水体中泼洒复合乳杆菌对尼罗罗非鱼养殖池塘环境、肠道和鳃健康的影响

研究在尼罗罗非鱼养殖池塘中添加复合乳杆菌对养殖池塘环境、尼罗罗非鱼肠道和鳃健康的影响,为乳杆菌在尼罗罗非鱼健康养殖中的应用提供基础。在尼罗罗非鱼养殖池塘水体中泼洒复合乳杆菌(对照组:0;实验组:1.0×104 CFU/mL),实验周期为10周。复合乳杆菌的成分为干酪乳杆菌和酸鱼乳杆菌,比例为1:2.2。监测池塘水质指标、罗非鱼肠道和鳃的免疫及抗氧化指标,并运用高通量测序技术(Illumina MiSeq),比较对照组和实验组水体、底泥、尼罗罗非鱼肠道和鳃黏膜共生菌群落结构差异。结果显示,从第7周开始,实验组水体中的硝酸盐含量始终低于对照组,实验组比对照组降低了72.68%、72.00%、26.27%和21.46%;实验组水体中的总氮含量在从第6周开始低于对照组,分别降低了43.39%、44.64%、15.64%、37.57%和34.49%;实验组水样中的总磷含量从第4周开始低于对照组,分别降低了40.91%、33.33%、50.00%、33.33%、17.39%、39.29%和25.71%。与对照组相比,实验组尼罗罗非鱼肠道的碱性磷酸酶(AKP)活性提高了45.04%,实验组尼罗罗非鱼鳃的总超氧化物歧化酶(SOD)和AKP分别提高了58.26%和60.99%。复合乳杆菌的添加对尼罗罗非鱼养殖池塘水体菌群结构影响较大,并未影响池塘底泥的菌群结构,影响了尼罗罗非鱼肠道和鳃的菌群结构,其中条件致病菌不动杆菌属、泛菌属细菌的相对丰度降低,而有益细菌鲸杆菌属的相对丰度增加。因此,在养殖水体中泼洒适当浓度的复合乳杆菌可以改善池塘水质,提高尼罗罗非鱼肠道和鳃的免疫力、抗氧化能力,同时调节养殖水体、尼罗罗非鱼肠道和鳃的菌群结构。     

不同配比复合益生菌对灰海马幼苗存活、生长及免疫的影响

以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为菌源,研究了不同配比复合益生菌对灰海马(Hippocampus erectus)幼苗养殖效果的影响。实验包括3个单菌处理和6个复合菌处理(3种菌1∶2∶3比例的随机组合),共9个加菌处理,另设无菌处理作为对照。用于评估养殖效果的指标包括:养殖水体菌群、幼苗特定存活率和生长率、幼苗肠道免疫指标(免疫球蛋白Ig M、白介素IL-1β、干扰素IFN-α和肿瘤坏死因子TNF-α)和肠道菌群。结果发现:加菌处理组中,其养殖水体均含有大量的目标益生菌,并且养殖水体的弧菌含量均显著低于对照组。幼苗存活率方面,除了D组(芽孢∶乳杆∶粪肠=1∶2∶3)、E组(芽孢∶乳杆∶粪肠=1∶3∶2)和F组(芽孢∶乳杆∶粪肠=2∶1∶3)的存活率显著低于对照组外,其他组存活率均显著高于对照组,其中G组(芽孢∶乳杆∶粪肠=2∶3∶1)和I组(芽孢∶乳杆∶粪肠=3∶2∶1)的存活率最高,均超过了65%。特定生长率除了B组(植物乳杆菌单菌处理)与E组外,其余各组之间均无显著性差异(P>0.05)。肠道免疫指标和菌群方面,存活率高的组别Ig M含量就高(通常指示免疫力水平),肠道内亦含丰富的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、植物乳杆菌和约氏乳杆菌(L.johnsonii);而存活率低的组别则Ig M含量低,而IL-1β、IFN-α和TNF-α含量高(往往是炎症的征兆),另外肠道内菌群比例失衡,益生菌丰度低。结果表明:复合益生菌的使用需要有一个特定的配比,配比合适益生效果优于单菌,配比失衡则不如单菌,甚至不及无菌,枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌和粪肠球菌按2∶3∶1或3∶2∶1配比混合使用效果最佳。     

两株有益菌的分离、培养、鉴定及其水质调控效果评价

自河口污泥中分离到两株有益菌,通过形态分析、革兰氏染色、生理生化测定、16S rRNA序列分析和系统发育树构建,其中一株鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),另一株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).建立了两株细菌的适宜生长条件,植物乳杆菌适宜生长pH为6.5、温度为30℃,枯草芽孢杆菌的适宜生长pH为6.0、温度为36℃.在实验室条件下,两株有益菌1∶1组合制剂对人工配制的海水中氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐的降解率分别达到了73.2％、58.0％和52.4％;池塘养殖环境下,其对养殖水体中氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐的降解率分别达到了86.3％、88.9％和68.3％,具有明显的水质净化效果.本研究结果可为建立两株有益菌的规模化发酵生产技术和生产应用奠定基础.     

