猪精液常温保存稀释液配方筛选试验

猪精液常温保存技术是实现猪人工授精的重要环节 ,研究适宜的常温保存稀释液配方 ,有效延长猪精液保存时间并维持其有效活力在 0 5级以上 ,对降低生产成本 ,大力推广猪人工授精具有重要意义。试验在葡柠液基础上设计了 8个猪精液常温保存的稀释液配方 ,通过测定精子有效存活时间、总存活时间、存活指数等项目筛选出 3号、9号稀释液配方 ,14～ 18℃恒温下精子 0 5级保存时间分别达93 0± 19 0小时和 10 1 0± 11 0小时、总存活时间为 12 6 0± 12 0小时和 134 8± 18 2小时、生存指数为 70 4± 11 2小时和 76 8± 15 0小时 ,极显著优于对照组葡柠液 (P <0 0 1)。     

甘油保存液的加入方法对冷冻公牛精液的活率及受胎率的影响

为简化低温冷冻精液的操作技术而进行了一系列的试验,重点研究了甘油保存液的加入方法对公牛精液冶冻效果的影响。在初步的室内试验中看到:用既往通用的甘油保存液在室温下进行稀释,对精液冷冻前后的活率皆有不良影响,有部分精子尾部发生卷曲不能正常前进运动。以后在第三个试验中增加了甘油保存液中溶质的浓度和成分,情况得到改善。解冻后活率与对照组极为接近,输精试验结果表明受胎率此对照组还略高。改进的保存液由下列成分组成:蒸馏水100毫升,柠檬酸钠(5H_2O)2克,葡萄糖4克,氨基乙酸0.6克,卵黄20毫升和甘油10毫升。前三种溶质的总浓度约为等渗浓度的150%,甘油占总容积的7.7%。每百毫升保存液中还加有青霉素钾盐5—10万单位。新采出的公牛精液先用等渗的柠檬酸钠-葡萄糖-卵黄液1至3倍稀释,经半小时在室温下再用上述改进的甘油保存液1比4第二次稀释。逐渐降温至0℃并在此温度下平衡20小时然后冷冻至—79℃。用这种方法冷冻的公牛精液经过2—3个月的保存后给60头母牛输精,情期受胎率达到58.3%,而用通常的甘油保存液和稀释方法(降温至0℃再加甘油保存液)冷冻的公牛精液输精母牛80头,情期受胎率为50%。在室温下加甘油保存液可大大简化操作技术,而本试验的结果表明这种方法是有希望成功的。     

渗透压与pH值对常温保存山羊精液的影响

本文研究了山羊精液在高倍稀释（１：３０），常温（１３—１５℃）保存条件下，稀释液渗透压与ｐＨ值对精子存活时间的影响。试验选用两种稀释液，渗透压调为较高的３４１和３３９渗压毫克分子浓度与较低的２６３和２８０渗压毫克分子浓度，ｐＨ值分别调为６．５和７．０。结果表明：在渗透压类同的条件下，ｐＨ为６．５，精子总存活时数比ｐＨ为７．０时长（ｐ＜０．０１）。生存指数高（Ｐ＜０．０１）。在ｐＨ值相同的条件下，较高渗透压的稀释液保存效果好。渗透压与ｐＨ值对精子共同作用下，在ｐＨ６．５时，不论渗透压较高或较低，精子活力维持在０．３以上的时数为３０小时左右，而ｐＨ７．０时只有１６小时左右。较低渗透压使精子顶体完整率下降轻快（Ｐ＜０．０１）。     

拉布拉多犬冷冻精液宫腔内输精试验研究

比较2种不同的冷冻稀释液:Tris-果糖-柠檬酸钠(Ⅰ号)和葡萄糖-乙酸钠-柠檬酸钠(Ⅱ号)对拉布拉多犬冷冻精液宫腔内输精效果,并分析同一稀释液配方不同解冻温度效果,在此基础上,选取犬专用宫腔输精器开展人工授精。结果显示:Ⅰ号稀释液解冻后,精子活力为0.419±0.15,顶体完整率为(58.26±8.1)%,畸形率为(10.3±0.3)%;Ⅱ号稀释液解冻后,精子活力为0.368±0.04,顶体完整率为(55.4±6.3)%,畸形率为(11.1±0.2)%,前者的冷冻效果明显优于后者。同一稀释液配方解冻温度65℃(4~5 s)解冻后的精液品质明显优于40℃(10~12 s);冻精情期受胎率达90%,比自然交配受胎率高10.0%,差异显著(P0.05)。本试验已突破多年来一直困扰犬冷冻精液人工授精技术发展运用的瓶颈,开发出高效冷冻稀释保护液以及高受胎率的宫腔内输精方法。     

