白头翁不同提取物及复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫研究

以存活率、相对增重率、盲肠病变记分、卵囊值和抗球虫指数为判定指标,考察白头翁不同提取物及复方对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊致病性的影响(体外试验)和抗鸡柔嫩艾美耳球虫感染效果(体内试验)。体内、体外试验结果均表明,白头翁不同提取物及复方均能提高相对增重率,降低盲肠病变计分和卵囊值。抗球虫指数(ACI)检测表明,白头翁不同提取物及复方对球虫孢子化卵囊有微弱的抑杀效果,对鸡柔嫩艾美耳球虫感染预防效果较差,不宜作为鸡柔嫩艾美耳球虫病的预防和治疗药物。     

宿主GAPDH对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响

目前,关于宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。在前期研究中,我们利用相对和绝对定量同位素标记技术结合液相色谱串联质谱技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,作者拟进一步研究其中一个上调蛋白——甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。克隆鸡GAPDH基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,表达重组GAPDH蛋白,用Western blot对表达进行验证。使用q-PCR、Western blot和免疫组织化学的方法检测感染柔嫩艾美耳球虫子孢子后DF-1细胞中GAPDH的表达量,并使用抗体抑制试验检测GAPDH多克隆抗体对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。结果显示:成功克隆1 123 bp的GAPDH基因,并获得61.7 ku的重组GAPDH蛋白。q-PCR和免疫组织化学检测均显示,GAPDH在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染的DF-1细胞中的表达显著升高。抗体抑制试验表明,与相同浓度的正常兔IgG相比,50、100、200、300和400μg·mL~(-1)的抗GAPDH抗体均能明显抑制子孢子的入侵。以上结果表明,子孢子感染会引起宿主细胞GAPDH蛋白的上调,并且宿主GAPDH蛋白在子孢子入侵过程中起正调控作用。     

抗球虫剂——常山酮

常山酮(商品名 Stenorol)是法国 R-oussel-Uclaf 生产的抗球虫剂,对柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫等均有效,该药对卵囊内释出的子孢子,对第一代和第二代裂殖体有明显的抑制作用,并能消除卵囊的排出。     

Eimeria tenlla和E. acervulina对凋亡诱导抑制的研究

为了研究鸡艾美耳属球虫不同种在入侵细胞早期对凋亡诱导抑制的差异,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)和堆型艾美耳球虫(E.acervulina)纯化的裂殖子入侵马-达氏牛肾细胞(MDBK细胞)1.5 h后,对被入侵的细胞计数并计算入侵率;加入含6%乙醇的完全培养基对细胞诱导凋亡3 h,检测细胞凋亡率。结果表明,E.tenlla裂殖子和E.acervulina裂殖子入侵率为21%和43%;凋亡诱导组的凋亡率是36.98%;柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导组的凋亡率是25.77%;堆型艾美耳球虫凋亡诱导组的凋亡率是28.92%。柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导组与凋亡诱导组之间差异极显著(P<0.01);堆型艾美耳球虫凋亡诱导组与凋亡诱导组之间差异极显著(P<0.01)。柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导组与堆型艾美耳球虫凋亡诱导组之间差异显著(P<0.05)。结果提示,E.acervulina裂殖子入侵细胞并起到明显的抑制细胞凋亡作用,在入侵早期也许有类似于E.tenlla裂殖子抑制凋亡的机制;与E.tenlla裂殖子的抑制率相比略低,这可能与它的个体大小、致病能力有关。     

