单克隆抗体孕酮放射免疫分析的研究

应用抗孕酮单克隆抗体,建立了单克隆抗体的孕酮放射免疫分析法。试验确定了单克隆抗体的稀释度、最适DCC配比、最佳温育条件和闪烁液中样品抽提达平衡所需的时间。两条标准曲线的回归方程分别为Y_1=7.67—2.40X_1(BPA_1、r_1=-0.977)和Y_2=7.74—2.43X_2(BPA_2.r_2=-0.858)。鉴定结果表明,方法灵敏度为75pg,可测范围为75—6400pg,批内与批间变异系数分别为6.1％和10.4％。回收率分别为102.2±9.7％(BPA_1)和97.7±9.5％(BPA_2)。样品稀释试验表明,测定方法的平行性较好。     

Bt晶体蛋白Cry1Ac放射免疫检测技术研究

通过苏云金芽孢杆菌(Bt)HD-73培养,提取Bt晶体蛋白Cry1Ac,经酶解后获得高抗虫活性蛋白。免疫新西兰白兔得到高纯度的Bt晶体蛋白1Ac抗体,用125I标记抗原,研究和建立了Bt晶体蛋白Cry1Ac的放射免疫检测技术,该试剂盒用磁性微粒作分离剂,不需离心即可分离,简化了测定步骤,检测结果达到国外同类产品(酶联免疫试剂盒)的水平。     

血清雌二醇放射免疫试剂盒的研制

制备了雌二醇抗体 (抗E2 6 CMO BSA)和12 5I放射配体E2 6 CMO histamine 12 5I,建立了血清雌二醇放射免疫分析方法 ,其特点是通过微量标记法提高标记物比活度 ,不用乙醚萃取直接测定血清样本 ,简化了测量步骤 ,缩短了测量时间 ,且试剂稳定时间可延长至 2个月以上。应用本法可以快速测量动物及人的血清样本 ,2 5～ 3h即可得出结果。     

家鸡催乳素放射免疫测定法的建立

本文建立了测定鸡血浆样品中催乳素(chPRL) 的放射免疫测定方法。所用试剂为标准chPRL( AFP 10328B) ,碘标chPRL( AFP 4444B) ,一抗为免抗chPRL(AFP 151040789) 抗血清,二抗驴抗免IgG 抗血清。碘标采用氯胺T 改进法,减少了氯胺T 的用量,并省略了偏重亚硫酸钠的使用,碘标chPRL 比放射性为29μCi/ug 。测定的灵敏度为0-34ng/ ml, 标准曲线的ED75 、ED50 和ED25 分别为1-30 ,3-71 和10-60ng/ ml。样品批内和批间变异低于15 % 。母鸡血浆样品倍比稀释产生的结合抑制曲线与标准曲线平行;测定不同繁殖状态母鸡血浆样品chPRL 显示出显著差异且变化规律符合繁殖活动的变化。证明本方法可用于测定家鸡血浆chPRL 浓度。     

放射免疫法测定畜产品中的己烯雌酚

本文采用DES-MCME-BSA复合物免疫家兔,制备兔抗DES抗血清。其滴度为1:1250,亲和常数为1.1×10~9L/mol,与己烷雌酚和双烯雌酚的交叉反应分别为4.58％和2.14％,与17β-雌二醇、孕酮、甲地孕酮、睾酮和丙酸睾酮的交叉反应均<0.01％。应用制得的抗血清,建立了DES的放射免疫测定法。其最小检测量为2pg/管,平均回收率90.4±7.6％,批内和批间变异系数分别为5.4％和10.4％,表明本法灵敏、可靠,适于大批样品的常规筛检。     

山羊产后乳中孕酮浓度的变化

应用放射免疫分析和竞争蛋白结合分析法测定了成都麻羊、莎能羊及其杂交一代母羊产后四月内的乳中孕酮浓度变化。供试动物在试验期间的孕酮浓度一般保持基础水平,约有87.2％(成都麻羊)、94.4％(莎能羊)和93.9％(杂交羊)的测值在10ng/ml以下。孕酮浓度升高发生1—5次,较行为发情次数为多。第一次孕酮浓度升高发生在产后26—67天(成都麻羊)、19—52天(莎能羊)和39—122天(杂交羊)期间。产后五天内初乳中的孕酮含量平均为每日2—4ng。     