应用卵黄液4℃保存驴精液效果及受孕率研究

为了对驴精液保存、应用及配种进行系统研究,试验采用卵黄稀释液4℃保存驴精液,并用4℃保鲜精液进行配种,探究4℃保鲜精液用于人工授精的可行性。结果表明:驴精液应用卵黄液4℃保存24~48 h快速前进的精子活力均在0.3以上(种公驴847除外),可以用于输精,部分驴精液保存48~72 h快速前进精子活力仍在0.3以上;同一时间段内4℃保鲜精人工授精配种91头,受孕27头,情期受胎率为29.7%;鲜精配种309头,受孕109头,情期受胎率为35.2%。说明4℃保鲜精液可以用于输精,但受胎率显著低于鲜精(P0.05),有待于进一步改善和提高。     

小尾寒羊精液保存技术研究

为了充分发挥种公羊的生产潜力,快速扩繁优良群体,本实验以取材方便的小尾寒羊为实验动物,对其精液采用室温、低温和细管法冷冻3种保存方法进行了研究。结果表明:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存小尾寒羊精子,显著优于室温(23±2)℃条件下的保存效果。其中采用II液低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于III液(72 h,0.30)I、V液(48 h,0.35)和I液(18 h,0.42)。而采用III液冷冻保存绵羊精液,其解冻后活率(0.532±0.004)极显著高于IV液(0.470±0.003)I、液(0.445±0.004)和II液(0.432±0.012)3种冷冻稀释液(P<0.01)。4种冷冻稀释液冷冻解冻后的精子,均能在室温下6 h内保持0.35以上的活率。     

大熊猫人工授精的几个问题

大熊猫利用人工授精繁殖后代在我国首获成功,自1978年至1980年三年中,共输精16只,四只产仔。大熊猫原精液为乳白色,pH值为6.4至7.4,每毫升有17亿至20亿精子。在0～5℃下保存时用卵黄—葡萄糖—柠檬酸钠液稀释,原精液与稀释液的容量比为1:3或1:4时,保存效果较好,保存72小时后精子活率在30％以上。在超低温(-196℃)条件下保存时用蔗糖—甘油—卵黄液稀释,原精液与稀释液的容量比为1:3,滴冻后置入液氮中保存到二年时复苏后活率仍维持在入存时的水平。此外,还比较详细地介绍了雌大熊猫发情时行为、食欲和生殖器官的某些规律性变化。当出现求偶行为时,上述变化达到高潮。此时动物处在发情期,是输精的最适时间。北京动物园人工授精繁殖的四胎,均在此时输精。关于采精和输精问题,作者认为,输精比较难,其技术关键是准确地将精液注入子宫颈中,这对于提高受胎率是至关重要的。     

绵羊精液低温保存 低温输精试验

常规绵羊人工授精的某些技术环节,已不适应当前广大牧区绵羊改良和育种工作的需要。笔者经过筛选,采用葡萄糖—柠檬酸纳—卵黄稀释液,进行绵羊精液低温保存、低温输精试验。试验结果:精子最长存活时间达196h;用保存24—48h的稀释精液,在—2—2℃环境下给发情母羊输精,一次输精392只,产羔302只,情期受胎率为77.04％。这为改进常规绵羊人工授精的主要技术环节,实现新型的分散性绵羊人工授精技术,提供了重要依据。     

常温保存猪精液稀释液的筛选试验

为研制优良稀释液,对3种常用猪精液稀释液和1种自配猪精液稀释液进行保存效果观察试验,并对自配稀释液中所保存的精子进行了配种试验。按10级评分法评定精子的活力,根据活力变化情况,计算有效存活时间、总存活时间、生存指数,结果表明,自配稀释液保存精子的效果优于Kiew液、葡柠液和葡糖液。配种试验结果表明,用自配稀释液中保存的精液对发情母猪进行输精,其受胎率和产仔数达到了生产需求,可在生产中推广使用。     

