四种限制性内切酶对美国白蛾核型多角体病毒DNA酶解分析

从HcNPV中直接分离提纯的DNA证明具有典型的紫外吸收光谱。经琼脂糖电泳后是一条带谱。用限制性内切酶EcoRⅠ、PstⅠ、BglⅡ、PVUⅡ酶解,经琼脂糖平板电泳分别产生19、22、18、22条核酸片段。以λDNA-EcoRⅠ和λDNA-HindⅢ片段作参考,计算出各片段分子量大小,积加得平均值为94.0445×10~8。     

内切木聚糖酶与木糖苷酶预处理对麦草浆漂白性能的影响

研究了内切木聚糖酶与木糖苷酶预处理对麦草浆漂白性能的影响。结果表明，无论是内切木聚糖酶还是木糖苷酶预处理漂白浆的白度均比对照浆高，分别高出对照浆的2．5和1．9个百分点，同时漂白浆的强度也好于对照浆的强度。内切木聚糖酶和木糖苷酶混合预处理漂白浆的白度分别比内切木聚糖酶和木糖苷酶高出0．9和1．5个百分点，这表明内切木聚糖酶和木糖苷酶在纸浆预处理过程中具有协同作用。通过电镜观察发现经内切木聚糖酶和木糖苷酶预处理后纸浆的表面和横断面有许多孔隙，其中经内切木聚糖酶预处理后纸浆的孔隙比木糖苷酶要多而且大。通过X-射线衍射分析发现内切木聚糖酶和木糖苷酶均不能破坏纸浆的结晶度。     

大豆分离蛋白的限制性酶解及其功能性质研究

为改善大豆分离蛋白的功能性,使其更好的应用于食品领域,本研究利用Alcalase碱性蛋白酶对大豆分离蛋白进行限制性酶解。用Alcalase酶在酶活2000 U/g ,温度60℃,pH为8．0的条件下,酶解1h ,得水解为4．97％的产物。电泳分析结果表明：酶解后,α亚基、α’亚基和β亚基均发生水解。比较水解产物与未水解产品的功能性变化,结果发现：经酶解后大豆分离蛋白的溶解性有很大程度的提高,保水率和吸油率降低,乳化活性稍有提高。     

爱玉子基因组DNA的提取和质量分析

以爱玉子的叶片为材料,对CTAB分离总DNA的方法进行了改进,即在提取液中加入β-巯基乙醇、PVP,将CTAB的浓度提高到3%,用氯仿-异戊醇取代酚进行抽提。结果表明,改进后的方法可有效地去除杂质,防止材料褐化,获得的DNA样品OD260nm/OD280nm比值为1.8左右,质量好且产率较高,能完全满足SRAP分析及限制性内切酶酶切的要求。     

具有光肩星天牛内切聚葡糖酶结合活性短肽的筛选

内切葡聚糖酶(endoglucanases)是光肩星天牛幼虫肠道的主要纤维素消化酶.本研究以光肩星天牛内切葡聚糖酶的同工酶AgEG2为靶分子,从随机多肽噬菌体展示库中筛选与AgEG2有亲和活性的短肽,通过3轮筛选,短肽序列TPHRSPL 出现频率为33.7%,而且展示该短肽的噬菌体均对AgEG2有很高的结合能力.进一步合成短肽TPHRSPL,并对肠道纤维素酶提取液进行了Western分析,结果表明该短肽能特异结合内切葡聚糖酶的同工酶AgEG1和AgEG2,而与粗酶液中其它蛋白组分均无结合特性.表明筛选获得的短肽TPHRSPL对光肩星天牛内切葡聚糖酶具有特异结合亲和性.该短肽为研究光肩星天牛纤维素酶的特性及开发天牛的生物防治制剂奠定了基础.     

