亚甲蓝与β-胡萝卜素双褪色法在大豆种子脂氧酶缺失育种上的应用研究

F₂大豆种子脂氧酶（Lipoxygenase，Lox-1,2,3）三个同工酶缺失性状筛选鉴定方法的开发，对于脂氧酶缺失的无腥味大豆育种及其表型鉴定具有重要意义。本研究利用脂氧酶Lox-1, 2, 3三个同工酶在不同pH下对亚甲蓝和β-胡萝卜素褪色反应的颜色变化，通过痕量取样，精准鉴定F₂分离世代出现的Lox-1, 2, 3野生型、Lox-1, 2, 3缺失型、Lox-1, 2缺失型、Lox-3缺失型四种表现型，该检测手段不影响含目标性状的个体的正常继代扩繁，为脂氧酶完全缺失大豆新品种的培育及其表型鉴定提供技术支持。     

大豆7S球蛋白亚基与脂氧酶双缺失性状遗传解析

7S球蛋白是大豆最主要的过敏原蛋白,大豆脂氧酶是大豆腥臭味产生的源泉,两者均是大豆食品深加工过程中有必要去除的成分。本研究以7S球蛋白的?¢、?、?-亚基完全缺失的“1003-44”为母本,以脂氧酶Lox-1,2,3完全缺失的“SI0162”为父本,配制杂交组合,通过基因聚合育种技术,创制出7S球蛋白亚基与脂氧酶同时缺失大豆新种质资源,并分别对F1和F2种子进行遗传解析。结果表明：F1（1003-44×SI0162）种子表型性状,表现为7S球蛋白亚基缺失、脂氧酶不缺失性状;F2种子表型性状显示：7S球蛋白亚基缺失:野生型=375:125=3:1（X2（0.05,1）=0.0964<3.84）,F2种子脂氧酶缺失性状的分离比为Lox-1,2,3野生型:Lox-3缺失:Lox-1,2缺失:Lox-1,2,3缺失=282:96:93:27,符合9:3:3:1的独立分配定律（X2（0.05,3）=0.6275<7.81）。说明7S球蛋白亚基缺失性状受1对显性等位基因控制,脂氧酶3个同工酶同时缺失,受lx1lx2与lx3,2个隐性等位基因位点控制。利用ISDS-PAGE电泳技术对F2及F2:7种子双缺失性状的连续跟踪筛选,获得了脂氧酶与7S球蛋白亚基双重缺失、并可稳定遗传的优良品系2个,说明这种双缺失基因聚合不影响大豆的正常生长发育,为大豆品质遗传改良育种提供理论技术支持,对培育食品加工专用高值大豆新品种具有重要意义。     

脂肪氧化酶缺失体对玉米种子劣变的影响

利用作物脂肪氧化酶同功酶快速检测技术．对玉米种质进行脂肪氧化酶缺失体的筛选并组配杂交组合。结果表明：同功酶Lox-1、Lox-2缺失对延缓玉米陈化变质、延长种子寿命起着重要作用．Lox-3缺失在减轻储藏中仓储害虫危害也会有独特的作用。同时。在组配杂交组合时利用同时缺失Lox-1、Lox-2的材料做母本．这样的杂交种就较耐储藏．     

大豆果实发育过程中荚皮和种子超氧化物岐化酶同工酶的变化

大豆荚皮中具有至少9条SOD同工酶带:Mn—SODa_1、a_2;Cu—Zn—SODb_1、b_2、b_3;Cu—Zn—SODc_1、c_2、c_3及与澳酚兰前沿混在一起的一条酶带。在果实发育过程中荚皮各酶带没有发育先后顺序的差异,只是酶带强弱的程度稍有变化。种子也至少有9条酶带,但c_3与溴酚兰前沿混在一起。发育过程申各同工酶出现的顺序有差异,最先出现的是a_1带,最后出现的是c_3带。果实发育各期荚皮SOD的各条同工酶带均比种子中相应的酶带活性强。实验表明:电泳方法的改进将会分离出更多的SOD同工酶带。     