胎盘组织液对西杂牛冻精受胎率的影响

采用人用胎盘组织液、VB12和3%柠檬酸钠液分别对西门塔尔牛冻精进行解冻。前者解冻后的精子活力分别比后两种药液提高解冻后的精子活力0.070和0.072。采用直肠把握法对本地母黄牛进行输精,各组均输精18头次,试验组受胎率达77.78%,两个对照组的受胎率分别为61.11%和55.56%,试验组的受胎率比两个对照组的平均受胎率提高19.45%,经显著性检验,差异显著(P<0.05),但两个对照组之间的受胎率无显著性差异(P>0.05)。     

野生盘羊与巴什拜羊杂交F1代精液冷冻保存技术研究

为了充分利用野生动物资源,本试验首次对野生盘羊与巴什拜羊杂交F1代公羊精液低温和冷冻保存方法进行了研究。结果:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存F1代羊精液,其中采用葡萄糖-蔗糖-柠檬酸钠-卵黄稀释液(III液)低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于葡萄糖-柠檬酸钠-卵黄稀释液(II液)(72 h,0.30)、葡萄糖-乳糖-卵黄稀释液(IV液)(48 h,0.35)和葡萄糖-乳糖-卵黄稀释液(I液)(18 h,0.42);采用4种不同冷冻稀释液制作杂交F1代公羊细管冻精,用III液冷冻保存后解冻效果最佳,解冻后精子活率为(48.6±0.4)%,畸形率为(11.20±2.02)%、顶体完整率为(58.4±3.68)%。     

甘油浓度冷冻速度脱脂奶稀释液浓度对绵羊精子冷冻效果的影响

试验用15%脱脂奶稀释液(450毫渗摩—毫克分子浓度/公斤水),0～16%甘油浓度和1～100℃/分的降温速度共同对公羊精子冷冻-解冻存活率(活率和活力)的影响。结果表明4～6%甘油浓度和10～100℃/分的降温速度时精子存活率最高.用8%甘油浓度和5～30℃/分降温速度也获得了近似的结果。虽然在每一种甘油浓度中公羊精子能耐受好几种降温速度,但是提高甘油浓度会使最佳降温速度下降.甘油浓度超过8%就对精子有毒性了,使精子存活率显著下降。15%与19%脱脂奶稀释液(600毫渗摩),以4～6%甘油浓度和10～100℃/分降温速度冷冻均获得了很高的冷冻存活率。     

采用环磷酸腺甙（cAMP）低温保存家兔精液的品质与受胎率

用假阴道采集１０只新西兰白兔的精液，经测定精子活力强，密度大，呈前进运动。然后用三羟甲基氨基甲烷缓冲液作抗冻保护，使精液在２小时内冷却至５℃，放置２天。低温保存时加入５毫克分子浓度的咖啡碱或茶碱，并在３７℃条件下持温２小时。在受胎率试验中，选用４３只新西兰白兔，每次用新鲜精液，低温冷藏精液或添加５毫克分子浓度茶碱于稀释低温保存精液输精０．５毫升（含精子１５ｘ１０~６）。结果表明，含５毫克分子浓度咖啡碱或茶碱稀释的低温保存精液，游动精子的比例增加（Ｐ＜０．０１），但持温保存时游动精子的比例降低（Ｐ＜０．０１），且精子顶体异常率增加（Ｐ＜０．０１），乳酸脱氢酶释放进入细胞间质。采用含５毫克分子浓度茶碱低温保存精液的配种效果与鲜精相同；但鲜精与冷藏精液相比，则差异显著（Ｐ＜０．０５）。采用鲜精，冷藏精液及含茶碱低温保存精液输精，母兔的产仔率分别为７０．６％，４１．７％和６４．３％．     

绵羊鲜精超长时间保存技术研究

为了研究精液稀释液对绵羊鲜精超长时间保存效果的影响,试验选择萨福克和杜泊公羊精液分别在不同季节采用专用稀释液处理并在0℃冰水混合物状态下保存,检测不同时间的鲜精顶体完整性及精子活率,同时进行人工授精,统计受胎率。结果表明:萨福克公羊精子活率在1~15 d缓慢下降;而杜泊公羊精子活率在保存第6天和第15天有一个相对快速下降的过程;5~9 d内萨福克公羊精子活率变化较为平缓,精子活率均在0.70以上;0~3 d精子顶体完整性高于6~12 d,但差异不显著(P0.05);第15天精子顶体完整性显著低于0~12 d(P0.05)。春季第9天和第12天保存的精子活率显著高于秋季(P0.05)。利用0~12 d保存的精液人工授精后,绵羊受胎率可达到70%以上,保存15 d的精液受胎率显著下降(P0.05)。说明专用稀释液能超长时间(12 d)保证精子活率,并且在春季保存效果优于秋季,受胎率得到保证。     

