基于SSR扩增与测序分析的主栽烤烟品种遗传多样性研究

利用SSR荧光标记和毛细管电泳检测技术分析了SSR标记在8个烤烟品种烤后烟叶中的多态性和稳定性。结果表明:PCR产物浓度50～100 ng/μL为毛细管电泳检测较合适的上样浓度;利用83对SSR引物对8个烤烟品种进行PCR扩增,最终确定5对(NTGS66288、PT30250、PT30213、PT52573、PT30170)SSR引物为本研究的核心引物,且多态性分析表明这5对引物能够有效地将8个烤烟品种区分开;8个烤烟品种间的遗传相似性系数为0.30～0.86,当此系数为0.76时,云烟87、NC297、云烟97和中烟100聚为一类,K326和KRK26聚为一类,红花大金元、翠碧1号各自为一类;高通量测序结果显示NTGS66288、PT30250、PT30213、PT52573、PT30170等5个SSR位点基因座的核心重复单元多为简单二碱基重复和三碱基重复,且8个品种之间的差异仅为核心重复单元数量不同。     

SSR分子标记两种电泳方法快速区分玉米种子杂交种

采用SSR分子标记方法,从40对SSR引物中筛选出3对特异性高的引物,区分10个玉米杂交种,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光毛细管电泳两种方法分离PCR产物,分析其位点多态性信息,快速区分品种,并比较两种电泳方法。结果表明,SSR分子标记法区分玉米品种方法简单、重复性好、结果可靠。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳适合检测少量样本,荧光毛细管电泳适合高通量检测,结果更精确,两种电泳方法都可以有效地区分不同玉米品种,实践中可根据不同要求和试验条件选择不同的电泳方法。     

柑橘品种鉴定的SSR标记开发和指纹图谱库构建

【目的】筛选出一套SSR核心引物,用于构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,为柑橘种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供技术支撑。【方法】以柑橘属8个主要栽培种类为试材进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出多态性丰富、扩增条带稳定的引物对部分参试品种进行PCR扩增,扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进一步的引物筛选;筛选得到的引物进行荧光标记,并选用部分柑橘品种进行PCR扩增,扩增产物利用基因分析仪检测,分别计算各引物的PIC值、等位基因数目,选取一套多态性丰富的适合进行荧光毛细管电泳检测的SSR引物组合,进而对所有参试品种进行分析,构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,同时利用筛选的SSR标记对参试品种进行鉴定。【结果】初期以柑橘属8个种的代表品种(太田椪柑、沙田柚、沅江酸橙、大红甜橙、邓肯葡萄柚、枸橼、费米耐劳柠檬和墨西哥来檬)为材料,用362对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经4%琼脂糖凝胶电泳检测,初步筛选出80对种间多态性高、扩增稳定的SSR引物;进一步从8个种类里选择不同类型的64个柑橘品种,用上述筛选出的80对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,再筛选出60对品种类型间多态性高、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并分别进行荧光标记;另以168份柑橘品种为材料对上述60对SSR引物进行PCR扩增,经荧光毛细管电泳检测,依据各引物的PIC值、等位基因数目、峰图读取难易程度、扩增稳定性及染色体位置等,最终筛选出21对SSR引物作为指纹图谱库构建的核心引物。为消除不同仪器、不同试验批次等引起的误差,为21对SSR引物各主要等位变异选择相应的参照品种。根据各引物标记的荧光颜色及扩增片段大小进行合理组合,21对SSR引物可分成5组进行多重电泳,共采集500份柑橘品种的DNA指纹。利用SSR标记,有111份品种仅用1对引物即可鉴别,86份品种用2对引物组合即可鉴别,24份品种用3对引物组合即可鉴别,另外279份品种虽无法单独一一鉴别,但可分为87个小组,组内品种无法区分,组间品种易鉴别。【结论】利用筛选出的21对SSR核心引物,构建了包含500份柑橘品种的DNA指纹图谱库,筛选出部分品种的特异标记,可以鉴别221份柑橘品种和87个品种组合,构建了基于毛细管电泳平台的柑橘SSR分子标记品种鉴定体系。     

利用SSR和SFP标记分析不同抗瘟性水稻品种的多态性

利用914对引物(848对SSR引物和66对SFP引物),对籼型广谱持久抗瘟水稻品种湘资3150和籼型感病品种CO39的基因组多态性进行研究.结果表明,881对引物(815对SSR引物和66对SFP引物)有扩增产物,扩增率为96.39%.共筛选到220对多态性引物,多态性检出率为24.10%.SSR标记的多态性检出率为23.58%,低于SFP标记的多态性检出率(30.30%).不同染色体间多态性检出率差异较大,第10染色体的供试引物多态性检出率最高,为30%;第9染色体的多态性检出率最低,为14.55%.不同碱基数目基序的标记间多态性检出率有较大差异,其中4碱基重复型的多态性检出率最高,为27.96%,其后依次为2碱基重复型、复合型、3碱基重复型和单碱基重复型.     

