应用AgNOR技术研究放线菌素23—21对人低分化鼻咽癌(CNE-2Z)裸鼠移植瘤的作用

已知放线菌素23—21给药浓度50μg/kg时,对人低分化鼻咽癌(CNE-2Z)裸鼠移植瘤有明显抑制效应,抑瘤率为58％。电镜观察见瘤细胞有核仁分离和微球体形成的超微结构改变。为进一步探讨其抑瘤作用机理,本文应用AgNOR技术,观察了对照组与给药组每例移植瘤的各100个细胞核内AgNOR的数量变化,计算平均每核AgNOR颗粒数。对照组为2.26±0.16,给药组1.60±0.18(p<0.01),表明给药组AgNOR平均计数减少。证实了放线菌素23—21很可能是通过抑制瘤细胞核仁rRNA合成,使细胞增殖活性降低,致细胞核内AgNOR均数显著减少,从而发挥其抗肿瘤作用。     

鼻咽癌高淋巴道转移裸鼠移植瘤的细胞遗传学研究

研究鼻咽癌克隆株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５高淋巴道转移裸鼠移植瘤离体培养细胞的细胞遗传学改变并探讨这种改变与肿瘤生物学特性之间的关系。方法染色体Ｇ显带后按人类细胞遗传学国际命名体制进行核型分析。     

鼻咽癌克隆株及其转移灶组织裸鼠移植瘤自发性转移的研究

将鼻咽癌克隆细胞株ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５／Ｆ１移植入裸鼠痛部皮下，观察其自发性转移，进而用克隆株Ｈ５移植瘤的淋巴结及肺转移灶组织，直接接种裸鼠背部皮下，研究其转移表型的改变。结果显示：克隆株Ｈ５和Ｆ１的转移率不同；Ｈ５淋巴结转移灶及肺转移灶移植瘤，和其原代移植瘤比，其转移能力和转移途径有明显的差异。     

人良恶性鼻咽上皮及鼻咽癌裸鼠移植瘤中ras p21蛋白的表达

用抗ras p21蛋白的单抗及免疫组化法检测人多种良恶性鼻咽上皮及鼻咽癌裸鼠移植瘤中ras p21蛋白表达水平较高。提示ras p21蛋白的表达.是正常鼻咽上皮及鼻咽癌癌细胞分化的特点,在其分化过程中可能起一定作用。在异型增生的基底细胞中ras p21蛋白表达水平升高可能是ras癌基因受到异常激活,在鼻咽癌的发生中起一定作用;报道一种新ras p21蛋白表达方式——核阳性。     

人低分化鼻咽癌细胞克隆亚系的分离及生长特性观察

应用有限稀释法，从人低分化鼻咽癌上皮细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）中分离出２５个克隆亚系。根据细胞电泳率，筛途出３个电泳率差异较大的克隆亚系（Ｈ５、Ｆ１和Ｆ７），并对其生长特性进行观察，发现细胞电泳率大的克隆亚系较电泳率小的克隆亚系生长能力强，而母系的细胞电泳率及细胞生长能力均居于中等。     

人低分化鼻咽癌上皮细胞系(CNE-2Z)细胞周期的研究

本文用标记有丝分裂百分数法（ＰＬＭ）和连续标记法首次测定了人低分化鼻咽癌上皮细胞系细胞周期各时相的时间。 ＰＬＭ法结果为 ＴＣ１８．５ｈ，ＴＳ１０ｈ， ＴＧ１６．７７ｈ， ＴＧ２１ｈ， ＴＭ０．７３ｈ；连续标记法结果为ＴＣ１７．１３ｈ，ＴＳ９．３６ ｈ， ＴＧ１６．０９ ｈ， ＴＧ２１ｈ， ＴＭ０．６８ｈ。平均有丝分裂指数为 ２．７４％。表明两种方法测定结果相近，细胞生长良好，为鼻咽癌细胞生物学特性的研究和临床治疗提供了基础数据。     