橡胶芽接树砧木与接穗在生化上的相互影响

以橡胶树自根无性系海垦2和热研88-13自接和互接组成的芽接树为材料,在不同割胶条件下,采用PAGE和SDS-PAGE技术,分析了砧木和接穗的胶乳酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶以及可溶性蛋白等生化因子。结果表明:砧木和接穗之间在酯酶同工酶谱C区存在显著的相互影响,这种影响不因割胶时间和乙烯利刺激而变化:自接和互接树之间的过氧化物酶同工酶谱和可溶性蛋白图谱均表现一致,未观测到砧木与接穗之间在这2种图谱上的相互影响。      

利用大豆鲜子叶快速检测脂氧酶缺失

脂氧酶是大豆产生豆腥味的主要原因,培育脂氧酶完全缺失大豆新品种可以从加工源头上解决加工去腥难题。在F2分离世代筛选脂氧酶缺失体是无腥味大豆育种的关键。本研究对现有的ISDS-PAGE电泳技术筛选方法进行改进,在苗后子叶展开期,取鲜子叶20 mg,快速无损测定脂肪氧化酶,由过去的播前切粉取样,改为苗后鲜子叶取样,改良后的方法不仅能清晰鉴别Lox-1,2,3三种同工酶缺失与否,同时确保含目标性状个体的正常生长发育,为大豆脂氧酶缺失育种提供技术支持。     

大豆SOD同工酶的新酶谱型

植物的超氧化物岐化酶分为Mn、Cu和Zn及Fe酶蛋白同工酶。已有的报道表明大豆种子及叶片中只有7—9条同工酶带,其中A区的同工酶属Mn-SOD,一般有1—3条酶带;B区的同工酶为Cu-Zn-SOD,可分离出3条酶带;C区的同工酶为Cu—Zn—SOD,一般有3条同工酶带。我们在分离大豆SOD同工酶时,     

具不同脂肪氧合酶同工酶的大豆种子提取液漂白β-胡萝卜素的能力差异

大豆种子中含有3种脂肪氧合酶同工酶(Lox1、Lox2和Lox3).以含有不同脂肪氧合酶同工酶大豆品系种子为材料,揭示不同提取和反应条件下,不同品系Lox提取液漂白β-胡萝卜素的特性差异.结果表明:Lox1,Lox2,Lox3,Lox1,2和Lox1,2,3的最适提取液是Tris-HCl缓冲液(pH 6.8),而Lox1,3和Lox2,3的最适提取液是磷酸缓冲液(pH6.0).完全漂白β-胡萝卜素所需反应时间长短顺序是Lox1,2,3,Lox3>Lox2,3,Lox1,3>Lox1,Lox2>Lox1,2;在最适反应温度条件下,Lox提取液的漂白能力大小顺序是Lox1,3>Lox1,2,3,Lox2,3>Lox3>Lox1,2,Lox1>Lox2,而在最适pH条件下,Lox提取液的漂白能力大小顺序是Lox1,3,Lox2,3>Lox1,2,3>Lox1,2>Lox2>Lox3>Lox1.随着Lox提取液的放置时间延长,其漂白能力下降.含有Lox3的品系提取液(也就是Lox1,3,Lox2,3和Lox1,2,3的提取液)比不含Lox3或仅含单一同工酶品系的提取液具有更好的漂白能力,说明Lox3是获得高效漂白能力必不可少的同工酶.     