~(125)I标记猪生长激素及其放射免疫测定初步研究

本文采用温和氧化剂Iodogen标记抗原猪生长素(pGH),并应用双抗体放射免疫分析法进行沉淀反应,测定了该法的准确度和灵敏度,建立了简便易行的猪生长激素放射免疫测定法。     

火龙果种子清蛋白的理化性质及其胰蛋白酶抑制活性研究

为阐明火龙果种子清蛋白的理化性质和生物学活性,本研究从红心火龙果中纯化获得种子清蛋白(HPA),分析其分子量、氨基酸组成、同源性及胰蛋白酶抑制活性。结果表明,HPA由两条分子量为12.6、13.2 kDa的多肽链(HPA-1,HPA-2)组成。 HPA富含谷氨酸(6.297 g·100g^-1)、精氨酸(3.992 g·100g^-1) 和天冬氨酸(2.694 g·100g^-1)。 HPA与来自甜菜和菠菜2S种子贮藏蛋白具有高度相似性。HPA-2显示出较高的胰蛋白酶抑制活性,比活力为9.19×10³ TIU· mg^-1,纯化倍数为1.86。经大豆胰蛋白酶抑制剂-琼脂糖凝胶柱纯化的组分HPA-2-1是胰蛋白酶竞争性抑制剂,抑制常数(Ki)为0.62 nmol·L^-1, 具有Kunitz型抑制剂的摩尔比曲线。 HPA-2-1在一定的pH值(2~10)和温度(30~70℃)范围内具有稳定的抑制活性,且抑制活性几乎不受二硫苏糖醇(DTT)的影响。本研究为挖掘火龙果种子资源,丰富胰蛋白酶抑制剂的种类提供了参考。     

利用放射免疫法测定水中克百威的研究

本研究建立了水样中克百威残留的放射免疫分析方法 (RIA) ,与传统的分析方法相比 ,前处理简单 ,灵敏度更高。研究结果表明 ,该方法的检出限为 0 1 75ng ml,用放射免疫测定法与高效液相色谱法检测相同水样中克百威的残留 ,两者的线性相关系数为 0 9985。     

小麦Wcor719基因的原核表达及转化烟草和棉花提高抗冷性研究

为研究Wcor719基因的抗寒功能,获得具有抗寒性的棉花新种质,构建小麦冷诱导基因原核表达载体Wcor719-pET28a进行蛋白表达,SDS-PAGE分析表明其诱导蛋白大小约为24.0kD,表达量在诱导4h时达到最大,且与IPTG诱导浓度无明显相关性。同时通过农杆菌介导的叶盘法将构建的Wcor719-pCambia1301植物表达载体转入烟草(Nicotiana tabacum)SR-1中,T1代转基因烟草植株经过抗生素筛选和PCR检测后进行低温胁迫,测定抗寒生理指标,结果显示转基因植株的脯氨酸和可溶性糖含量均比对照有所提高。该基因经过功能验证后用花粉管通道法转入棉花(Gossypium hirsutum)新陆中49,T0代、T1代经过田间检测及PCR检测后研究T2代转基因棉花低温胁迫下的抗寒性,结果显示,转基因棉花脯氨酸含量和可溶性糖含量均在第5天达到峰值,且明显高于对照;而丙二醛含量低于对照,初步证明转基因烟草和棉花的抗寒性均有所提高,由此表明通过转冷调节基因来提高植物的抗寒性具有良好的应用前景。     

OsCRY2基因抑制表达对水稻主要农艺性状的影响

利用已公布的水稻OsCRY2基因序列设计引物,扩增部分基因片段,成功构建了ihpRNA植物表达载体pSC1301-347-OsCRY2,并通过农杆菌介导法将OsCRY2干扰片段导入水稻获得了转基因植株。根据转基因植株主要农艺性状的表现,分析了该基因的功能。结果表明,抑制OsCRY2基因表达会强烈延迟水稻开花与成熟;转基...     

