芥菜真空渗入遗传转化体系适宜苗态的建成

通过0～4℃低温处理芥菜种子和春秋7个播期试验,研究了根癌农杆菌菌株GV3101（携带CaMV CABB--BII和Bari-1基因VI）和LBA4404（携带GUS基因）转化芥菜的真空渗入高效遗传转化体系的适宜苗态建成方法。芥菜种子经50℃温烫10min、23℃浸种2～6h、催芽20h,或50℃温汤10min、23℃侵种5h,不催芽,然后置0～4℃低温下处理25d,种植大田,在长日照条件下易形成适宜真空渗入遗传转化苗态;圆叶芥9月20日、9月30日和次年2月27日露地播种,雪里蕻9月30日和次年2月27日露地播种,易形成真空渗入遗传转化的适宜植株形态。     

小白菜植株原位真空渗入遗传转化相关因子的研究

在 GV310 1和 L BA4 4 0 4 2个农杆菌菌株的介导下 ,以 3个品种小白菜 (Brassica campestris L.ssp.chinensis var.communis Tsen et L ee)为试材 ,对影响小白菜植株原位真空渗入遗传转化效率的相关因子进行了研究。结果表明 ,不同小白菜基因型的转化效率不同 ,其中黄心乌的转化率最高 ;不同菌株的转化效率亦有差异 ,L BA4 4 0 4的转化效率高于 GV310 1;植株打薹后 10 d转化率高于其他几个时期 ;植株大小对转化率的影响不显著。     

大白菜和油菜真空渗入遗传转化法初报

在携带ＣａＭＶ Ｃａｂｂ Ｂ－ＪＩ株系基因Ⅵ的根癌农杆菌菌种ＧＶ３１０１的介导下,对大白菜、油菜幼苗生理状态,真空渗入时间及不同处理部位和叶面造伤等的处理与遗传转化效果的关系进行了比较研究。结果表明,经自然春化后,大白菜、白菜型油菜植株长至４￣５片叶,甘蓝型油菜、芥菜型油菜植株长至７￣９片叶,花薹已抽出时,为真空渗入最适苗态。大白菜自然春化植株移栽缓苗（３ｄ）,或黑暗处理（８ｈ）均可显提高其转     

小白菜植株原位真空渗入遗传转化适宜苗态建成方法的研究

低温处理小白菜（Brassica Campestris ssp.Chinensis var.communis Tsen et Lee)种子和春秋6个播期实验，研究了小白菜春化和植株原位真空渗入遗传转化适宜苗态的建成方法。结果表明，小白菜种子经50℃温烫10min,23℃浸种4h，催芽12h后，在0－4℃低温下，上海青处理17d，黄心乌处理25d，四月慢处理29d，7－9℃黄心乌处理25d，播种于大田，在长日照下均可完成春化，形成适宜植株原位真空渗入遗传转化的苗态。上海青、黄心乌和四月慢9月7日露地播种均可完成春化，形成适宜植株原位真空渗入遗传转化的最佳苗态，上海青和黄心乌2月17日播种也可完成春化，形成适宜植株原位真空渗入遗传转化的苗态。     

芥菜农杆菌高效遗传转化体系初步建立

采用农杆菌导入法，探讨了影响芥菜农杆菌遗传转化效率的因素，优化了参数，初步建立了以MS 6-BA(2．0mg/L) NAA(0．2mg/L)为分化培养基，预培养时间3或4d，共培养时间4d，农杆菌浓度D600nm为O．5，浸菌时间10min，筛选压Kan为25mg/L的遗传转化体系。     

大白菜和油菜真空渗入遗传转化法初报

在携带ＣａＭＶＣａｂｂＢ－ＪＩ株系基因Ⅵ的根癌农杆菌菌种ＧＶ３１０１的介导下,对大白菜、油菜幼苗生理状态、真空渗入时间及不同处理部位和叶面造伤等的处理与遗传转化效果的关系进行了比较研究。结果表明,经自然春化后,大白菜、白菜型油菜植株长至４～５片叶,甘蓝型油菜、芥菜型油菜植株长至７～９片叶,花薹已抽出时,为真空渗入最适苗态。大白菜自然春化植株移栽缓苗（３ｄ）,或者黑暗处理（８ｈ）均可显著提高其转化率。在吸力为１４．４ｍ３／ｈ的真空泵下处理１ｍｉｎ后,迅速打开真空泵气阀升压变常压,再关闭阀门抽真空３０ｓ的转化效果较好。仅处理叶片转化率可高达１１．２０％,叶面造伤处理对转化率没有明显影响。     

