18种中草药煎液对温和气单胞菌的抑、杀菌效果

采用琼脂扩散法(打孔法)测定了五倍子等18种中草药对2株病原温和气单胞菌(Aerom onas sobria)的抑制作用,并采用试管2倍稀释法测定抑菌效果较强的中草药对这2株温和气单胞菌的抑菌和杀菌浓度。结果显示:五倍子、苏木、地锦草、石榴皮、黄芩、虎杖和山楂对病原温和气单胞菌的抑菌效果较强;苏木、五倍子、地锦草和石榴皮4种中药对2株温和气单胞菌的最小抑菌浓度(M IC)为1.56～6.25 mg/mL之间,最小杀菌浓度(MBC)为3.12～12.5 mg/mL之间,其中五倍子的抑菌和杀菌浓度最低,分别为1.56 mg/mL和3.12 mg/mL;而金银花等11种中草药抑菌作用较小。结果表明,所选取的18种中草药中五倍子对防治由温和气单胞菌感染引起的水产动物疾病最为有效。     

30种中草药对鲟鱼源海豚链球菌的体外抑菌作用

为研究黄连等30种中草药对鲟鱼源海豚链球菌的抑菌、杀菌作用,通过水煎煮法对30种中草药进行提取,采用牛津杯打孔法,在观察鲟鱼源海豚链球菌对30种中草药敏感性的基础上,进一步采用二倍稀释法测定中草药对鲟鱼源海豚链球菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度。试验结果表明,鲟鱼源海豚链球菌对黄连、黄芩、连翘、丁香高度敏感,其中黄连的体外抑菌效果最佳,抑菌圈直径为(28.35±0.65) mm;对秦皮、山楂、女贞子、苦楝皮、石榴皮等均中度敏感;对丹参、猪苓、苍术、茯苓、贯众和生首乌低度敏感。黄连、黄芩、连翘、丁香、秦皮对鲟鱼源海豚链球菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度分别为1.95 mg/mL和3.90 mg/mL、1.95 mg/mL和15.62 mg/mL、3.90 mg/mL和7.81 mg/mL、3.90 mg/mL和15.62 mg/mL、7.81 mg/mL和7.81 mg/mL,其余中草药对病原菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度均高于15.62 mg/mL和31.25 mg/mL。综上可知,黄连、黄芩、连翘、丁香、秦皮对鲟鱼源海豚链球菌具有较好的防治效果。     

中草药体外抑杀大鲵致病性豚鼠气单胞菌的药效研究

筛选对大鲵致病性豚鼠气单胞菌有抑菌作用的中草药。采用琼脂打孔法,测定中草药在不同pH值时对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的体外抑菌圈效果。使用二倍稀释法,测定中草药在不同pH值时对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度。试验结果表明,200种中草药对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的抑菌效果各不相同,其中135种中草药具有一定抑菌作用,其余65种无抑菌作用,而不同pH值时抑菌效果亦有所不同。药液为酸性时,乌梅、五味子、五倍子及诃子的抑菌效果极强,抑菌圈明显。135种中草药对豚鼠气单胞菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度亦有所差异,其中,诃子、五倍子、石榴皮、大黄及槐角的最小抑菌质量浓度小于1mg/mL,抑菌作用最强。本试验筛选出具有很强抑菌作用的中草药。     

22味中草药对创伤弧菌和灿烂弧菌体外抑菌作用筛选

研究了22味中草药对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和灿烂弧菌(V.splendidus)的体外抑菌作用。结果显示,22味中草药对其均有不同程度的抑制作用;其中,黄连和连翘对创伤弧菌的抑菌和杀菌效果最好,最小抑菌浓度分别为0.49mg/mL和1.95mg/mL,最小杀菌浓度与最小抑菌浓度相同;黄连、黄芩、连翘和黄柏对灿烂弧菌的抑菌和杀菌效果较好,最小抑菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和3.90mg/mL,最小杀菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和7.81mg/mL。     

22味中草药对创伤弧菌和灿烂弧菌体外抑菌作用筛选

研究了22 味中草药对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和灿烂弧菌(V. splendidus)的体外抑菌作用.结果显示,22味中草药对其均有不同程度的抑制作用;其中,黄连和连翘对创伤弧菌的抑菌和杀菌效果最好,最小抑菌浓度分别为0.49 mg/mL和 1.95 mg/mL,最小杀菌浓度与最小抑菌浓度相同;黄连、黄芩、连翘和黄柏对灿烂弧菌的抑菌和杀菌效果较好,最小抑菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和3.90 mg/mL,最小杀菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和7.81 mg/mL.     

