应用高压液相色谱测定苏云金杆菌发酵液中的苏云金素

通过正交试验将测定苏云金素所用的HPLC流动相确定为:0.075M磷酸二氢钾水溶液,加1％甲醇并用磷酸调pH至2.5。所选定的色谱条件可保证苏云金素的分离度为100％。苏云金素浓度从0.6μg/ml至900μg/ml,其峰面积与素的含量之间呈很好的直线关系。苏云金素的最低检出量为2.25×10~(-3)ng。用发酵样品进行测定,不同浓度素的峰面积对数与生测的试虫死亡机率值之间的相关系数为0.998。以HPLC法和昆虫生测法同时测定结果各重复间的变异系数(C.V.)为0.2～1.5％,测出浓度与实际浓度的平均不符合率为2.4％;昆虫生测法的测定结果各重复间的变异系数为14.6～16.2％,测出浓度与实际浓度的平均不符合率为17.0％。用这两种方法同时测定了3个苏云金素发酵样品中素的浓度,两种方法所得结果的平均符合率为86.84％。     

苏云金素高产菌株的选育

用硫酸二乙酯(DES)处理苏云金杆菌CT-43菌株,得到了菌落形态、菌形和产生褐色素三种类型的突变株。光滑型(S-型)菌落自发突变的比例依亚种的不同而不同,CT-43菌株高达13.0％,苏云金亚种为10.6％,以色列亚种为3.9％,库斯塔克亚种不产生S-型菌落,S-型菌落依DES处理CT-43菌株芽孢时间的延长而增加,处理90分钟达49.0％。除个别S-型菌落外,均不产生苏云金素。诱变产褐色素菌落的频率为1.4％,它们都不产苏云金素。菌形变异株有仅芽孢,仅伴孢晶体,芽孢和伴孢晶体,营养体和芽孢,营养体和伴孢晶体,营养体、芽孢和伴孢晶体发生变异六种类型,它们产生苏云金素的水平各不相同。还获得了苏云金素产量比出发菌株明显提高的二个菌株。     

苏云金素发酵培养基的优化设计

采用Plackett-Burman设计对出发培养基各种成分影响苏云金芽孢杆菌中华亚种CT43发酵合成苏云金素的效应进行评价,筛选出有显著影响效应的因素为葡萄糖和黄豆饼粉。利用最陡爬坡路径试验逼近最大苏云金素产出区域,找到后续试验中心点。综合中心组合设计和响应面分析法确定显著因素的最佳浓度。优化后培养基组成为(g/L):葡萄糖22.8g、黄豆饼粉32.5g、酵母抽提物3.0g、蛋白胨4.5g、玉米浆3.0g、KH2PO42.0g、MgSO4.7H2O 0.15g、MnSO4.H2O0.02g,苏云金素产量可达3.2g/L,比出发培养基提高2倍以上。     

苏云金素对昆虫细胞株的毒力试验

苏云金杆菌伴孢晶体毒素对昆虫细胞株的毒性以及用昆虫细胞株测定伴孢晶体毒素的含量,国内外都发表了一些研究报告,并有所进展。然而,苏云金素对昆虫细胞株的毒性尚未见这方面的报告,本文将简报这一研究结果。     

高产苏云金素培养基和培养条件的优选

用正交试验的方法筛选了苏云金杆菌高产苏云金素的培养基配方和培养条件。在第一次正交试验筛选出的6种培养基配方的基础上,对培养基成分和用量作调整后进行第二次正交试验,筛选出五种培养基配方。将这11种培养基用3个菌株继续评选,尽管不同菌株在同一培养基中产苏云金素的量不同,但3个菌株产苏云金素量最高,且稳定的培养基匀为M_3培养基。正交试验的最后培养条件:温度32℃、pH6.5、通气量最大,转速200rpm、接种菌龄16小时、接种量3％、培养24小时。同时,还对苏云金菌杆CT—43菌株在培养基M_3中不同发酵时间的细胞数、pH、还原糖、氨态氮和可溶性磷以及苏云金素的杀虫活性进行了检测。     

苏云金素对东亚小花蝽捕食作用的影响

采用二次回归最优设计，研究苏云金素对东亚小花蝽捕食作用的影响，得出日均捕食量（ｙ）与猎物（ｘ１）和捕食者（ｘ２）之产作关系模型。处理捕食数量回归方程：ｙ＝－０＼００２１ｘ１＾２＋１．２１１ｘ２＾２＋０．８８２２ｘ１－１０，３４６５ｘ２－０．０６４９ｘ１ｘ２＋１．７１７４；对照捕食数量回归方程：ｙ＝－０．００１７ｘ１＾２＋０．７７３４ｘ２＾２＋０．６９４１ｘ１－６．４９１４ｘ２－０．０４７４ｘ１ｘ２     