桑粒肩天牛幼虫内切-β-1,4-葡聚糖酶的纯化及性质

经丙酮沉淀、UltrogelAcA5 4凝胶过滤、Q Sepharose离子交换柱层析和聚丙烯酰胺凝胶制备电泳 ,发现桑粒肩天牛幼虫肠液中具有所有水解纤维素成分的三种消化酶 ,并且每种酶都有不同数目的同工酶。纯化出一种内切 - β- 1 ,4 -葡聚糖酶 (EG - 1 ) ,其分子量为 2 6ku ,等电点约为pI4 0。酶的最适反应温度为 4 5℃ ,最适反应pH为5 2 ;不耐热 ,5 0℃处理 30min ,酶活大大降低 ,70℃处理 2h ,几乎丧失全部活性 ,显示出该酶适合动物肠道反应环境 ,是内源性酶。     

云南切梢小蠹和横坑切梢小蠹对寄主繁殖部位的选择试验(英文)

在室内条件下,对繁殖期云南切梢小蠹和横坑切梢小蠹的竞争展开了研究。在养虫笼中放入来源同株云南松的2根木段,同时放入2种小蠹,分别放入1种小蠹,观察小蠹对其繁殖材料云南松木段的选择。试验表明,横坑切梢小蠹喜在树皮厚的木段上繁殖,即云南松树干的下部,而云南切梢小蠹喜在树皮薄的木段上繁殖,即云南松树干的上部。从产卵到新成虫羽化,云南切梢小蠹的历期明显短于横坑切梢小蠹,分别为86～89 d和120～125 d。结论:在中国云南,云南切梢小蠹对云南松的攻击能力强于横坑切梢小蠹,后者更具次期性害虫特点。     

福建柏总DNA的快速简便提取和鉴定

本文介绍了福建柏Fokieniahodginsii(Dunn)HenryetThomas总DNA的提取介质组成分 ,建立了一个快速、简便且高效提取和鉴定福建柏鲜叶、干叶、种子总DNA的方法。该方法所提DNA的产率分别为 :1 5 0～ 2 5 0 μg/g鲜叶 ,1 0 0～ 1 5 0 μg/g干叶和 1 4 0～ 1 6 0 μg/g种子 ;绝大多数粗提总DNAOD2 6 0 /OD2 80 =1 .80±0 .0 2 ;提取的鲜叶、种子和单种子胚乳总DNA皆为 4 8kb,而干叶总DNA为 5 0Kb ,都适于限制性酶切和RAPD反应 ;一般实验时间为 4h。该方法既不需氯化铯梯度离心和柱层析纯化 ,也不需氯仿 :异戊醇抽提 ,粗提的总DNA样品不经RNase消化即可用于RAPD反应或经RNase消化用于限制性酶切 ,因此 ,具有高产率、高纯度、高质量和快速简便等优点。尤其是它所提取的干叶DNA ,适于限制性酶切和PCR反应 ,解决了取材上的不便。实验中还发现 :( 1 )提取DNA之前去除叶绿素与否 ,对提取福建柏总DNA无明显影响。 ( 2 )只有去除RNA的福建柏总DNA样品 ,才能被限制性内切酶完全切开。 ( 3)RAPD模板中含RNA及一定量的蛋白质 ,均不影响扩增效果。 ( 4 )同一个体的鲜叶、干叶、种子总DNA样品 ,皆可得到完全一致的扩增产物。     

内切木聚糖酶的选择性纯化及酶解制备低聚木糖的研究

研究了超滤分离除去里氏木霉木聚糖酶中的外切-β-木糖苷酶,以及酶解制备低聚木糖。研究结果表明:用超滤的方法能完全除去外切-β-木糖苷酶,透过液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定为单带,酶解产物全部是低聚木糖,当酶解时间从2 h延长到10 h时,低聚木糖的得率从26.83%增加到54.22%;而用粗木聚糖酶酶解制备低聚木糖时,当酶解时间从2 h延长到10 h时,低聚木糖得率从17.97%下降到11.12%。因此,采用该技术可以大幅度增加总糖中低聚木糖所占的比例,显著提高木聚糖原料的有效利用率。     