根癌农杆菌介导获得粳稻转基因植株

以水稻粳稻品种空育131、垦鉴稻6号、垦鉴稻7号为材料,用根癌农杆菌感染成熟胚诱导的愈伤组织,将反义蜡质基因导入受体材料。经两次抗性筛选后,转入分化培养基中分化培养后获得转基因小苗。将转化植株进行GUS染色、PCR鉴定,能证明外源目的基因已经整合到植株中。     

用根癌农杆菌介导获得籼稻转基因植株

用携带p13W4质粒的根癌农杆菌EHA105感染籼稻龙特甫品种的幼胚愈伤组织，经共培养并在潮霉素25－50mg/L浓度条件下筛选2－3次，获得了对潮霉素表现抗性的愈伤组织，其愈伤组织转化频率为25.3%,将抗性愈伤组织转入分3化培养基培养形成植株，经GUS活性测定和PCR检测，结果证明外源基因确已导入这些转基因植株之中。     

根癌农杆菌介导的番茄遗传转化

利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA101携带LycB基因（番茄红素β-环化酶）和潮霉素抗性基因，以东农704、708、709三个番茄品种的子叶、茎段为转化受体对番茄进行遗传转化，经PCR分子检测初步证明，目的基因LyeB已整合进番茄基因组中．     

农杆菌介导水稻幼胚转化获转基因植株

本研究以根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４（ｐＴＯＫ２３３）为供试菌株,以水稻幼胚为供试材料,对影响农杆菌介导基因的转化效率的因素进行了研究,确立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。采用所确立的转化体系转化了Ｒａｄｏｎ、中国９１、０２４２８ ３个水稻品种（系）幼胚,结果表明,ｇｕｓ Ａ基因的瞬时表达率均在７０％左右,最高为７６％;ｇｕｓ Ａ基因稳定表达率均在２０％以上,平均为２３％。转基因植株的ＧＵＳ活性检测及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明,外源基因事于水稻基因组中,进行了有效地表达,且能稳定地遗传给后代,外源基因在后代遗传符合孟德尔遗传规律。     

甘蓝种和芥菜型油菜细胞质的遗传多样性

对36份供试材料（15份甘蓝种材料、12份芥菜型油菜、4份不同细胞质类型的甘蓝型油菜、2份白菜型油菜及黑芥、埃塞俄比亚芥、芸芥各1份）进行叶绿体和线粒体SSR分析。7对多态性叶绿体特异的SSR引物在参试材料中共检测到31条多态性条带,每个位点等位基因为3~8个,平均4.43个,PIC值为0.234~0.711,平均为0.550。 2对线粒体特异的SSR引物检测到多态性条带数分别为3和5,PIC值分别为0.409和0.558。将线粒体与叶绿体的SSR标记合并,36份材料的遗传相似系数为0.538~1.000,在遗传相似系数 0.700 处,36份材料可明显分为5类,分别为芥菜型油菜、甘蓝型油菜和白菜型油菜、埃塞俄比亚芥和黑芥、甘蓝、芸芥,结果与传统的分类一致。芥菜型油菜内存在4种单倍型,而甘蓝仅有一种单倍型,芥菜型油菜材料间的细胞质遗传多样性高于甘蓝种材料间的细胞质多样性。     

白菜型冬油菜与芥菜型油菜远缘杂交亲和性分析

采用蕾期人工剥蕾授粉方式,分别对白菜型冬油菜与芥菜型油菜进行种内、种间杂交,用荧光显微镜观察杂交后的花粉 柱头组织,同时用TTC染色法检测花粉活力,分析亲和性。结果表明,白菜型冬油菜品种内姊妹交、白菜型冬油菜种内不同品种杂交、芥菜型油菜与白菜型冬油菜种间杂交、白菜型与芥菜型油菜种间杂交亲和指数依次为0.350、0.117、0.113、0.037;试验中不同处理的花粉 柱头互作难易程度表现为白菜型冬油菜品种内姊妹交>白菜型冬油菜种内不同品种杂交>芥菜型油菜与白菜型冬油菜种间杂交>白菜型与芥菜型油菜种间杂交;花粉活力鉴定结果与花粉 柱头互作难易程度次序基本相似。白菜型冬油菜与芥菜型油菜正反交的亲和性,以芥菜型油菜作为母本亲和指数较高。     