四十八份青花菜品种SSR指纹图谱构建

为筛选一套适用于青花菜品种DNA指纹鉴定的核心简单重复序列标记(simple sequence repeat,SSR)引物,给青花菜品种的特异性、真实性、准确性鉴定提供依据,以12份性状差异较大的青花菜品种为材料,结合聚丙烯酰胺凝胶电泳与荧光毛细管电泳检测技术,从945对芸薹属SSR引物中筛选出20对引物作为青花菜品种的核心SSR引物。利用该套核心SSR引物在48份青花菜主要栽培品种中共扩增出等位基因位点79个,平均每对引物扩增得到等位基因与基因型数量为3.95、5.55个;引物多态性信息含量(PIC)介于0.302~0.750,平均为0.547;20对核心SSR引物的杂合度介于0.350 0~0.784 9,均值为0.608 2。用该套核心SSR引物构建的48份青花菜品种的指纹图谱,每一条指纹都具有唯一性,可表征一个品种,该指纹图谱为青花菜品种鉴定与资源保护提供了科学依据。     

云烟87突变体新品系的特征特性及其DNA指纹图谱鉴定

为进一步提高目前生产上推广面积最大的烤烟品种云烟87的产量和品质,从云烟87自然变异群体中经系统选择育成2个突变体新品系T24和凹叶烟,对其特征特性进行鉴定,为其生产应用和品种鉴别与保护提供依据。田间试验以主栽烤烟品种云烟87和K326为对照,对T24和凹叶烟的植物学性状、农艺性状、产量和品质进行鉴定;利用简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)分子标记,构建T24、凹叶烟及与其亲缘关系较近的云烟87、K326及其突变系片片黄、云烟97及其突变系M97-1、烤烟新品系09-1和客田烟共9个品种(系)的DNA指纹图谱。结果表明:1)T24和凹叶烟的株型、植物学特征及大田生育期与云烟87相似,但有效叶片数、叶片长宽、茎围、株高都超过了云烟87;两者的产量分别为2 247.38和2 195.62kg/hm2,产值为53 657.56和52 586.47元/hm2,上中等烟率为90.59%和90.38%,均高于对照;两者的烟叶还原糖、总糖、淀粉、总植物碱含量等均达到优质烟叶标准;感官评吸评价T24为80.0分,高于云烟87(76.3分)和K326(77.7分),凹叶烟为75.3分。2)从14对SSR的核心引物中筛选出重复性好、多态性好、品种鉴别效率高的4对引物PT20213、PT30028、PT30224、PT30399,在T24、凹叶烟、云烟87、K326等9个品种中扩增出了18条多态性条带;选择其中7个谱带构建了这9个烟草品种的指纹数据库,据此绘制了DNA指纹图谱,建立了这9个品种的鉴别流程,即用至少3对引物可将这9个品种完全鉴别开。上述结果表明:T24的产量和品质均优于云烟87,具有良好的生产应用潜力;构建的参试品种的特异性指纹图谱,可作为品种鉴别的依据。     

基于SSR标记的油桃品种需冷性分析

[目的]利用已发表的桃SSR引物分析桃品种资源圃油桃遗传多样性,以期为油桃育种和反季节栽培研究提供参考。[方法]利用24对SSR引物分别对27个油桃品种进行PCR扩增,筛选出多态性好、稳定性高的引物对27个油桃品种进行毛细管电泳分析,并采用遗传相似系数对扩增结果进行分析。[结果]从合成的24对SSR引物中筛选出5对条带清晰、具有多态性的引物,利用聚类分析软件,将油桃分成两大类,第一大类包括23个栽培种,其遗传系数在0.9以上,第二大类包括4个原始种,其遗传系数在0.75～0.85,同时鉴别出2个同物异名的栽培种质资源。[结论]基于文献中发表的SSR桃引物筛选出多态性较好的引物可用于油桃SSR分析。毛细管电泳可以将扩增条带分离至1 bp,能更好地区分种内差异。27个油桃品种有2个原始品种,即台农甜蜜和黑油皇后,与23个栽培品种亲缘关系较远,可以作为母本进行杂交育种,且可以作为需冷性品种候选种质。     