苏云金素对东亚小花蝽捕食作用的影响

采用二次回归最优设计，研究苏云金素对东亚小花蝽捕食作用的影响，得出日均捕食量（ｙ）与猎物（ｘ１）和捕食者（ｘ２）之间互作关系模型。处理捕食数量回归方程：ｙ＝－０．００２１ｘ２１＋１．２１１２ｘ２２＋０．８８２２ｘ１－１０．３４６５ｘ２－０．０６４９ｘ１ｘ２＋１．７１７４；对照捕食数量回归方程：ｙ＝－０．００１７ｘ２１＋０．７７３４ｘ２２＋０．６９４１ｘ１－６．４９１４ｘ２－０．０４７４ｘ１ｘ２－０．４６３６。综合定性分析和定量分析结果，苏云金素处理东亚小花蝽若虫，减弱了其对二斑叶螨卵的捕食能力，但二者的差异不显著，对种群变化影响不明显     

苏云金素对几种农林卫生害虫的杀虫活性

在室内用加毒饲料或沾毒叶片喂饲等感染方法，分别测定了苏云金素对鞘翅目、鳞翅目、双翅目的同翅目等１４种农林卫生害虫的毒力。结果表明苏云金素对所试昆虫的幼虫均有一定的毒杀或抑制作用，其ＬＣ５０值从０．６３８μｇ／ｍｌ至６０３．２２μｇ／ｍｌ不等，因试虫种类、早龄而异。苏云金素对玉米象和茄２８星瓢虫成虫毒力较低，对玉米象的ＬＣ５０为４１０．５２μｇ／ｍｌ；以５０～４５０μｇ／ｍｌ浓度感染２８星瓢虫成虫，     

苏云金素在水中和植株上的衰减与残留

用ＨＰＬＣ检测了苏云金素在鱼塘水和清水中的衰减速率。清水中该物质的半衰期长达４３３小时；在鱼塘水中苏云素的衰减呈双指数消除模型，开始消除半衰期为２．４３－１０．６８小时，终末消除半衰期为１２８．５７－１４２．０１小时。     

苏云金素对几种农林卫生害虫的杀虫活性

在室内用加毒饲料或沾毒叶片喂饲等感染方法，分别测定了苏云金素对鞘翅目、鳞翅目、双翅目和同翅目等１４种农林卫生害虫的毒力。结果表明苏云金素对所试昆虫的幼虫均有一定的毒杀或抑制作用，其ＬＣ＿（５０）值从０．６３８μｇ／ｍｌ至６０３．２２μｇ／ｍｌ不等，因试虫种类、虫龄而异。苏云金素对玉米象和前２８星瓢虫成虫毒力较低，对玉米象的ＬＣ＿（５０）为４１０．５２μｇ／ｍｌ；以５０～４５０μｇ／ｍｌ浓度感染２８星瓢虫成虫，死亡率仅４～３２％，其产卵量明显低于对照组，但对卵的孵化率没有影响。     

苏云金素对智利小植绥螨及其猎物二斑叶螨的毒力测定

苏云金素处理后第3天智利小植绥螨和二斑叶螨幼螨的LC_(50)分别为211.33μg/ml和114.58μg/ml。两种雌成螨的产卵量第2天即明显减少,高剂量处理后3～4天,导致产卵停止。处理后第5天,智利小植绥螨和二斑叶螨成螨的LC_(50)分别为843.19μg/ml和279.88μg/ml。试验结果表明,苏云金素对两种幼螨是一种高效、无选择性的杀螨剂,对智利小植绥螨的卵和成螨毒性相对较低,但能抑制其雌成螨的产卵量,降低种群趋势指数,在释放智利小植绥螨期间应尽量避免用药。     

苏云金素防治棉铃虫及对其主要天敌影响的研究

田间测试了苏云金素对棉铃虫及其主要天敌的影响。苏云金素与其他供试Bt制剂比较，对紫外线相对稳定，能抵抗田间不良环境的影响，药后7天，棉铃虫死亡率为92.59％。施药后15天，存活幼虫中有42.86％仍在叶部活动，苏云金素对天故的影响程度相对较小，施药后东亚小花蝽和中华草蛉种群数量增加，而龟纹瓢虫种群数量一直处于较低水平。结果表明，苏云金素对棉铃虫具有明显的控制作用，能够减少蕾铃被害数量，达到保产增收的目的。     