香石竹ACC氧化酶基因克隆及其反义表达载体构建

据已报道的香石竹氨基环丙烷羧酸(ACC)氧化酶基因的cDNA序列设计特异引物,以香石竹品种“Master”基因组DNA为模板,用PCR方法克隆出香石竹ACO基因的部分序列。测序结果显示,克隆的序列与已报道序列基本一致。将克隆的香石竹ACO片段反向连接到植物表达载体pCAMBIA 1301中CaMV 35S启动子的下游,构建了香石竹ACO基因的反义表达载体pCAM-ACO2,为进一步通过反义技术延长转基因香石竹的花期奠定了基础。     

牡丹PsMADS5基因的克隆、表达及载体构建

以牡丹品种赵粉（Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen）为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5＇非编码区、302bp的3＇非编码区...     

棉花肉桂醇脱氢酶基因GhCAD3的克隆及原核表达

肉桂醇脱氢酶(CAD)是木质素生物合成过程中的一个关键酶类。本研究从棉花中克隆了一个CAD基因,命名为GhCAD3(GenBank登录号为FJ376601)。GhCAD3全长1573 bp,具有1个1080 bp的开放阅读框,5′非编码区为35 bp,3′非编码区为458 bp,编码359个氨基酸,预测分子量约为39.116kD,等电点为7.48。氨基酸同源性分析发现,GhCAD3与其他CAD一致性为64.13%。为了进一步研究GhCAD3基因的功能,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-CAD3,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE电泳分析表明,最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG在37℃下诱导7 h。     

生长调节剂PCPA和2,4-D对番茄果实果糖激酶活性及基因表达的影响

研究了花期施用PCPA和2,4-D对发育过程中番茄果实糖含量、蔗糖代谢相关酶和果糖激酶活性及果糖激酶基因表达的影响。结果表明,随着番茄果实的发育,果糖激酶的活性及其基因表达均先上升后下降,成熟时达到最低,但FRK1基因表达量较高;果糖和葡萄糖含量呈递增的趋势,成熟时含量达到最高。PCPA和2,4-D处理后降低了成熟番茄...     

不同类型玉米籽粒淀粉积累、相关酶活及基因表达差异分析

为探究不同类型玉米淀粉形成机理,对普通玉米、甜玉米、糯玉米淀粉积累、相关酶活及基因表达进行测定,分析不同类型玉米淀粉积累、相关酶活及基因表达之间的差异及相互关系。结果表明,不同类型玉米总淀粉和直链淀粉百分含量为:普通玉米>糯玉米>甜玉米,支链淀粉百分含量为:糯玉米>普通玉米>甜玉米,灌浆期间总淀粉和直链淀粉含量3个玉米类型间差异显著;灌浆期间,普通玉米各淀粉合成相关酶活性最高,甜玉米淀粉合成相关酶活性最低,糯玉米则介于普通玉米和甜玉米之间,但其GBSS酶活性很小。灌浆期间3个类型玉米除GBSS酶活性差异不显著外,其他淀粉合成相关酶活性差异显著;普通玉米淀粉合成相关基因表达量总体均高于甜玉米和糯玉米,甜玉米和糯玉米相关突变基因仍存在表达。表明不同类型玉米淀粉含量和组成上差异明显;普通玉米淀粉的形成需要淀粉合成相关酶相互作用,淀粉合成相关酶活性的缺失会改变淀粉组成;不同类型玉米淀粉合成相关基因表达差异显著,但都存在转录活性。对普通玉米进行相关性分析同时发现,淀粉的合成不仅受到转录调控,还受到转录后调控,淀粉的合成是淀粉合成各酶之间相互协调的结果。     

小麦RPL21基因同源克隆与表达分析

为了解60S核糖体蛋白L21(ribosomal protein L21,RPL21)的基因组结构和表达模式,以GenBank数据库中小麦RPL21基因的部分序列为信息探针,采用RT-PCR和PCR技术从小麦多子房株系幼穗中克隆了RPL21基因的cDNA与DNA片段,并对该基因在小麦多子房近等基因系间的表达差异和多子房...