猪流产率可达30%以上,育肥猪也可发病死亡。近年来,在我国部分省、市出现,给我国养猪业造成较大     

猪伪狂犬病基因缺失活疫苗(SA215)免疫母猪后仔猪母源抗体消长规律及首免日龄

在研究猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA 2 15 )免疫接种母猪所产仔猪母源抗体消长规律 ,并绘制其消长曲线的基础上 ,确定了仔猪首免日龄。对免疫母猪所产仔猪于不同日龄进行抗体检测结果表明 ,全部仔猪均获得了高水平母源抗体 ,7日龄高达 2 8.56 ,6 0日龄降至 2 2 .56 ;随着日龄增长 ,抗体水平呈逐渐降低趋势 ,2次大幅下降出现在 14～ 2 1日龄、30～ 6 0日龄。对免疫母猪所产仔猪分别于不同日龄免疫接种 1头份剂量疫苗 (SA2 15 ) ,7d后采血进行抗体检测 ,结果表明 ,7日龄、14日龄、2 1日龄免疫接种仔猪均未引起明显抗体水平升高 ,反而较同期仔猪略有降低 ,30日龄和 6 0日龄免疫接种仔猪则出现了抗体水平的升高 ,其中以 6 0日龄仔猪升高幅度为大。结合母源抗体消长规律 ,确定猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA2 15 )免疫母猪所产仔猪的首免日龄为 30日龄     

猪圆环病毒Ⅱ型结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测

本研究以猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)Ⅱ型的基因组序列为材料,采用Gamier-Robson方法、Chou-Farplus 方法和Karplus-Schulz方法预测了其结构蛋白的二级结构,用Kyte-Doolittle方法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini方法预测了结构蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf方法预测了蛋白的抗原指数.然后综合评价了PCV-2型结构蛋白的B细胞抗原表位.结果表明,PCV-2结构蛋白形成α螺旋结构的能力较差,但是该蛋白含有较多的β折叠和转角结构,因而该蛋白具有丰富的二级结构.分析结果还表明结构蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中羧基端含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视.本研究将为猪圆环病毒的反向疫苗学的研究提供一定的理论依据.     

猪圆环病毒II型结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测

本研究以猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)II型的基因组序列为材料,采用Garnier-Robson方法、Chou-Farplus方法和Karplus-Schulz方法预测了其结构蛋白的二级结构,用Kyte-Doolittle方法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini方法预测了结构蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf方法预测了蛋白的抗原指数。然后综合评价了PCV-2型结构蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,PCV-2结构蛋白形成α螺旋结构的能力较差,但是该蛋白含有较多的β折叠和转角结构,因而该蛋白具有丰富的二级结构。分析结果还表明结构蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中羧基端含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视。本研究将为猪圆环病毒的反向疫苗学的研究提供一定的理论依据。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB单克隆抗体的制备及其对应表位区分析

为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞.这6株MAbs亚类鉴定均为IgG1型,轻链均为K链.间接免疫荧光试验结果表明,这6株MAbs均能够识别FMDV 3AB蛋白.采用制备的MAb对分段表达的3AB蛋白进行western blot分析,结合位点分别位于3AB的第aa 55～aa 70、aa 64～aa 79、aa130～aa145区段.该结果为进一步探索3AB蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础.     

不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫O型、A型抗体水平对比评估

目前,商品化口蹄疫检测试剂盒众多,但质量评估方法并不完善,只是在使用时通过主观判断或者简单的数据对比来评估试剂盒的检测效果。采用细胞中和抗体和O型、A型口蹄疫液相阻断ELISA方法,对不同品牌试剂盒的符合率、敏感性和特异性进行检测,从中筛选优质试剂盒应用于临床,同时为制定相应的免疫程序提供科学依据。对6种试剂盒的敏感性符合率、特异性进行数据对比发现,试剂盒E的试剂盒符合率最高,中和抗体效果表现为E试剂盒>C试剂盒>B试剂盒>A试剂盒>F试剂盒>D试剂盒;以兰州兽医研究所研制的O、A型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒为标准,结果表现为a试剂盒>b试剂盒>d试剂盒>c试剂盒>e试剂盒,试剂盒a与兰州兽医研究所试剂盒阳性符合率一致性最高。