低浓度Pb2+对Cd2+污染下冬小麦幼苗过氧化物酶同工酶的影响

为给土壤重金属复合污染条件下冬小麦生长发育安全性和稳定性的正确评价提供科学依据,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法研究了低于国家"土壤环境质量标准(GB 15618-1995)"规定的Ⅱ类土壤环境基准值(350.0mg.kg-1干土,pH>7.5)时的Pb2+对Cd2+污染下冬小麦幼苗过氧化物酶(POD)同工酶表达的影响。结果表明,在冬小麦幼苗3周龄时,土壤Cd2+污染对其POD同工酶的表达表现出抑制效应,其中10.0mg.kg-1干土的Cd2+抑制作用最强;除50.0和80.0mg.kg-1干土的Pb2+可分别减缓5.0和10.0mg.kg-1干土的Cd2+对POD表达的抑制作用外,其他浓度的Pb2+表现出与Cd2+协同抑制POD表达的现象。在冬小麦幼苗7周龄时,土壤Cd2+浓度超过10.0mg.kg-1干土后对POD同工酶表达表现为抑制效应,且表达量随着Cd2+浓度的升高而表现出依次降低的趋势;除120.0和180.0mg.kg-1干土的Pb2+可减缓Cd2+对POD同工酶表达的抑制效应外,其他低浓度的Pb2+与Cd2+均表现出协同抑制POD表达的现象。说明土壤Pb2+浓度低于国家"土壤环境质量标准"规定的Ⅱ类土壤环境基准值350mg.kg-1干土(pH>7.5)时,主要表现为加重Cd2+污染对冬小麦幼苗POD同工酶表达的抑制效应。     

做青强度对做青叶蛋白质组成、多酚氧化酶和酯酶同工酶谱的影响

以武夷肉桂品种鲜叶为原料,通过3种做青强度,对乌龙茶做青过程中做青叶内蛋白质及其SDS-PAGE、多酚氧化酶及其同工酶和酯酶同工酶进行了研究。结果表明,在做青过程中可溶性蛋白质含量及其各可溶性蛋白组分均呈下降趋势,且随做青强度增大而加快;而多酚氧化酶活性呈先上升后下降趋势,做青强度增加对多酚氧化酶有抑制作用;同工酶谱显示做青处理及萎凋处理均能促进多酚氧化酶E2同工酶活性的增强。酯酶同工酶各谱带活性在做青过程中活性均较强。文中对多酚氧化酶和多酚类物质与乌龙茶品质形成的关系进行了讨论,作者提出可以不导致做青叶细胞质膜通透性急剧增大,引起多酚类物质显著下降作为乌龙茶做青适度的生化指标之一。     

缺失Kunitz胰蛋白酶抑制剂和脂肪 氧化酶2的大豆新品种中黄31的选育

大豆新品种中黄31是中国农业科学院作物科学研究所利用缺失Kunitz胰蛋白酶抑制剂的高产、优质、 抗花叶病毒病( SMV)的高代材料ti15176作母本,美国引进优良品种Century近等基因系、脂肪氧化酶缺失的优质 材料Century - 2. 3作父本进行有性杂交,采用未变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native - PAGE)技术及等电聚焦聚丙烯 酰胺凝胶电泳( IEF - PAGE)技术,对杂种后代胰蛋白酶抑制剂( Ti) 、脂肪氧化酶(Lox)进行缺失检测及多年辅助选 择育成。该品种于2005年通过北京市品种审定委员会审定。其突出特点是高产、稳产、优质(蛋白质品质优异% 缺失Ti和Lox2) 、抗病、抗倒、综合性状优良。     

大豆脂肪氧化酶缺失体检测方法研究

薄层等电聚焦电泳技术(IEF)具有准确、快速、分辨率高的特点.作者对IEF-PAGE电泳制胶及酶染技术进行改进,应用于大豆脂肪氧化酶同工酶类型鉴定,获得很好效果,大大降低实验成本,为此,作者研究制定了一套准确、简便的大豆脂肪氧化酶缺失体检测方法.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测大豆过敏原蛋白Gly m Bd30K缺失方法

通过对现有SDS-PAGE电泳技术的样本前处理和制胶技术的改良,开发出了一种能够同时清晰鉴别7S球蛋白组分亚基(α',α,β-Subunit)和Gly m Bd 30 K谱带的SDS-PAGE电泳快速检测新技术.利用该方法对PI603570A×0329F6杂交组合F2群体的116个样本进行了7S球蛋白组分亚基(α',α...     