植物乳杆菌发酵对牡蛎成分的影响

试验结果表明,加入4%食盐能在一定程度上抑制挥发性盐基氮(TVBN)的产生,接种植物乳杆菌后牡蛎浆pH在发酵第2 d迅速下降并一直处于酸性状态(pH≈4)。蛋白质由于牡蛎自溶酶作用、微生物的利用而不断被分解,氨基酸不断地增加,而可溶性蛋白表现出波动变化。还原糖逐渐被消耗,至第10 d时所剩仅为0.07 mg/ml。表明植物乳杆菌对牡蛎的发酵过程有重要作用。为牡蛎的深加工利用提供科学依据。     

接种戊糖乳杆菌和酿酒酵母菌对低盐发酵鳊鱼品质的影响

为提高低盐发酵鱼的风味和安全品质,以鳊鱼(Parabramis pekinensis)为原料,接种戊糖乳杆菌Lactiplantibacillus pentosus (Lp-1)和酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae (Sc-2018)进行发酵,以pH、挥发性盐基氮(TVB-N)、微生物、TCA-可溶性肽、生物胺、挥发性风味物质等为主要指标评价接种微生物菌株对低盐发酵鳊鱼品质的影响。结果表明,与未接种的对照组相比,发酵过程中,接种戊糖乳杆菌Lp-1和酿酒酵母菌Sc-2018可有效抑制挥发性盐基氮的产生和生物胺的累积,促进蛋白质降解和乙酸乙酯、3-羟基-2-丁酮等挥发性风味物质的生成。其中,接种戊糖乳杆菌Lp-1能够促进乳酸菌生长,适度降低发酵鳊鱼pH,且更大程度降低发酵鳊鱼的生物胺含量(P<0.05),提高食用安全性,同时提升了风味。     

传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统构建

根据传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白的全基因序列,设计并合成引物,以IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养毒提取的核酸为模板,对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显示:进行RT-PCR扩增得到截短的VP3基因约615 bp目的片段,将其克隆到pMD18-T Simple载体,经酶切、PCR扩增和序列测定后显示目的片段正确;将目的片段分别亚克隆到乳酸菌细胞表面表达型载体和分泌表达型载体,电转化于干酪乳杆菌,获得了阳性重组菌株。结果表明,通过本实验方法可构建表达传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统,为实现IPNV VP3蛋白在乳酸菌中的表达及免疫原性研究奠定了基础。     

嗜水气单胞菌ompA、flaA基因重组干酪乳杆菌对鲤生长及免疫效果分析

为构建嗜水气单胞菌ompA和flaA基因重组干酪乳杆菌并分别检测其表达产物对鲤生长及免疫效果的影响,实验将目的基因克隆至乳酸菌穿梭表达质粒pPG612中,并电转至干酪乳杆菌中,经诱导后包被饲料对鲤进行饲养56 d,称重并采集血清及组织,分析生长指标及免疫指标变化。在56 d饲养免疫结束后结果显示,生长指标显示重组干酪乳杆菌组与对照组无显著差异,表明重组干酪乳杆菌对生长无影响;免疫效果分析显示,血清中IgM表达水平显著上升。血清中AKP、LZM、SOD、CAT、C3和C4也均显著升高。荧光定量PCR检测发现,免疫后肝脏、脾脏、头肾及肠组织中的细胞免疫因子基因IL-1β、IL-8、TNF-α、 NF-κB、 TLR5及MYD88的表达水平有不同程度的显著提升;其中TLR5及MYD88表达量在Lc-mcs-flaA组高于Lc-mcs-ompA组。攻毒后Lc-mcs-ompA与Lc-mcs-flaA组免疫保护率分别为59%与54%,显著高于对照组。研究表明,本实验构建的重组干酪乳杆菌Lc-mcs-ompA与Lc-mcs-flaA免疫鲤能刺激机体产生免疫应答反应,进而提高自身存活率,为预防鱼类嗜...     