枫香DNA提取方法与PCR扩增程序的优化

从SDS、CTAB、高盐低pH值3种方法中选择了CTAB法作为枫香适合的DNA提取方法,同时构建了枫香DNA的PCR扩增程序,并从Mg^ 浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、引物浓度、DNA模板用量等方面优化了PCR扩增程序。     

用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备研究进展

自然界中真菌种类很多,一些对人类有益,然而有很多会对人及动植物致病。对真菌的检测鉴定在医学、植物检疫以及真菌分类学研究方面具有重要的意义。PCR检测是目前真菌鉴定的常规检测手段,用于PCR检测的真菌基因组DNA制备是相关领域研究热点,对用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备方法进行综述。     

Dynamic riparian buffer widths from potential non-point source pollution areas in forested watersheds

Efforts to manage National Forests in the USA for wood production, while protecting water quality, are currently constrained by models that do not address the temporal dynamics of variable non-point source (NPS) areas. NPS areas are diffuse sources of contaminants contributed mostly by runoff as a result of different land use activities. Riparian vegetative buffers are often used to control contaminants from NPS areas but defining suitable widths require different policy considerations. In this study, the approach for defining suitable buffer widths is to apply a distributed process-based model that predicts potential NPS areas prone to generating runoff in relation to overland flow distances. A case study of the concept was applied to the 72 km² Pete King watershed located in the Clearwater National Forest (CNF) in central Idaho, USA. This grid modeling approach is based on a Geographic Information System (GIS) and it integrates the soil moisture routing (SMR) model with probabilistic analysis. The SMR model is a daily water balance model that simulates the hydrology of forested watersheds using real or stochastically generated climate data, a digital elevation model, soil, and land use data. The probabilistic analysis incorporates the variability of soil depth and accounts for uncertainties associated with the prediction of NPS areas using Monte Carlo simulation. A 1-year simulation for the case study location was performed to examine the spatial and temporal changes in NPS areas prone to generating runoff. The results of the simulation indicate that the seasonal variability of saturated areas determines the spatial dynamics of the potential NPS pollution. Use of this model for the design of riparian buffer widths would increase the effectiveness of decision-making in forest management and planning by mapping or delineating NPS areas likely to transport contaminants to perennial surface water bodies.     

四种桉树青枯菌DNA提取方法及PCR检测灵敏度比较

以带有青枯菌Ralstonia solanacearum的桉树组织为材料,采用4种不同的提取方法抽提青枯菌DNA,同时利用青枯菌的特异性引物进行PCR扩增,比较了4种DNA的提取方法及PCR检测的灵敏度。结果表明,煮沸法和热裂解法操作相对简单,但检测灵敏度较低,检测限分别为104CFU/mL和103CFU/mL;简化提取法和试剂盒法检测效果较好,均可检测到102CFU/mL的青枯菌;简化提取法比试剂盒法操作更简单,检测成本低,具有更高的应用价值。     

桤木群体遗传分化研究I.DNA提取和PCR条件的建立

桤木(ＡｌｎｕｓｃｒｅｍａｓｔｏｇｙｎｅＢｕｒｋ)为桦木科(Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ)植物,主要分布于四川盆地及其周边地区。桤木喜光、喜湿,根系发达,对土壤要求不严,适应性强,在长江中下游地区防护林建设中具有重要作用。国外对桤木属(Ａｌｎｕｓ)植物的研究起步较早,主要集中于生理生化方面包括生长、固Ｎ、抗涝性以及种间杂交研究等[1　3]。虽有学者利用ＲＦＬＰ研究其核糖体ＤＮＡ的基因结构、以同工酶技术研究桤木属的群体遗传变异[4　6],但未见应用ＲＡＰＤ技术的研究报道。随着现代生物技术的发展,生物多样性的检测技术日趋成熟和多…     