低分化鼻咽癌细胞系及其2个单克隆株浸润羊膜的电镜观察

利用电镜比较观察了经细胞培养的低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)及其2个单克隆株(4-2-H_5,5-1-F_1)对羊膜浸润的特点和浸润能力,结果表明:4-2-H_5及CNE-2Z浸润羊膜的能力比5-1-F_1强;浸润羊膜具有粘附、伸出伪足、溶解破坏及侵入羊膜等几个阶段;讨论了浸润羊膜的某些机理。     

人低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞膜电位及其形成的离子机制

用玻璃微电极细胞内记录方法,对体外培养的人低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞膜电位及其形成机制的研究结果表明:CNE-2Z细胞膜电位与正常鼻咽上皮细胞相比,负值明显增大(P<0.01),变异系数也大,且分布弥散。CNE-2Z细胞膜电位负值与培养液K~+浓度对数值接近呈反比关系。而培养液Na~+、Ca~(2+)、Cl~-浓度提高时,膜电位无显著改变。提示K~+外流是形成CNE-2Z细胞膜电位的主要离子基础。     

提高人鼻咽癌细胞系在裸鼠体内特异性肺转移能力的初步研究

提高人鼻咽癌系在裸鼠特异特肺转移。方法分别将鼻咽癌细胞克隆株Ｆ１在体外与鼠肺块共同孵育及胸内移植，然后将带瘤细胞肺块和胸内瘤组织块各行皮下移植，并与瘤细胞悬液皮下移植瘤比较，观察各组移植瘤的生长和转移情况。结论鼻咽 体外与肺块共同孵育或胸内移植后均能提高其转移能力，体外民肺块孵育能促进其发生肺转移。     

鼻咽癌组织中WWOX基因和蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨WWOX基因和蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征关系.方法 收集52例鼻咽癌和25例正常鼻咽组织,采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色分别检测WWOX mRNA、蛋白表达.结果 鼻咽癌组织中WWOX基因、蛋白表达显著低于正常鼻咽组织（P＜0.05）.癌组织中WWOX基因、蛋白表达与分化程度、TNM分期有关（P＜0.05）.结论 检测WWOX表达可能有助于鼻咽癌诊断及预后判断.     

3种耳后野放疗方案治疗鼻咽癌的疗效比较

目的：比较3种不同的耳后野照射方案治疗鼻咽癌的疗效。方法：90例茎突后间隙受犯的鼻咽癌初治患者，第l段放疗采用面颈联合野放疗，第2段放疗采用耳前野加耳后野放疗。按第2段放疗耳后野不同照射时间、分次剂量随机分为3组：常规剂量组(n＝30)、低剂量组(n＝31)和后加量组(n＝29)。常规剂量组耳后野剂量为每次2Gy，与耳前野相隔6h后照射；低剂量组耳后野剂量为每次lGy，与耳前野相隔6h后照射；后加量组为耳前野照射结束后耳后野照射，每次剂量为2Gy；3组耳后野放疗剂量为10--20Gy，放疗总剂量为肿瘤量(DT)68—80Gy。结果：常规剂量组、低剂量组和后加量治疗3个月后完全缓解率(CR)分别为83．3％、90．3％和82．8％，差异无显著性(P＞0．05)；而中耳炎发生字分别为71．9％、47．4％和44．4％．Ⅲ-Ⅳ级口腔粘腰反应发生率分别为53．3％、28．8％和17．2％，常规剂量组与低剂量组或后加量组比较，差异均有显著性(P值均为＜0．05)、但低剂量组与后加量组比较差异无显著性(P＞0．05)。结论：耳后野低剂量或后加量放射治疗方案的疗效稳定且毒副反应较低。     

异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的影响

目的 观察异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用.方法 采用不同质量浓度(10、20、40、80 mg/L)异鼠李素处理CNE-2细胞,分别用MTT法、台盼蓝染色、平皿培养和倒置显微镜观察细胞生长抑制率、细胞活力、集落形成、形态变化.结果 异鼠李素组的CNE-2细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且抑制作用呈...     