柔嫩艾美耳球虫含HD结构域蛋白特性和功能初步研究

鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种危害严重的肠道寄生虫病,每年都会给世界各地的养禽业带来巨大的经济损失。目前,该病主要依靠抗球虫药物进行防治,但由于药物的长期及不合理使用导致鸡球虫几乎对所有使用过的抗球虫药均产生耐药性。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫含HD域蛋白（EtHDCP）在耐药株中上调表达。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆出EtHDCP基因,构建了原核表达重组质粒pGEX-4T-EtHDCP,并成功诱导表达了重组蛋白rEtHDCP。利用qRT-PCR和Western blot对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段的转录和翻译水平进行分析,结果显示,EtHDCP在第二代裂殖子的转录和翻译水平高于其他三个阶段（未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子）。同时利用Western blot分析了EtHDCP在柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株中的翻译水平,结果显示,EtHDCP在耐药株中的蛋白翻译水平显著高于敏感株。间接免疫荧光定位结果显示,该蛋白主要定位在子孢子和裂殖子的表面以及裂殖子的胞质内。入侵抑制试验表明,抗rEtHDCP多克隆抗体可有效抑制子孢子对宿主细胞的入侵。这些结果说明该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育、耐药性的产生以及子孢子入侵宿主细胞的过程。     

3味中草药复方制剂对柔嫩艾美耳球虫的预防效果试验

为了探究常山、槟榔和甘草3味中草药制成的复方制剂预防柔嫩艾美耳球虫感染鸡的效果,试验通过建立鸡柔嫩艾美耳球虫感染模型,将复方制剂按0.25 g/kg、0.5 g/kg、1 g/kg和2 g/kg 4个剂量组对感染鸡只进行饲喂。通过存活率、相对增重率、盲肠病变、卵囊值以及抗球虫指数等指标来评价复方制剂预防鸡感染柔嫩艾美耳球虫的效果。试验结果显示,复方制剂中高剂量组的效果为161,抗球虫药效达到中等,复方制剂低剂量组、中剂量组和高剂量组的药效分别为149、152和153,均达到了抗球虫的标准。     

江苏省如皋市鸡球虫感染情况的调查分析

采用卵囊形态特征观察与动物回归试验相结合的方法,在如皋市对26个养鸡场的球虫种类及其感染情况进行了调查。结果显示:共查见柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫和早熟艾美耳球虫等6种球虫,检出率分别为53.8%、15.4%、50.0%、46.2%、26.9%和30.8%,优势种为柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫。65.4%(17/26)鸡场有球虫感染。球虫均为混合感染,其中混合感染4种球虫的最多,达58.8%(10/17)。在大于65日龄鸡群中地面平养鸡场的球虫感染率(100.0%)显著高于笼养鸡(28.6%)。球虫感染率在小于14日龄鸡群为0(0/4),15~65日龄鸡群为100%(12/12),66日龄以上鸡群为50%(5/10)。调查结果为如皋地区鸡球虫病的防控奠定了基础。     

养禽场常用抗寄生虫药物的应用

<正>1球痢灵(二硝苯甲酰胺)对鸡多种艾美耳球虫有效,尤其对毒害艾美耳和柔嫩艾美耳球虫作用较强,其作用峰期在球虫第2个无性周期的裂殖体增殖阶段(感染后第3天),兼有预防和治疗作用。可用于防治鸡、火鸡的球虫病。混于饲料中,禽预防量,125毫克/千克饲料,治疗量,250毫克/千克饲料。2氨丙啉(安保乐)本品的结构与硫胺相似,为硫胺的拮抗剂,可竞争性抑制球虫的硫胺代谢而发挥抗球虫作用。对鸡盲肠柔嫩艾美耳球虫、小肠堆型艾美耳球虫作用较强,其作用峰期在感染后第3天,即第1代裂殖体。     

养禽场常用抗寄生虫药物的应用

一、球痢灵(二硝苯甲酰胺)为新型抗球虫药,对鸡多种艾美耳球虫有效,尤其对毒害艾美耳和柔嫩艾美耳球虫作用较强。其作用峰期在球虫第2个无性周期的裂殖体增殖阶段(感染后第3d),兼有预防和治疗作用。可用于防治鸡、火鸡的球虫病。混于饲料中,禽预防量:125mg/kg饲料,治疗量:250mg/kg饲料。二、氨丙啉(安保乐)本品的结构与硫胺相似,为硫胺的拮抗剂,可竞争性抑制球虫的硫胺代谢而发挥抗球虫作用。对鸡盲肠柔嫩艾美耳球虫、小肠堆型艾     

柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达

为了构建柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Eimeria tenella serine/threonine protein kinase,Et STK)基因的真核表达重组质粒,并实现在DF-1细胞中的表达,以柔嫩艾美耳球虫子孢子c DNA为模板,PCR扩增Et STK基因,将扩展产物与真核表达质粒pc DNA3.1-flag连接,构建重组真核表达质粒pc DNA3.1-flag-Et STK,测序鉴定正确后,转染DF-1细胞进行表达,利用Western blot和间接免疫荧光(indirect immunofl uorescene assay,IFA)对其表达情况进行鉴定。结果表明重组质粒pc DNA3.1-flag-Et STK构建成功。Western blot显示在54 k Da处出现条带;IFA检测到特异性的绿色荧光,表明构建的重组质粒pc DNA3.1-fl ag-Et STK成功地在DF-1中实现了表达。本研究结果为深入了解柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的功能及球虫核酸疫苗提供了基础。     

重庆市江津地区鸡球虫种类调查

对重庆江津地区 12个养鸡场和 18个养鸡户的鸡球虫感染情况进行调查 ,调查结果显示 ,养鸡场鸡球虫感染多为混合感染 ,一般有 4种以上的艾美耳球虫。本次共检出有 7种艾美耳球虫 ,即 :柔嫩艾美耳球虫 (Eimeriatenella) ,巨型艾美耳球虫 (E.maxia) ,堆形艾美耳球虫 (E.acervulina) ,毒害艾美耳球虫 (E.necatrix) ,布氏艾美耳球虫 (E.brunetti) ,变位艾美耳球虫 (E.mivati)和和缓艾美耳球虫 (E.mitis) ,其致病虫种主要为柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫     

中药复方对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效观察

通过人工感染预防试验和治疗试验,对由常山、青蒿等5种中草药按特定配比组成的中药复方的抗球虫效果进行了试验观察。试验结果表明,以常山和青蒿为主药的该中药复方对柔嫩艾美耳球虫在预防和治疗上均有较好的效果。     

柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对几种抗球虫药的敏感性

为了探讨鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对常用抗球虫药的敏感性,采用尼卡巴嗪、氯苯胍、球痢灵、地克珠利和常山酮5种抗球虫药,对由晋球1号球虫疫苗虫株复制的病鸡进行防治试验,通过相对卵囊产量(ROP)、相对增重率、抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)和最适抗球虫活性百分率(POAA)5项指标进行综合评定.结果表明,柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对盐酸氯苯胍无抗药性,对地克珠利有轻度抗药性,对常山酮、球痢灵、尼卡巴嗪有部分抗药性,它们的抗球虫指数为187.46～246.75,达到了抗球虫效果.     

单味中草药对球虫卵囊体外抑制的试验研究

为了观察中草药对球虫卵囊体外孢子化抑制的影响,试验将不同浓度的常山、青蒿、白头翁等16味中草药与柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊在28℃条件下培养4~6 d,计数卵囊的孢子化率。结果表明:所选中草药均极显著抑制卵囊孢子化(P0.01),并随着药物浓度的增加,卵囊孢子化率呈下降趋势,其中以青蒿、使君子、草果、苦参等中草药的抑制效果最好。     

山东省潍坊地区肉鸡球虫的抗药性调查

应用石歧杂肉仔鸡,检测了采自我国山东潍坊的５种艾美耳球虫对６种常用抗球虫药的敏感性。根据最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率３项指标综合判定,山东潍坊地区的柔嫩艾美耳球虫,堆型艾美耳球虫,巨型艾美耳球虫、丰氏菌美耳球虫和缓艾美耳球虫的５个混合种对盐霉素Ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ、拉水 攻素Ｌａｓａｌｏｃｉｄ、莫能霉素Ｍｏｎｅｎｓｉｎ、马杜拉霉素Ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ和常山酮Ｈａｌｏｆｕｇ     