渤海黑牛精液品质研究

据139头次采精统计,渤海黑牛公牛射精量5.47±1.01ml,鲜精活力0.66±0.06,精子密度11.09±2.65亿/ml,精子畸形率8.94±2.29％,pH值7.00±0.30,2—5℃保存存活时间126.00±21.60小时,存活指数40.1±8.51,抗力系数6949.0±1149.0。冻精解冻后活力0.40±0.06,精子复苏率为65.00±5.28％,存活时间108.00±24.00小时,存活指数24.20±4.55。冷配受胎率80.00±5.71％。     

不同稀释液保存公猪精液的效果试验

养猪生产中推广应用人工授精技术,可明显提高种猪受胎率,加速猪种改良进程和降低疫病风险。本试验采用常用的Modena、BTS液及自配液Ⅰ、自配液Ⅱ等四种稀释液保存公猪精液的效果试验。结果表明:自配液Ⅰ保存精液,精子存活时间达147 h,其次为BTS液,精子保存时间达136 h,且自配液Ⅰ的配种受胎率显著优于Modena和自配液Ⅱ(P0.05)。     

绵羊精液大倍稀释技术试验

甘肃高山细毛羊虽经十多年的选育提高,仍存在类型不一、腹毛偏短、羊毛综合品质差等缺陷,1990年引入澳美公羊进行杂交试验。为了提高澳美公羊的利用率,开展了绵羊精液大倍稀释保存技术的试验示范。选择以脱脂奶为主要成分的稀释液。确定一次输入的有效精子数为1500万个,稀释比例为1:10,最大为1:14。大倍稀释精液在室温10—20℃,12小时内精子活力仍保持0.8以上。在0—5℃条件下保存24小时,精子活力保持在0.6左右。大倍稀释鲜精一个情期一次输精0.1ml,授配母羊375只,受胎母羊284只,情期受胎率75.73%;     

不同精液稀释液对微胶囊化保存的猪精子质量的影响

为了提高微胶囊化保存的猪精子质量,筛选适宜微胶囊化保存的猪精子稀释液,试验将猪精液用A、B 2种稀释液稀释为1×108个/m L浓度,利用海藻酸钠和钡离子反应制成猪精子微胶囊,测定其对微胶囊化保存猪精子质量及精子缓释率的影响。结果表明:在17℃条件下保存48小时和72小时稀释液B组的精子活率显著高于稀释液A组(P0.05),而且在保存1~72 h的各阶段,稀释液B组的精子畸形率显著低于稀释液A组(P0.05);精子在37℃条件下培养6小时和24小时稀释液B组的精子缓释率显著低于稀释液A组(P0.05)。说明稀释液B较适宜作为猪精子微胶囊化保存的稀释液。     

东北马鹿发情规律和输精方法的探讨

东北马鹿母鹿发情时交配欲较强。但其外阴部及精神变化不甚明显;发情季节的初期和中期约有10%左右母鹿表现安静发情;发情时接受公鹿爬跨时间为10多个小时;排卵时间在发情停止后3～12小时;发情周期为12.7±3.4天。给母鹿输精时,采用夹板式吊圈站立保定;施直肠把握子宫颈深部输精法比用麻醉倒卧、开膣器输精法输精安全、可靠、速度快。人工授精受胎率88—89两年平均为57.5%。比同期自然受胎率(27.1～48.9%)高。     

犬精液低温常温保存稀释液筛选试验

试验比较了 8种稀释液在 5 ,10 ,15 ,2 0℃下保存犬精液的效果。结果表明 :15℃为犬精液液态保存的较适温度 ,3号液为优等液。其中 3号液在 15℃精子的存活时间为(10 5± 10 )h,与对照液在 15℃的保存效果差异极显著 (P <0 .0 1) ;2 ,4 ,5号液是良等液 ,在 15℃精子的存活时间是 (6 4± 8)h ,与对照液在 15℃的保存效果差异显著 (P <0 .0 5 ) ;中等液为 6号液 ,在15 ,2 0℃保存时与对照液没有统计学上的差异 (P >0 .0 5 ) ,在 5 ,10℃保存时不如对照液 ;7,8号液为差等液 ,在 15℃保存时与对照液差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,在 5 ,10 ,2 0℃时不如对照液