应用抑制消减杂交技术克隆鼻咽癌转移调控基因

目的：分离并鉴定高低转移表型不同的人鼻咽癌细胞株差异表达cDNA序列,了解鼻咽癌转移抑制基因或具有抑制活性的核苷酸序列。方法：以具有高低转移潜能不同的人鼻咽癌细胞株为研究对象,应用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）和T／A克隆法构建差异表达cDNA消减文库,对差异表达的cDNA进行测序和生物信息学分析。结果：成功构建人鼻咽癌细胞克隆株差异表达cDNA消减文库,从随机测序10个克隆中获得6个在低转移鼻咽癌细胞株中高表达cDNA序列,它们都与已知的人类基因片段具有高度同源性。结论：应用抑制消减杂交技术,从一对具有高低转移表型差异的鼻咽癌细胞株中获得6条可能与肿瘤转移抑制相关的cDNA序列,它们可能在维持肿瘤细胞的稳定和抑制肿瘤转移中起重要作用。     

鼻咽癌中EB病毒的原位杂交检测

目的：在分子水平探讨ＥＢＶ在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：采用ＥＢＶｅｎｃｏｄｅｄｓｍａｌＲＮＡ（ＥＢＥＲ）原位杂交对２８例鼻咽癌和７例慢性鼻咽炎组织进行了检测。结果：２８例鼻咽癌组织中有２３例阳性,７例慢性鼻咽炎均是阴性。鼻咽高分化鳞癌、低分化鳞癌和未分化癌均存在ＥＢ病毒感染,不同分化程度的肿瘤组织间ＥＢＥＲ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：在鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作用。鼻咽活检组织中有ＥＢＶＲＮＡ片段的检出,对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值     

脱氧核酶对端粒酶hTERT mRNA的切割以及对鼻咽癌细胞凋亡相关基因的影响

目的:探讨脱氧核酶对端粒酶蛋白亚基hTERTmRNA的切割作用及对人鼻咽癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:针对hTERT基因的核苷酸序列,合成“10～23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTERTmRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RT-PCR扩增hTERT基因片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性,用RT-PCR和荧光免疫测定凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3'末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTERTmRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTERTmRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01)、抑制鼻咽癌细胞的生长(P<0.05)和bcl-2基因的表达(P<0.05),上调bax基因的表达(P<0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT'和DzTi'在体外和胞内均不表现对hTERTmRNA的切割作用。结论:人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割端粒酶hTERTmRNA,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性,促进鼻咽癌细胞凋亡。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值。     

湖南地区汉族人群mir-499基因多态性与鼻咽癌发生发展的关联性研究

目的研究mir-499(rs3746444)位点多态性与鼻咽癌发病风险及临床病理因素的关系。方法采用病例-对照研究方法,用PCR-RFLP检测152例湖南地区汉族鼻咽癌患者(病例组)及性别、年龄匹配的197例正常人(对照组)mir-499(rs3746444)多态性分布,分析其与鼻咽癌风险及临床病理因素的关系。结果 mir-499基因多态性位点rs3746444的基因型和等位基因分布在病例组和对照组中差异无统计学意义(P>0.05)。T3、T4期鼻咽癌患者携带CC基因型的比例低于T1、T2期患者(P=0.027)。结论 mir-499基因多态性与湖南地区汉族人鼻咽癌的疾病发生无关,与鼻咽癌的疾病进展有关。     

pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤鼻咽癌肿瘤血管的体内研究

目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/GCV和pAdCMV-tk/GCV100mg/kg,每天1次,连续10d。观察治疗前后肿瘤体积、病理及微血管密度变化。结果组Ⅲ裸鼠移植肿瘤缩小速度最快,组Ⅱ次之,而组Ⅰ增大。病理检查显示组Ⅱ、Ⅲ肿瘤出现不同程度坏死,坏死灶中心位于病毒液注射部位。Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查发现肿瘤血管密度组Ⅱ最低,组Ⅰ最高,两组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 pAdKDR-tk自杀基因系统对鼻咽癌肿瘤血管有良好的靶向杀伤效应,从而达到破坏肿瘤细胞的作用。