土壤微生物总 DNA 提取及其 PCR 优化

采用3种不同土壤微生物总 DNA 提取方法对广东省乐昌杨东山十二度水自然保护区的样地土壤进行比较研究,进一步通过 PCR 扩增,研究牛血清白蛋白(BSA)对整个 PCR 扩增过程的影响。结果表明：试剂盒提取法相对于其他两种提取方法更加方便有效,当土壤样品量比较大时,直接提取法是最经济有效的方法;而在土壤微生物的 PCR 扩增实验中,加入2μl 的 BSA,可以有效地抑制腐殖酸等对后续 PCR 扩增的影响。     

转基因杨树外源基因PCR检测模板DNA的快速制备

用带盖离心管定量取转基因毛白杨组培苗及其室外8a生植株叶片,加入DNA提取缓冲液研磨,离心后取上清液稀释5倍。取1uL作为PCR模板DNA检测杨树外源Bt和NptII基因。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,目的条带清晰,可重复性强。     

PCR-SSCP用于针叶树种遗传分析的可行性

利用松树单倍体胚乳,双倍体的针叶材料,扩增了叶绿体基因组和核基因组的５个ＤＮＡ片段,研究了ＳＳＣＰ这一分析方法的可靠性。结果表明ＳＳＣＰ分析方法具有坚实的分子基础、较高的分辨率和试验重复性。对ＳＳＣＰ谱带在杂交子代和单倍体胚乳的分离分析,证明了ＳＳＣＰ还具有良好的遗传稳定性。     

桉树随机引物PCR反应体系优化研究

以桉树DNA为模板,采用单因素试验方法研究dNTP浓度、Mg2＋浓度及退火温度对桉树随机引物PCR反应结果的影响。试验结果表明,最优的反应体系为：20μL的PCR反应体积中,10×Buffer2.0μL,Mg2＋（25 mmol/L）1.28μL,dNTP（10 mmol/L）0.4μL,Primer（10μmol/L）2.0μL,Taq（5 U/μL）0.2μL,DNA2.0μL;最优扩增程序：94℃预变性2 min,然后进行35个循环（94℃变性30 s,36℃退火30 s,72℃延伸2 min）,最后72℃延伸10 min。     

杉木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择

目的 筛选适用于杉木不同组织荧光定量PCR分析的稳定内参基因,提高杉木实时荧光定量PCR试验准确性,为杉木体内各个基因表达分析提供合适内参基因。 方法 通过实时荧光定量PCR获取GAPDH、EF1α、18S rRNA、28S rRNA、UBQ、UBC与Actin 7个候选内参基因在杉木无性系的根、茎和叶中的溶解曲线与Ct值;利用软件geNorm、Normfinder和BestKeeper对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过分析2个纤维素合酶基因ClCesA1和ClCesA2在杉木不同组织部位的相对表达情况,对候选内参基因的稳定性进行验证。 结果 geNorm、Normfinder和BestKeeper分析结果均表明：在杉木根和茎中最稳定的内参基因是EF1α和Actin;geNorm、Normfinder结果显示杉木叶中稳定的内参基因是UBQ和EF1α,BestKeeper显示杉木叶中最稳定合适内参基因是EF1α和Actin。以Actin与EF1α作为内参基因,荧光定量PCR分析表明,ClCesA1和ClCesA2基因的相对表达量在杉木不同组织中均有所不同,ClCesA2的相对表达量在各个组织中均高于ClCesA1。以不同内参基因作为试验内参基因分析ClCesA1和ClCesA2的表达情况得到,ClCesA1和ClCesA2在各个组织中的相对表达量排序主要为茎>叶>根。 结论 7个候选内参基因中,杉木不同组织中稳定表达的为Actin与EF1α,适合作为表达分析的内参基因;28S rRNA的表达稳定性低,不适合作为杉木定量PCR分析的理想内参基因。