榨菜和紫甘蓝种间周缘嵌合体有性生殖特性研究

对榨菜(Brassica juncea)和紫甘蓝(Brassica oleracea)种间周缘嵌合体TCC(LⅠ-LⅡ-LⅢ=T-C-C,LⅠ为茎尖分生组织层最外层;LⅡ为中间层;LⅢ为最内层。T表示榨菜,C表示紫甘蓝)的有性发育、生殖器官和生殖特性等进行研究。结果发现,TCC嵌合体的花蕾和花瓣的大小介于榨菜和紫甘蓝之间,而花序形态,雄蕊、雌蕊的长度以及花粉粒的大小等性状在很大程度上与紫甘蓝接近,花瓣的颜色和香气则与榨菜相同。这些研究结果说明花器官的有些性状由茎尖分生组织的LI决定(花色、香气),而有些性状很大程度上决定于内部细胞层LⅡ和/或LⅢ(雌雄蕊大小、花粉粒),还有些性状则是由LⅠ和LⅡ共同决定(花瓣大小)。此外,对TCC嵌合体进行蕾期自交、杂交的结果显示TCC嵌合体可以产生果实且坐果率正常,但角果发育到一定大小即停止生长且不能产生种子。产生这一结果的原因可能是TCC嵌合体的花粉粒(来自LⅡ)与雌蕊的的柱头表皮(来自LⅠ)相互识别有障碍,亦或是受精卵发育受阻导致。     

芥菜型油菜自交亲和性变异分析

以来自不同国家、不同地区的34份芥菜型油菜为试验材料,对芥菜型油菜自交亲和性进行了分析,结果表明,芥菜型油菜大部分为自交亲和类型,但芥菜型油菜的自交亲和性差异较大,亲和指数在0.25～9.73间.这种差异不仅存在于品种间,而且存在于亚种间.在34份参试材料中,2个品种表现为自交不亲和(0<亲和指数<1.00),14个品种表现为自交亲和(亲和指数>1),18个品种表现为高自交亲和(亲和指数>4.00).自交亲和性因地区而异,虽然我国有的芥菜型油菜品种的自交亲和性较高,但是整体存在较大的差异,有自交亲和品种,也有自交不亲和品种.芥菜型油菜是自交亲和植物,自交亲和材料中也有自交不亲和类型,因而通过定向培育可育成自交不亲和系,对进一步利用杂种优势、大量筛选找到优良杂交组合并进行杂交种的生产具有重要的意义.     

单嘧磺酯钠诱导芥菜型油菜雄性不育的作用效果

以3份不同芥菜型油菜自交系为材料,研究单嘧磺酯钠(MES)对芥菜型油菜的杀雄效果,同时利用细胞学观察对芥菜型油菜花粉败育特征进行探讨。结果表明,植株叶片喷施0.075 mg/L和0.1 mg/L的MES均能引起芥菜型油菜不育,高质量浓度的MES处理对农艺性状的影响更显著,细胞学观察发现MES诱导的芥菜型油菜雄性不育与绒毡层发育异常相关。研究结果为MES对芥菜型油菜的最佳杀雄浓度提供参考,并为其化学杀雄育种工作奠定理论基础。     

芥菜型油菜再生体系的影响因素

对新疆芥菜型油菜４个单、双低吕系子叶柄再生频率的影响因素进行了研究,其中子叶柄日龄、６－ＢＡ、ＡｇＮＯ３、卡那霉素浓度及基因型等因素对不定芽的再生率有很大影响。试验结果表明：萌发４～５ｄ的幼苗子叶柄再生频率最高;６－ＢＡ、ＡｇＮＯ４对不定芽分化的促进效果在不同品系中有大差异,通常浓度为４～６ｍｇ／Ｌ。不同品系对卡那霉素的耐受力有很大不同,其中新９５－Ａ在Ｋａｎ１５ｍｇ／Ｌ时仍有４．１７％的绿苗率;     