31种中草药及其复方对维氏气单胞菌体外抑菌研究

为筛选对昆明裂腹鱼源维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)有抑菌作用的中草药及复方,本研究通过煎煮法制备31种常见中草药水提取物,以牛津杯法测定各味中草药对该菌的抑菌圈直径,采用二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);选取体外抗菌活性较好的6种中草药,应用棋盘法进行15组二联药方的部分抑菌浓度指数(FIC)试验;按正交设计表配伍25组复方,同样进行药敏试验。结果显示,31种中草药中,五倍子、地榆、诃子、苏木、黄芩、黄连等6种中草药抑菌效果最好;15组联用药方均未发生拮抗作用,其中以五倍子+地榆、诃子+黄芩联用效果最好,FIC分别为0.31、0.50,表现为协同作用;综合复方中草药的抑菌作用,复方F16(五倍子∶地榆∶诃子∶苏木∶黄芩∶黄连=4∶4∶2∶5∶3∶1)的抑菌效果最佳,抑菌圈直径达23.2 mm, MIC与MBC分别为0.98 mg/mL、1.95 mg/mL,可作为昆明裂腹鱼源维氏气单胞菌抑菌药物的首选配伍组合。     

黄颡鱼源温和气单胞菌的分离鉴定及中草药体外抑菌效果研究

为探明遵义金鼎镇合江源养殖场患病黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)的致病原因,通过对患有腹水、鳍条充血和游动缓慢等症状的黄颡鱼进行了病原菌分离纯化,得到纯培养菌株MLT-1,经过回归感染证实其为黄颡鱼的致病菌,经生理生化和16S rDNA鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。同时采用乙醇提取法获得30种中草药醇提物,固体培养基打孔测试中药醇提物对MLT-1的抑菌作用,结果显示：诃子、大黄、烟叶、樟叶、桑白皮5种中草药对MLT-1的抑菌效果较好,诃子和大黄的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)均为0.49 mg/mL,烟叶的MIC和MBC均为0.98 mg/mL,樟叶和桑白皮抑杀温和气单胞菌效果相同,MIC和MBC分别为0.195 mg/mL和3.91 mg/mL。结果表明诃子、大黄、烟叶、樟叶、桑白皮5种中草药可用于防治黄颡鱼温和气单胞菌细菌病。     

100种中草药体外抑杀嗜水气单胞菌的药效研究

用琼脂扩散法(打孔法)测定了诃子等100种中草药对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的抑制作用,并用二倍稀释法测定抑菌效果较强的48种中草药对嗜水气单胞菌的最小抑菌(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示∶大部分中草药对嗜水气单胞菌有抑制作用,诃子和秦皮的抑杀效果最好,其抑菌圈直径达20 mm以上,MIC和MBC相同,都为3.91 mg/mL(诃子)和7.81 mg/mL(秦皮);红藤、仙鹤草和覆盆子等13种中草药有中等强度的抑菌和杀菌效果;雷公藤等33种中草药抑菌作用弱;而牛蒡子等52种中草药无抑菌作用。     

21种中草药及复方制剂对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用

采用试管二倍稀释法,研究了黄芩等16种中草药以及5种复方制剂对4株嗜水气单胞菌(Aeromonas hy-drophila)的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,黄芩、诃子以及复方制剂三黄汤对于嗜水气单胞菌株(AH2)的抑菌效果最好,MIC值分别为0.057、0.114、0.114g/mL,大黄、五倍子的MIC值均为0.227g/mL,金银花、茵陈、连翘以及青蒿的抑菌效果较差;诃子对嗜水气单胞菌株(AH15)的抑菌效果最好,MIC值为0.057g/mL,连翘、五倍子、金银花以及三黄汤的MIC值均为0.455g/mL;黄芩和诃子对嗜水气单胞菌株(AH43)的抑菌效果最好,其MIC值均为0.114g/mL,三黄汤、五倍子、连翘的抑菌效果较差;黄芩、诃子以及三黄汤对于嗜水气单胞菌株(AH32)的MIC值依次为0.057、0.114、0.227g/mL,连翘、大黄、五倍子的MIC值均为0.455g/mL。     

47种中草药体外抑杀嗜水气单胞菌的药效研究

用琼脂扩散法(打孔法)测定了石榴皮等47种中草药对嗜水气单胞菌的抑制作用,并用二倍稀释法测定28种有抑菌作用的中草药对嗜水气单胞菌的最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度。结果显示石榴皮的抑菌和杀菌效果最好,其抑菌圈直径超过20mm,最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓度均为7.81mg/mL;赤芍次之。虎杖等26种中草药有一定的抑菌和杀菌效果;陈皮等19种中草药无抑菌作用。石榴皮对嗜水气单胞菌的体外抑制效果最好。     