大豆种子脂肪氧化酶的缺失对种子劣变的影响

用Suzuyutaka及其全套种子脂肪氧化酶缺失体近等位基因系作实验材料，研究评价缺失大豆种子脂肪氧化酶同功酶对种子劣变的影响。结果表明，在贮藏期间，所有缺失体类型与正常品种Suzuyutaka一样贮藏始期 都具有高的活力和发芽率，随着贮藏时间的推移，都以相似的规律和基本一致的速率丧失种子的发芽率和活力；而且酶活性的变化规律也基本一致。表明种子脂肪氧化酶的缺失对大豆种子劣变没有明显影响。     

大豆对大豆花叶病毒SC18株系的抗性遗传和基因定位

大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是我国大豆生产上的一种主要病毒病害,SMV株系SC18是我国东北和南方两大产区的优势株系,在黄淮大豆产区亦零星发生。本研究对5个抗×感杂交组合衍生后代分离群体接种SC18后,发现各组合F_1均抗病,F_2表现3∶1(抗∶感)分离比,F_(2∶3)表现1∶2∶1(抗∶分离∶感)的分离比,表明5个抗病亲本(中作00-683、滨豆95-20、东大2号、中品661和RN-9)对SC18的抗性由一对显性基因控制。抗×抗杂交组合"中作00-683×东大2号"衍生后代分离群体接种SC18,F_2出现15∶1(抗∶感)的分离比,表明中作00-683与东大2号可能各携带一对显性基因,控制对SC18的抗性,且独立遗传;抗×抗杂交组合"中作00-683×滨豆95-20"的F_1、F_2和F_(2∶3)在接种SC18后均未检测出感病株,表明中作00-683与滨豆95-20所携带的对SC18的抗性基因是等位的。利用RN-9×7605重组自交家系将RN-9对SC18的抗病基因Rsc18定位到大豆6号染色体(C2连锁群)SSR标记Satt286和Satt277之间,遗传距离为6.12和4.69 cM。     

大豆种子脂肪氧化酶同工酶缺失体的超弱发光研究

利用超弱发光方法对具有不同脂肪氧化酶同工酶缺失体的大豆种子进行整体水平上的测试，跟踪测量了在种子吸涨到萌动以及发芽的全过程中顷豆种子超弱发光的变化，并且测定了它们的发光谱线。探索用发光强度鉴别是否有缺失Ｌｏｘ３异型材料的可能性和有效性；同时通过超弱发光发射光谱的差异来进一步     

贵州大豆脂肪氧化酶缺失体的农艺和品质性状分析

从贵州大豆品种中随机抽取１４４份进行脂肪氧化酶测定、豆奶加工试验和品质、农艺性状分析。结果发现了３３份楷氧酶缺失品种（其中包括２份育成品种）,占鉴定总数的２２．９％,包括缺失Ｌｏｘ２、Ｌｏｘ３和Ｌｏｘ２、３几种类型,以缺失Ｌｏｘ３类型较多。脂氧酶民缺失的地方品种的蛋白质、脂肪含量较低,其氨基酸成分及比例与正常品种一样,而缺失的育成品种的蛋白质含量则高达４７％以上。利用强碱高温消除豆浆中的豆腥味后,     

一种大豆SNP分型新方法

单核苷酸多态性(SNP)在大豆基因组中分布广泛,SNP分型是大豆SNP遗传作图,关联分析、分子标记辅助选择等研究的重要技术.本文以Rhg4基因开发的5个SNP为例,介绍了一种大豆SNP分型的新方法-片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR).采用AS-PCR原理,针对某个SNP位点设计2条相差4-5bp的特异引物和1个公用引物,PCR产物约100bp或150bp,2种等位基因型PCR产物相差4-5bp,在2个特异引物3'端第3和4碱基位置分别人为引入错配碱基来提高PCR特异性,通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可将纯合和杂合基因型检测出来.探讨了特异引物浓度和退火温度对Rhg4-1592扩增效果的影响,研究表明,可通过调整特异引物浓度和退火温度优化扩增效果.FLDAS-PCR对18份种质分型结果与PCR产物克隆测序法一致,表明本研究建立的FLDAS-PCR法是一种简便、快捷、新型的大豆SNP分型方法.