罗非鱼无乳链球菌拮抗株的筛选及特性研究

自吉富罗非鱼养殖池塘水体、底泥和鱼体肠道中筛选无乳链球菌拮抗株。对其中1株抑菌能力最强的菌株LT3-1进行溶血性、形态、生理生化、16S rRNA基因序列测定,并进一步对其抑菌活性与发酵时间的关系、抑菌物质对温度的耐受性、产酶性能、降解亚硝酸盐性能、药物敏感性、安全性试验、攻毒试验进行研究。鉴定结果表明,菌株LT3-1为枯草芽孢杆菌,无溶血性。液体发酵16 h时,抑菌活性最强,抑菌圈平均直径为(25.30±0.57) mm。随温度的升高抑菌活性下降,但仍然存在,说明抑菌物质有耐高温特性。枯草芽孢杆菌LT3-1具有水解蛋白、淀粉和纤维素的能力。亚硝酸盐降解试验表明,枯草芽孢杆菌LT3-1菌液密度为10^5 cfu/mL时,6 h即可将亚硝酸盐质量浓度由2.5 mg/L降至0.03 mg/L,降解率达98.8%( P <0.05)。枯草芽孢杆菌LT3-1对检测的9种抗生素均敏感,罗非鱼接种密度为10^7 cfu/mL的枯草芽孢杆菌LT3-1菌液200 μL后,仍然存活且未有异常表现。动物攻毒试验表明,添加0.05%枯草芽孢杆菌LT3-1菌粉的试验组罗非鱼存活率提高20%,显著高于对照组( P < 0.05 )。综上所述,筛选自吉富罗非鱼肠道的枯草芽孢杆菌LT3-1能有效拮抗罗非鱼无乳链球菌,可以作为防治当地罗非鱼无乳链球菌病的良好菌种资源。     

一株能抑制罗非鱼源无乳链球菌的反硝化芽孢杆菌的筛选鉴定

从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肠道内容物中分离筛选出具有反硝化能力并拮抗无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的芽孢杆菌好氧菌株,并对其中拮抗性最强的1株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、16S rRNA基因序列鉴定,进一步研究其最适生长条件、水解淀粉和蛋白的能力,并进行菌株药物敏感试验及安全性检测。经鉴定,筛选出的菌株(命名为NY 5)为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。在反硝化性能检测培养基中接种1%的NY5菌液后,对50 mg/L的亚硝酸盐氮12 h去除效率达到100%;对本实验室保存的21株不同来源的无乳链球菌均有拮抗作用,平均抑菌圈直径为(26.67±3.00)mm。NY 5在温度为25~40℃、盐度为0~40、pH为5~9的环境中生长较好。同时NY 5还具有水解酪蛋白和淀粉的功能。NY 5菌株对多数抗生素敏感,对少数检测抗生素(青霉素G、麦迪霉素、头孢唑啉等)耐药。在水体中NY5菌液浓度为2.0×10~7 CFU/mL,以及在注射200μL2.0×10~6 CFU/mL浓度NY 5菌液的条件下,体重为(6.0±1.1)g的罗非鱼均未出现死亡及其他异常现象。综合上述结果,证明筛选出的NY 5菌株为蜡样芽孢杆菌。     

干酪乳杆菌发酵人参茎叶提取物对锦鲫免疫及抗氧化功能的影响

为了研究干酪乳杆菌发酵人参茎叶提取物对锦鲫的免疫及抗氧化功能的影响，先用3%、4%、5%、6%（记为L3、L4、L5、L6）的干酪乳杆菌菌液发酵人参茎叶提取物，再分别添加到基础饲料（记为L0）中，对初始平均体重为（25.00±?0.05）g 的锦鲫进行为期五周的饲喂试验。周期性取样，采集锦鲫血清、肝胰脏、中肾、脾脏、全肠，以检测相关免疫指标的变化。在饲喂试验结束后进行嗜水气单胞菌攻毒保护性试验。结果显示，与L0组相比，L5组碱性磷酸酶（AKP）、免疫球蛋白M（IgM）、溶菌酶（LZM）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量显著升高，L5组丙二醛（MDA）含量显著低于L0组。各组织中IL-10、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-1β基因表达水平均有不同程度的升高，表现出时空差异，其中IL-10的基因水平表达升高更为敏感。在攻毒保护性试验中，L5组的存活率达到30%，相较于其他组而言存活率最高。本实验条件下，当干酪乳杆菌的接种量为5%时，人参茎叶提取物发酵对锦鲫的应用效果最好，能够提高锦鲫抗氧化能力及免疫相关基因的表达，并对降低嗜水气单胞菌的感染有较好的预防作用。     