芥菜型油菜叶片黄化突变体的初步研究

为了揭示芥菜型油菜叶片黄化突变体的黄化机理,通过田间统计、叶绿素测定和同工酶分析,初步研究了芥菜型油菜叶片黄化突变体L638-y的生物学特性。结果表明,与原始材料L638-g相比,黄化突变体L638-y的子叶宽度、株高、一次分枝数、单株产量均减少,始花期推迟1 d,生育期减少1 d,说明叶片黄化突变对植株发育的进度影响较大;黄化突变体L638-y的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量均明显降低,特别是叶绿素b含量锐减,说明突变影响了叶绿素a向叶绿素b的转变;黄化突变体L638-y与原始材料L638-g叶片的过氧化物酶和酯酶同工酶的条带数目以及条带亮度均无明显差异。提示芥菜型油菜黄化突变体L638-y可能为缺总Chl型,导致叶片缺绿的原因为叶绿素代谢异常。     

钒胁迫下枸杞和芥菜幼苗蛋白的分子分布研究

通过G-75凝胶层析结合电泳分析,研究了不同V(Ⅴ)浓度胁迫下枸杞和芥菜的蛋白分子分布。经过凝胶层析后出现两个紫外吸收峰,第一峰主要集中在8号至15号管,第二峰集中在25号至33号管。对第一紫外吸收峰的电泳分析表明,V胁迫下植物蛋白的分子分布发生了变化:当V浓度为10 mg·L~(-1)时,枸杞根产生了分子量为58.6 KD蛋白,茎产生了分子量分别为64.5、46.9KD两种蛋白;当V浓度增大到20 mg·L~(-1),叶产生了分子量为20 KD蛋白。随着V胁迫浓度增大,芥菜中分子量为33.9 KD和36KD两条蛋白条带逐渐变浅,而27.3 KD蛋白条带逐渐加深。枸杞幼苗第一洗脱峰蛋白中V含量随V胁迫浓度增大而增加,而芥菜叶在V≥10 mg·L~(-1)时V含量降低。这与不同植物蛋白结合V的能力有关,因枸杞幼苗蛋白结合V的能力较强,生成的植物螯合肽较多,故对V有较强的耐受能力。     

赤霉素发酵废渣对芥菜幼苗生长的影响

比较了赤霉素发酵废渣不同施入量对芥菜(Brassica juncea L.)幼苗发芽率、单株生物量、叶绿素荧光参数、光合色素含量的影响。结果表明,赤霉素发酵废渣低施入量(0~0.25 g/kg)处理时,有利于芥菜种子萌发,而且能提高单株生物量;高施入量(1.0 g/kg)处理时不仅抑制芥菜种子萌发,而且会大幅度降低单株生物量;而中等施入量(0.25~1.0 g/kg)处理时,随赤霉素发酵废渣施入量的增大,不利于芥菜种子的萌发但却逐渐提高了芥菜的单株生物量。不同施入量的赤霉素发酵废渣处理对芥菜的初始荧光(F0)、最大荧光(Fm)和原初光能转换效率(Fv/Fm)都有明显的影响。综合分析认为,赤霉素施入量为0.5 g/kg处理的效果最佳。不同施入量赤霉素发酵废渣处理对芥菜的光合色素无明显影响。     

23份芥菜型油菜同工酶遗传多样性分析

采用酯酶(EST)、淀粉酶(AMY)和过氧化物酶(POD)同工酶电泳,对23份芥菜型油菜材料进行了遗传多样性分析。同工酶电泳共检测到3种酶的多态型条带26条,酯酶和淀粉酶都存在着丰富的多态性。带型分析结果表明,酯酶EST-2、EST-3特征带可能与材料地理来源有关,淀粉酶AMY-2、AMY-3、AMY-4和AMY-5特征带可能与控制籽粒颜色基因的表达有关。参试23份材料的遗传相似系数在0.625~1.0,聚类分析可将其分为冬播型和春播型为主的两大类群,冬播型类群中全部为黑籽材料,春播型类群中包含了所有参试的8个黄籽材料和4个黑籽材料。不同芥菜型油菜品种之间因其类型、籽粒颜色及地区等因素差异而存在较大的遗传差异。