41种中草药对3种鲟源病原菌的体外抑菌效果

采用平板打孔法在观察了弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等3种鲟源病原菌对41种中草药敏感性的基础上,进一步采用二倍稀释法测定了具有良好抑菌活性的中草药对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。实验结果表明,3种病原菌对乌梅、石榴皮、地榆、杞子等均高度敏感,对杜仲、柴胡、丹参、熟地黄等均中度敏感,对麦冬、当归、胖大海、玉竹均不敏感。此外,乌梅、石榴皮、地榆、杞子对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为7.81 mg/mL和15.625 mg/mL、15.625 mg/mL和31.25 mg/mL、15.625 mg/mL和31.25 mg/mL以及15.625 mg/mL和31.25 mg/mL,而杜仲、柴胡、丹参、熟地黄等中度敏感中草药对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均分别高于31.25 mg/mL和62.5 mg/mL。     

中草药对嗜水气单胞菌的抗菌作用

在试管内测定了１８种抗中草药对来自患白点病的中华鳖稚鳖上的嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果表明，五倍子，大黄，黄芩，乌梅和连翘等５种中草药具有对嗜水气单胞菌较强的抗菌能力，其ＭＩＣ均在５０μｌ／ｍｌ以下；     

黄芩对7种水产动物病原菌的体外抑菌活性研究

采用纸片扩散法和二倍稀释法,利用黄芩水提液对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌、温和气单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌进行最低抑菌质量浓度和最低杀菌浓度的测定。试验结果表明,黄芩对鳗弧菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑菌效果,最低抑菌质量浓度均为15.63 mg/ml,最低杀菌质量浓度分别为31.25、15.63、31.25、31.25 mg/ml;黄芩对大肠杆菌、温和气单胞菌和哈维氏弧菌的抑菌效果弱于副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、金黄色葡萄球菌,最低抑菌质量浓度分别为31.25、62.51、31.25 mg/ml,最低杀菌质量浓度分别为62.5、62.5、125 mg/ml。     

中草药抑制及杀灭水产病原维氏气单胞菌效果研究

为筛选出对水产病原维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)有抑制效果的中草药,通过琼脂打孔法研究石榴皮、黄柏、五倍子、苦地丁等42味中草药对维氏气单胞菌的抑制作用,并采用试管二倍稀释法测定对维氏气单胞菌抑制效果较强的11种中草药的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果表明,地榆、诃子、赤芍、白芍、五倍子、石榴皮、乌梅、女贞子、黄柏、木瓜和青黛等11种草药,对维氏气单胞菌的抑制作用较强,其中维氏气单胞菌对诃子、地榆及赤芍高度敏感,其抑菌圈直径分别为(19.75±0.74),(17.83±2.42)和(15.25±0.76)mm。诃子、地榆、赤芍三味中草药对罗氏沼虾维氏气单胞菌抑制及杀灭作用最强,其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为31.25和62.50 g/L。     

杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种PCR检测方法的建立

杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是一种重要的鱼类致病菌,可以感染多种海淡水鱼类。杀鲑气单胞菌包括5个亚种,目前常用的生理生化特征和16S rDNA序列分析方法很难实现亚种的快速精确区分。为实现杀鲑气单胞菌亚种的快速鉴定和检测,针对我国常见的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(A. salmonicida subsp. salmonicida)和杀日本鲑亚种(A. salmonicida subsp. masoucida),本研究开发了其特异性的PCR检测方法。根据Gene Bank已公布的杀鲑气单胞菌基因组信息,选择杀鲑亚种phoB基因和杀日本鲑亚种LOC111476736基因作为目标基因,根据其序列设计特异性引物,进一步对PCR反应的退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和酶浓度5个方面进行了优化,并测试了该方法的特异性、敏感性和应用效果。结果显示,2对引物分别可以扩增出杀鲑气单胞菌杀鲑亚种522 bp的phoB特异性基因片段和杀日本鲑亚种515 bp的LOC111476736特异性基因片段。杀鲑亚种特异性引物最适退火温度为64 ℃,10 µmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/µL KOD酶的最适添加量分别为1.5、2、1.5和0.5 µL。杀日本鲑亚种特异性引物最适退火温度为64 ℃,10 µmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/µL KOD酶的最适添加量分别为0.75、1、1.5和0.5 µL。以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)、杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)、杀鲑气单胞菌其他亚种等14种其他水产病原菌或常见环境菌为模板进行PCR检测,均无特异性条带。该方法对杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的检测灵敏度为12.8 CFU/反应(菌体)或17.6 fg/反应(DNA),对杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的检测灵敏度为23.8 CFU/反应(菌体)或27.2 fg/反应(DNA)。利用杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种分别对大菱鲆(Scophthalmus maximus)进行人工感染实验,感染后取病鱼组织进行PCR检测,结果显示,本方法可以从感染后的大菱鲆中分别检测到相应病原。综上所述,本研究建立了杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种的特异性PCR检     