两种乳酸菌对尼罗罗非鱼生长及免疫性能的影响

为研究饲料中添加植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LP-37与戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP-23对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长及免疫性能的影响,试验共分为7组:对照组C0,投喂基础饲料;L1-L3组,在基础饲料中添加不同浓度(1.0×10⁶ CFU/g、1.0×10⁷ CFU/g、1.0×10⁸ CFU/g)植物乳杆菌LP-37;P1-P3组,在基础饲料中添加不同浓度(1.0×10⁶ CFU/g、1.0×10⁷ CFU/g、1.0×10⁸ CFU/g)戊糖片球菌PP-23。结果表明:除L1组外,其余试验组末均重(123.22～158.60) g较C0组(118.16±4.88) g均显著增高(P<0.05);除L1组与P1组外,其余试验组增重率(128.69%～156.20%)较C0组(108.16±0.45)%均显著提高(P<0.05),L3与P2...     

瑞士乳杆菌对泥鳅肠道转录组基因表达的影响

为探究饲料添加瑞士乳杆菌HML037对泥鳅生长和抗病性基因表达的影响,分别对对照组和添加组的泥鳅肠道组织进行双端测序,获得40877个平均长度为1218 bp、N50为1942 bp的unigenes,序列比对分析后均得到注释.通过DEGseq进行基因表达差异分析,获得差异基因604个,其中326个基因显著上调,278...     

一株干酪乳杆菌对养殖水体亚硝酸盐去除机理的研究

为了解乳酸菌去除养殖水体亚硝酸盐的作用机理,实验研究了一株干酪乳杆菌L821a(Lactobacillus casei)对淡水鱼养殖水体亚硝酸盐的去除状况,通过对菌体、酶及代谢产物的实验,证明其去除亚硝酸盐的机理包括胞内酶作用、代谢产物乳酸的直接化学反应2H++3NO2-=NO3-+2NO↑+H2O作用和间接促进微生物反硝化作用3种作用机理。在养殖水体中主要以间接作用方式发挥作用。分析认为乳酸促进反硝化作用的原因在于为反硝化微生物提供了易于利用的有机碳源(能量物质)。     

灭活植物乳杆菌及其代谢物对草鱼生长性能和肠道健康的影响

为了评估不同浓度灭活植物乳杆菌及其代谢物(LPM)对草鱼生长及肠道健康的影响,实验配制4组分别含0 (对照组)、300、600和900 mg/kg植物乳杆菌及其代谢物(LPM)的等氮等能饲料,饲喂草鱼幼鱼[初始体质量(80.47±1.04) g] 6周,结果显示,草鱼增重率和饲料效率在LPM添加量为300 mg/kg时分别较对照组显著提高19.09%和8.57%。LPM添加组肥满度显著低于对照组,且添加量为900 mg/kg时,脏体比较对照组显著降低18.84%。全鱼粗蛋白质含量、饲料蛋白质效率和蛋白质沉积率均在添加量为300 mg/kg达到最大值,分别较对照组显著提高4.40%、11.97%和7.64%。LPM添加组肝胰脏和肠道蛋白酶活性较对照组显著升高。LPM添加量为600 mg/kg时,草鱼肠道的绒毛数量、绒毛长度和绒毛宽度显著高于对照组。饲料中添加LPM对草鱼肠道菌群的多样性无显著影响。LPM添加量为300 mg/kg时,乳杆菌属和梭菌属的细菌丰度较对照组显著升高。嗜水气单胞菌、诺卡氏菌、副溶血性弧菌对LPM极度敏感。血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的含量随...     

牛羊布氏杆菌病的检疫及预防初探

分析了牛羊布氏杆菌病检疫的常用方法,即全乳环状实验检疫方法、试管聚集检疫方法以及平板聚集检疫方法,并提出了预防牛羊布氏杆菌病的若干措施,希望能够为牛羊养殖户提供一定的参考。     

刺参养殖池塘中一株植物乳杆菌的分离及其生物学特性

2017年5月,从山东东营刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘底泥中分离获得49株乳酸菌。以刺参“腐皮综合征”的2株致病菌[灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)]为指示菌进行拮抗作用实验,获得1株具有显著抑菌活性的乳酸菌CLY-5,对该菌株进行了生理生化实验、16S rDNA序列分析、生长特性及其对刺参的安全性研究。结果显示,菌株CLY-5对灿烂弧菌和假交替单胞菌具有较好的抑制作用,且菌株的胞内产物与胞外产物均具有抑菌效果,抑菌圈分别为20 、23 mm和27 、38 mm,胞外产物的拮抗作用优于胞内产物。利用该菌对刺参进行高浓度浸浴测试其安全性,浓度为1×109、1×108和1×107 CFU/ml,实验期间刺参状态良好,无死亡现象。16S rDNA序列分析表明,CLY-5与植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum NR117813.1)的相似性为100%,初步鉴定该菌株为植物乳杆菌。菌株CLY-5在30℃~44℃、pH 6~8范围内生长较快,20 h进入对数生长期,28~32 h达到生长高峰。筛选的植物乳杆菌具有良好的抑菌能力,且其生长特性适应刺参池塘的养殖环境,为刺参疾病的生态防控及乳酸菌资源的开发提供应用数据参考。     