基于SSR荧光标记的79份桃种质遗传多样性分析

【目的】利用SSR荧光标记毛细管电泳技术对取自国家果树种质南京桃资源圃的79份种质进行基因分型和遗传多样性分析,筛选出多态性高的引物可用于桃品种间鉴定、亲缘关系分析,并用于分子标记辅助选种体系建立。【方法】对母本‘中油4号’进行从头测序,以物理距离1 Mb为单位在全基因组范围内开发SSR标记。以79个桃品种为材料进行PCR扩增,扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测后筛选目标条带清晰且多态性丰富的标记。对筛选出的标记进行5′端荧光修饰,PCR产物在ABI3730XL测序仪测序,实现对标记的复筛。利用Genemapper 4.0软件对测序结果进行统计,Data Formater 2.1软件将统计得到的bp数据转换成Power Marker v3.25软件所需要的数据格式。对筛选出的引物进行多态性分析,选择多态信息含量（PIC）大于0.45的荧光SSR引物作为79份种质材料的核心引物。以Nei’s为参数,利用NTSYSpc 2.1软件中的UPDM聚类方法分析品种间的遗传多样性。利用基于贝叶斯模型的Structure v2.3.4软件解析79份种质的居群遗传结构。【结果】基于79份种质,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对覆盖全基因的SSR标记进行初筛,共筛选出207对多态性良好的引物;利用SSR荧光标记毛细管电泳技术对207对引物进行复筛,最终筛选出26对核心引物,利用其中5对核心引物可将79份品种完全区分开。26对SSR核心引物在79份桃种质中共扩增出174种多态性基因型,每对引物扩增出的基因型为4—13种,平均每对引物扩增出6.69个基因型,每对引物的多态信息含量PIC在0.45以上。基于207对SSR引物在79份种质中扩增出的位点信息,构建了79份种质的遗传关系图谱和居群遗传结构图。207对引物从遗传距离上将79份种质划分为7组,从居群结构上分为2组。79份品种遗传多样性较高,部分品种聚类结果与系谱图相符。【结论】构建了79份材料的聚类分析图和居群遗传结构图,在一定程度上揭示了79份材料的亲缘关系。由于桃复杂的遗传背景,不能依据单一特性对品种间亲缘关系进行判定。本研究筛选出的26对核心引物可用于全基因组范围内连锁性状的鉴定、桃种质资源鉴定、新品种鉴定及保护、分子标记辅助育种体系构建。     

19个自育葡萄品种(系)指纹图谱构建

【目的】 利用SSR标记技术开展19个葡萄品种(系)的指纹图谱构建,为种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供依据。【方法】 以19个葡萄品种(系)为试材,利用16对SSR标记荧光引物,对其进行PCR扩增和毛细管电泳,获得指纹条带,构建指纹图谱,并筛选可以将19个品种(系)区分的引物组合,绘制种质分子身份证数字码。【结果】 从16对SSR标记引物选择了VRZAG67、VVS2、VVMD7、VCHR4a、VVMD5等5对多态性信息量相对较高的SSR标记,完成了品种(系)的指纹图谱构建,并对其进行了赋值编码,形成了身份识别码。【结论】 构建的指纹图谱和分子身份证可以鉴定和区别19个品种(系),但由于葡萄种质较多,如果继续区别更多的品种,需要增加的 SSR 引物数量。     

雪胆属转录组的EST-SSR分子标记开发

[目的]开发雪胆属表达序列标签简单重复序列(SSR)分子标记。[方法]对雪胆属肉花雪胆和母猪雪胆2个种进行转录组测序,检测SSR位点并设计引物,通过PCR扩增和毛细管电泳检验引物的有效性和多态性,并分析种间和种内遗传多样性。[结果]从200对引物中筛选出6对具有高多态性的引物,每对引物检测到的等位基因数5～8个,平均值6.333 3个。有效等位基因(Ne)为2.480 7～4.982 8个,平均值3.760 8个。多态信息含量(PIC)为0.549 5～0.758 3,平均值0.672 9。遗传多样性分析显示,种间和种内居群均存在明显的遗传分化。[结论]该研究开发的EST-SSR引物具有丰富的多态性,为雪胆属植物的遗传多样性研究提供参考依据。     