苏云金素对智利不植绥螨及基猎物二斑叶螨的毒力测定

苏云金素处理后第３天智利小植绥螨和二斑叶螨幼螨的ＬＣ５０分别为２１１．３３μｇ／ｍｌ和１４．５８μｇ／ｍｌ。两种雌成螨的产卵量第２天即明显减少，高剂量处理后３－４天，导致产卵停止。处理后第５天，智利小植绥螨和二斑叶螨成螨的ＬＣ５０分别为８４３．１９μｇ／ｍｌ和２７９．８８μｇ／ｍｌ。试验结果表明，苏云金素对两种幼螨是一种高效，无选择性的杀螨剂，对智利小植绥螨的卵和成螨毒性相对较低，但能抑制其成螨的     

苏云金素与苏云金杆菌芽孢晶体混剂对小菜蛾的增效作用

将苏云金素和苏云金杆菌的孢晶制剂分别作为单一制剂，用混和饲料感染法在室内测定苏云金素分别与苏云金杆菌ＨＤ－１、ＣＴ－４３、８１－６、ＷＰ－２等４个菌株孢晶制剂的混剂对小菜蛾幼虫的协同作用。按Ｓｕｎ－Ｊｏｈｎｓｏｎ毒力指数法计算结果表明，苏云金素对所有供试菌的孢晶制剂都有增效作用，共毒系数从１２７．４３至４１５．６２不等。当混剂以芽孢晶体为主要活性组分，苏云金素占全部活性组分的１６．７％情况下增效作     

高效液相色谱测定烯效唑含量

本文叙述了采用高效液相色谱法,以甲醇作流动相测定烯效唑含量,该方法标准偏差为０．３８０７,变异系数为０．５１％,平均回收率１００．１４％,方法线性关系良好,相关系数为０．９９９９。     

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱方法快速测定小麦中的咪鲜胺残留

建立了简便、快速测定咪鲜胺在小麦籽粒中残留量的方法。前处理采用以乙腈作提取剂、PSA(primary secondary amine,N-丙基乙二胺)为分散净化剂的QuEChERS方法,并利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)在多反应离子监测模式下进行检测,外标法定量。在0.001 ~0.1 mg/kg 范围内线性关系良好,相关系数为0.999 4。结果表明,在3个添加水平(0.001、0.01和0.1 mg/kg)范围内的平均回收率为91.8% ~98.3%,相对标准偏差为3.7% ~7.0%,咪鲜胺在麦粒中的定量限为0.000 1 mg/kg。     

液相色谱与气相色谱法测定小麦中丙环唑(Propiconazole)的残留

用高压液相色谱紫外检测法,在波长229纳米处测丙环唑;气相色谱则采用电子捕获检测器。两法均以甲醇作样品的浸提溶剂,用液-液分配进行初步净化。如用气相色潜电子捕获检测器,需用氧化铝柱层析进一步净化。两法的回收率都大于80％。气相色谱法对样品的最低检出浓度为O.02毫克/公斤,液相色谱法则为0.4毫克/公斤。     

快速溶剂萃取-高效液相色谱串联质谱测定水果和果汁中的多菌灵

应用快速溶剂萃取技术（ASE）-高效液相色谱串联质谱（HPLC／MS／MS）建立3种水果和3种果汁中多菌灵的新分析方法。以甲醇和氢氧化钠溶液提取,固相萃取MCx柱净化,质谱检测器检测。实验证明,多菌灵回收在92．0～96．0％,相对标准偏差在3．2～7．6％。多菌灵在样品中的最低检出浓度为2．0μg／kg。     

液相微萃取-高效液相色谱测定水中甲霜灵残留的研究

文章建立了水中痕量甲霜灵残留的液相微萃取-高效液相色谱(LPME-HPLC)检测方法.详细研究了萃取溶剂、体积、萃取时间、搅拌速度、温度、盐度等因素对液相微萃取的影响,确定了最佳萃取条件:甲苯作萃取剂,萃取剂体积2μL,搅拌速度300r/min,30℃条件下萃取30min,盐度8%.此条件下甲霜灵的最低检出浓度为0.86μg/L.相对标准偏差(RSD)3.8%～5.4%.对甲霜灵标准水溶液测得加标回收率为95.0%～99.2%,实际水样加标回收率93.8%～99.6%.富集倍数60.3倍.