4种微生物制剂对凡纳滨对虾育苗水质及仔虾存活的影响

采用平板法测定标注为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和植物乳杆菌制剂的活菌密度,通过16S rRNA基因测序分析对其进行菌种鉴定。在盛水250 L的玻璃钢桶中投放凡纳滨对虾无特定病原的无节3期幼体5×10~4尾,各组由溞状Ⅰ初期至仔虾Ⅰ期,连续10 d,每日分别投菌制剂1次,地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌组每次投菌5×10~8 cfu/L,粪肠球菌和植物乳杆菌组每次投菌1×10~8 cfu/L,同时投放饵料,对照组始终不投菌制剂,定期测定水质并分析仔虾存活情况。试验结果显示,4种制剂均由密度高的单一菌种构成;地衣芽孢杆菌组水体氨氮、无机磷和化学需氧量均显著高于对照组,而在育苗早期粪肠球菌和植物乳杆菌组亚硝态氮含量显著降低(P0.05);除地衣芽孢杆菌组仔虾Ⅲ期存活率显著低于枯草芽孢杆菌组外,各组存活率间差异不显著(P0.05),但枯草芽孢杆菌组仔虾存活率和活力均表现最佳,而地衣芽孢杆菌组表现最差。可见,无明显胁迫条件下,连续投放微生物制剂对凡纳滨对虾育苗水质及仔虾存活率总体上无显著提高作用,但两种芽孢杆菌制剂的作用效果存在明显差异。     

唾液乳杆菌NF19的液体发酵条件研究

从舟山海域海水中筛选到一株海洋细菌NF19,经16S rDNA分子鉴定和API鉴定结果显示菌株NF19为唾液乳杆菌属(L.salivarius)的一个种,将序列上传至NCBI获得GenBank登录号为FJ405036。通过对菌株NF19进行发酵条件优化及正交试验,得到菌株NF19的最佳发酵条件为:初始pH7.2,接种量为8%,在120 r/min下20℃培养48 h。此条件下发酵液有最佳抑菌效果。     

5种乳酸菌对奥尼罗非鱼免疫和抗病力的影响

选用体质量约3．49 g的奥尼罗非鱼,分别投喂基础饲料（空白组）和添加相同水平的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、戊糖乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪肠球菌的试验饲料。饲料中的乳酸菌数分别为1．30×103、5．10×108、2．97×108、3．03×108、2．30×108、3．47×108 cfu／g ,养殖期为8周,试验结束后采集血液并留部分鱼进行72 h的嗜水气单胞菌感染试验,计算72 h内的存活率。结果显示,植物乳杆菌组、戊糖乳杆菌组、鼠李糖乳杆菌和粪肠球菌组血清碱性磷酸酶活性均有不同程度升高,其中戊糖乳杆菌组最高,且显著高于嗜酸乳杆菌组;鼠李糖乳杆菌和粪肠球菌组血清抗超氧阴离子自由基能力显著高于其他各组;鼠李糖乳杆菌组血清溶菌酶活性显著高于空白组。注射嗜水气单胞菌12 h后,各添加组罗非鱼存活率均高于空白组,24～48 h ,鼠李糖乳杆菌组和粪肠球菌组存活率显著高于空白组,72 h时鼠李糖乳杆菌组存活率显著高于空白组。饲料中添加乳酸菌能提高奥尼罗非鱼免疫、抗氧化能力及抗嗜水气单胞菌感染能力,其中鼠李糖乳杆菌和粪肠球菌效果显著。     

国际

<正>欧盟批准4种乳杆菌作为饲料添加剂近日欧盟发布法规,批准短乳杆菌DSM23231、短乳杆菌DSM16680、植物乳杆菌CECT4528和发酵乳杆菌NCIMB30169这4种乳杆菌属菌作为饲料添加剂使用。浙江省杭州检验检疫局提醒相关输欧企业,应积极关注欧盟有关法规进展,严格按照欧盟要求生产和使用饲料添加剂,确保产品顺利出口。据悉,近年来,欧盟发布多项新