苯酚对废水生物硝化过程的抑制

由于硝化细菌对水产养殖水质可以起到明显调节作用，近年来在水产养殖领域的应用日益广泛。但废水中有毒有害物质的存在常常会导致硝化细菌的活性受到严重抑制，从而严重影响养殖水体及水产品的质量。本文利用富集培养的硝化污泥研究了苯酚对生物硝化过程的抑制效应。结果表明，苯酚对氨氮生物硝化过程的抑制属于非竞争性抑制，抑制常数K1和EC50均为2．61mg／L。泥龄相同的条件下，有苯酚抑制剂存在时氨氮的出水浓度高于无抑制情况，且苯酚浓度越高，氨氮出水浓度也越大；而达到相同的氨氮出水浓度，抑制剂存在条件下的泥龄大于无抑制条件，且抑制程度越高，所需泥龄越长。     

基于GIS的工厂化养殖适宜性评价研究

选取滨海新区汉沽作为研究区域,通过查阅相关文献、咨询水产专家和实地调研等多种形式,筛选出19个对滨海新区汉沽工厂化养殖发展影响较大的因子作为评价指标,综合应用德尔菲法(Delphi)和层次分析法(AHP),确定各级指标的权重,构建滨海新区汉沽工厂化养殖适宜性评价模型,利用IDRISI进行综合运算,将工厂化养殖区域划分为"不适宜"、"一般适宜"、"适宜"和"非常适宜"4种类型,从而为工厂化养殖区域规划和管理提供科学依据。     

基于HTML文档的WEB图像分类研究

随着信息技术的快速发展和Internet的普及应用，Internet已经成为包含各种信息形式，如文本、图像、视频、音频等的巨大信息资源库。然而由于Web图像从主题、格式，到功能和来源都多种多样，很难用一个统一的标准进行分类。本研究首先从Web页面上图像的功能角度对图像进行初步分类，将其分为链接类、装饰类、广告类和内容类。初步分类可提高Web图像处理的效率和性能，并为它基于Web的应用与研究提供帮助。     

苯酚对废水生物硝化过程的抑制

由于硝化细菌对水产养殖水质可以起到明显调节作用，近年来在水产养殖领域的应用日益广泛。但废水中有毒有害物质的存在常常会导致硝化细菌的活性受到严重抑制，从而严重影响养殖水体及水产品的质量。本文利用富集培养的硝化污泥研究了苯酚对生物硝化过程的抑制效应。结果表明，苯酚对氨氮生物硝化过程的抑制属于非竞争性抑制，抑制常数K1和EC50均为2．61mg／L。泥龄相同的条件下，有苯酚抑制剂存在时氨氮的出水浓度高于无抑制情况，且苯酚浓度越高，氨氮出水浓度也越大；而达到相同的氨氮出水浓度，抑制剂存在条件下的泥龄大于无抑制条件，且抑制程度越高，所需泥龄越长。     

转化糖药学研究概况

综述了转化糖药理及其现代临床研究概况,并对其药学应用前景进行了展望。     

布氏艾美尔球虫研究之回顾

布氏艾美尔球虫(Eimeriabrunetti)是鸡的一种致病性较强的寄生性原虫,但是我国球虫流行病学的报道很少谈及,有关研究报道更为少见。为此,笔者回顾了自1942年Levine首次报道布氏艾美尔球虫以来人们对这个种所做的研究。主要对这个种在世界的流行情况、生物学特性、致病性、免疫原性、内生性发育、体外培养、致弱及在球虫疫苗中的地位作了回顾和评述。     

黑龙江省番茄根腐病研究概述

文章对黑龙江省番茄根腐病病原菌的鉴定、病原菌的生物学特性、苗期抗性鉴定技术及寄主抗性遗传规律、番茄根腐病的病症与识别、病害的发生和流行规律等内容进行了综述。     

低聚壳聚糖在水稻上的应用研究

0.3 g/L低聚壳聚糖水剂是一种新型植物生长调节剂。通过在水稻苗期和秧田期使用该水剂,探讨其对水稻生长及产量的影响。结果表明:0.3 g/L低聚壳聚糖水剂可促进水稻根系发育和分蘖;增加千粒重,提高产量;对恶苗病防效达48%。其较佳使用方法为苗期浇灌,移栽返青后茎叶喷雾。