常山水提液对感染柔嫩艾美耳球虫肉鸡的疗效研究

为了探讨常山水提液对感染柔嫩艾美耳球虫肉鸡的疗效,试验选择体重相近的20日龄黄羽肉鸡90只,随机分为健康组、病理组和治疗组3组,观察盲肠病变并记分,同时采取盲肠内容物测定盲肠卵囊数,计算抗球虫指数,并测定血清中一氧化氮和一氧化氮合酶含量。结果表明:抗球虫指数感染组为52.7,常山组为161.4,常山组能够降低血清中一氧化氮和一氧化氮合酶含量。说明常山水提液可以抵抗球虫引起的机体损伤,抗柔嫩艾美耳球虫的效果明显。     

不同地理株柔嫩艾美耳球虫对地克珠利敏感性试验

进行了3个不同地理株的柔嫩艾美耳球虫(吉林株、山东株、黑龙江株)对地克珠利饮水剂的敏感性试验.分别给予试验组鸡1×105个孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,感染后饮水给予地克珠利药物治疗.结果表明,3株球虫的敏感性不同,其敏感顺序为:山东株＞黑龙江株＞吉林株.由此可见,柔嫩艾美耳球虫不同地理株间存在对地克珠利的敏感性差异.     

吉林市城区鸡球虫病的流行病学调查

通过对吉林城区具有代表性的鸡场进行鸡球虫病的感染情况调查,采集鸡新鲜粪便,用饱和盐水漂浮法收集卵囊,制片镜检,观察卵囊和孢子化卵囊的形状、颜色,测量卵囊的大小,鉴定出艾美耳属球虫3种,即柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫,其中柔嫩艾美耳球虫为优势种,其主要侵害鸡的盲肠,导致贫血、消瘦甚至死亡,发病多为15～40日龄的雏鸡,为有效预防鸡球虫病提供参考.     

柔嫩艾美耳球虫对禽流感疫苗的免疫增强作用研究

为了研究柔嫩艾美耳球虫对雏鸡免疫禽流感疫苗的免疫增强作用,试验将7日龄AA肉鸡随机分为4组,每组20只,1组试验鸡皮下注射柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时免疫禽流感H5亚型灭活疫苗;2组试验鸡皮下注射柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,同时免疫磷酸盐缓冲液;3组试验鸡皮下注射磷酸盐缓冲液,同时免疫禽流感H5亚型灭活疫苗;4组试验鸡皮下注射磷酸盐缓冲液,同时免疫磷酸盐缓冲液。在免疫后第7,14,21,28天,各组随机取5只鸡采血、称重,采集胸腺、脾脏、法氏囊,计算免疫器官指数,采用血凝抑制试验检测血清中禽流感抗体效价。结果表明:各组试验鸡的平均体重差异不明显,柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊与禽流感灭活疫苗共免疫不会影响试验鸡的日增重;柔嫩艾美耳球虫与禽流感疫苗联合免疫可以促进雏鸡免疫器官的生长发育,提高雏鸡免疫器官指数和禽流感抗体效价。说明柔嫩艾美耳球虫可以调节机体对疫苗的免疫反应,促进雏鸡的体液免疫应答。     

肉用仔鸡球虫病的诊断与防治

鸡球虫病是一种对养鸡业危害极大的寄生原虫病,病原包括9种艾美耳属球虫,其中以柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)及毒害艾美耳球虫(E.necatrix)致病性最强。集约化的商品肉鸡养殖场是球虫病暴发的最适宜场所。雏鸡感染球虫后,大量肠上皮细胞受损,出血。主要特征是患鸡消瘦、贫血和血痢。病愈的小鸡在长时间内不易复原,严重者死亡,其病死率有时高达40%。1病原及流行病学诊断1.1球虫生活史以柔嫩艾美耳球虫为例。鸡吞食了已孢子化的卵囊,卵囊壁在肌胃内被破坏,孢子囊进入小肠,子孢子逸出。到达盲肠的子孢子首先进入表层上皮细胞,再通过基底膜到达固…