五倍子对3种致病菌的体外抑菌和急性毒性试验

采用试管两倍稀释法测定五倍子水煎煮液对3种鱼类常见致病菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,并进行了对鲤鱼的急性毒性试验.结果表明,五倍子煎煮液对温和气单胞菌、爱德华氏菌、柱状屈挠杆菌的最小抑菌浓度分别为6.250 mg/mL、3.125 mg/mL、0.781 mg/mL;最小杀菌浓度分别为12.500mg/mL、12.50.mg/mL、3.125 mg/mL.五倍子对鲤鱼的48 h半致死浓度为1.1015g/kg,安全浓度为0.1102g/kg.五倍子具有较好的杀菌防病效果.     

24味中草药对舌鳎源嗜水气单胞菌的体外抑菌效果

采用水提法提取诃子、知母等24味中草药的有效成分,用琼脂平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定这些中草药对舌鳎嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的抑菌圈和最小抑菌浓度(MIC),以筛选出体外抑菌效果较好的中草药。结果表明,诃子、夏枯草、青皮、苏木4种药物抑菌效果较好,其中诃子、夏枯草的抑菌效果最好,抑菌圈直径平均25mm以上,MIC为31.25mg/mL。本结果为开发中草药相关产品以及防治由嗜水气单胞菌引起的细菌性疾病提供了参考。     

16种中草药提取物对2株草鱼致病菌的体外抑杀菌作用

用纸片扩散法测定受试物的抑菌作用和二倍稀释法测定受试物最小抑菌质量浓度(MIC)及最小杀菌质量浓度(MBC)的方法,研究地肤子、小茴香、茯苓、蛇床子、牡丹皮、黄芪、陈皮、藿香、猪苓、高良姜、黄柏、苦参、昆布、肉桂、姜黄和丁香16种中草药提取物对2株草鱼致病性嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和类志贺邻单胞菌Plesiomonas shigelloides的体外抑菌作用。结果显示,茯苓对嗜水气单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达20mm以上,MIC为15.63 mg/mL,小茴香、昆布和姜黄次之,MIC均为31.25mg/mL;丁香对类志贺邻单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(18.93±0.37)mm,其MIC为31.25 mg/mL,黄芪次之,其MIC为62.5 mg/mL。     

150种中草药体外抑杀维氏气单胞菌的药效研究

采用平板打孔法测定了五倍子(Galla chinensis)等150种中草药对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的体外抑制作用,并采用二倍稀释法测定具有良好抑菌活性的54种中草药对维氏气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:五倍子(G.chinensis)、石榴(Punica granatum)皮、地榆(Sanguisorba officinalis)和乌梅(Prunnus mume)的抑菌效果最好,抑菌圈直径在20 mm以上,其中,五倍子(G.chinensis)抑菌作用和杀菌作用最强,MIC和MBC均为1.95 mg/m L;地榆(S.officinalis)次之,MIC和MBC分别为1.95 mg/m L和3.91mg/m L;虎杖(Polygonum cuspidatum)、黄柏(Phellodendron chinense)、香薷(Mosla chinensis)等16种中草药具有中等抑菌效果;木瓜(Chaenomeles sinensis)、萹蓄(P.aviculare)、桉树(P.aviculare)叶等34种中草药抑菌效果较弱;海风(Piper kadsura)藤、柴胡(Bupleurum chinense)、茵陈(Artemisia scoparia)等96种中草药无抑菌作用。     

十六种中草药及其复方对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的体外抑制作用

应用二倍稀释法测定了诃子、五倍子、石榴皮等16种中草药及其复方对大鲵(Andrias davidianus)致病性豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,应用棋盘法设计16种中草药组合的120种双联复方和10种中草药组合的120种三联复方,评估了复方的体外抑菌作用。结果表明:16种中草药对大鲵致病性豚鼠气单胞菌均有一定程度的抑菌作用,抑菌作用强弱依次为诃子、五倍子、石榴皮、大黄、槐角、覆盆子、黄芩、金樱子、肉苁蓉、丁香、川牛膝、赤芍、知母、防风、天葵子及罗汉果;在120个中草药双联复方中,5.8%为显著协同作用,82.6%为协同作用,11.6%为相加作用;在120个中草药三联复方中,29.2%为显著协同作用,87.5%为协同作用。因此,合理的中草药配伍能提高对大鲵致病性豚鼠气单胞菌的体外抑菌作用。