应用实时荧光定量RT-PCR高效检测葡萄病毒B

 本研究建立了葡萄病毒B的 SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测技术。该技术标准曲线扩增效率102.4%,相关系数0.999,最低检测限达10^-4倍稀释cDNA,灵敏度为常规RT-PCR的100倍。重复性试验组内和组间变异系数分别为0.00%~0.65%和0.02%~2.00%,表明检测稳定性好。该技术对田间葡萄样品检测适用范围广,对枝条和老叶柄检测效果最好,冬季枝条和春夏秋季所有老叶柄样品检出率均为100%,与常规RT-PCR检测结果一致。对于其他季节或部位样品,RT-qPCR检出率(43% ~74%)则普遍高于常规RT-PCR(5% ~71%),特别是春季样品和春夏秋季所有嫩叶样品,检出率比常规RT-PCR分别高31% 和38%。对来自我国13个省21个品种的52份田间葡萄样品检测结果表明, RT-qPCR共检测到6个样品为阳性,检出率11.5%,为常规RT-PCR(检出率5.8%)的2倍。     

两种分子技术检测松木中松材线虫的效果评价

为更好地解决当前松材线虫Bursaphelenchus xylophilus检测工作中频现的假阴性问题,通过不同分子技术检测效果的比较评价,摸索出了一套可提高松材线虫检测准确性的技术体系。针对早期感病松木的低线虫量,建立了线虫的最大量分离方法和基于rDNA ITS序列的分子检测体系,该体系可高效检测出单条松材线虫,准确率达93.75%。以来自浙江省不同疫区的96份松木样品为检测材料,比较了SCAR标记和ITS序列2种分子检测技术的阳性率。结果显示,通过首次PCR,ITS_Ⅰ和ITS_Ⅱ序列的检测阳性率分别为52.08%和55.21%,SCAR标记的检测阳性率为30.21%;通过第二次或巢式PCR,ITS_Ⅰ和ITS_Ⅱ序列的检测阳性率提高到了97.92%和100.00%,SCAR标记的检测阳性率提高到了59.38%,表明基于ITS序列的检测阳性率明显高于SCAR标记,且通过第二次或巢式PCR方法可进一步提高检测灵敏度,降低假阴性率。因此,通过线虫的最大量分离并基于rDNA ITS序列的分子检测可明显提高检测准确性,更适用于松材线虫的常规检测。     

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法分析甘蓝和土壤中的鱼藤酮

采用QuEChERS-液相色谱-串联质谱法(QuEChERS and LC-MS/MS)建立了鱼藤酮在甘蓝及土壤中的残留检测方法。样品前处理采用以乙腈作提取剂、PSA(primary sec-ondary amine,N-丙基乙二胺)为分散净化剂的QuEChERS方法,利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)在多反应离子检测模式下进行检测。在甘蓝和土壤中的添加水平为0.002-0.1mg/kg条件下,鱼藤酮在甘蓝中的添加回收率为78.36%～88.16%(相对标准偏差为6.05%～13.38%),在土壤中的添加回收率为77.94%～89.50%(相对标准偏差为4.70%～12.35%)。鱼藤酮在甘蓝和土壤中的最低检测浓度为0.002mg/kg,最小检出量为1.0×10-11g。该方法样品前处理简单、快速,准确度、精密度和灵敏度均符合农药残留检测要求,适用于甘蓝和土壤中鱼藤酮残留的检测。     

应用实时荧光定量RT-PCR高效检测葡萄病毒B

 本研究建立了葡萄病毒B的 SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测技术。该技术标准曲线扩增效率102.4%,相关系数0.999,最低检测限达10^-4倍稀释cDNA,灵敏度为常规RT-PCR的100倍。重复性试验组内和组间变异系数分别为0.00%~0.65%和0.02%~2.00%,表明检测稳定性好。该技术对田间葡萄样品检测适用范围广,对枝条和老叶柄检测效果最好,冬季枝条和春夏秋季所有老叶柄样品检出率均为100%,与常规RT-PCR检测结果一致。对于其他季节或部位样品,RT-qPCR检出率(43% ~74%)则普遍高于常规RT-PCR(5% ~71%),特别是春季样品和春夏秋季所有嫩叶样品,检出率比常规RT-PCR分别高31% 和38%。对来自我国13个省21个品种的52份田间葡萄样品检测结果表明, RT-qPCR共检测到6个样品为阳性,检出率11.5%,为常规RT-PCR(检出率5.8%)的2倍。     

克·杀单颗粒剂的反向离子对色谱分析

本文采用反相离子对色谱及双通道检测分析克·杀单颗粒剂。以LichrospherRp-8不锈钢柱为色谱柱 ,0.01mol/L四丁基溴化铵 (pH=3.2) +乙腈=70+30为流动相 ,双通道检测 :杀虫单检测波长为245nm,克百威检测波长为280nm。该方法的标准偏差分别为杀虫单0.015、克百威0.0066;变异系数分别为0.79%、1.21% ;线性相关系数分别为0.9999、0.9999,平均回收率分别为99.04%、98.83%。     

香蕉分化芽BBTV DAS-ELISA检测方法的建立和应用

为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus, BBTV)的情况, 本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法, 对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明, 6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率为2.1%, 其中‘皇帝蕉’为1.98%, ‘粤科1号’为2.07%, ‘广粉蕉’为1.98%, ‘大蕉’为6.25%, ‘218’为1.89%, ‘巴西蕉’为2.25%。为了进一步验证ELISA结果的可靠性, 随机选取12个阳性样品提取总DNA进行PCR鉴定。鉴定结果显示, 12个样品中11个检测出有BBTV, 表明DAS-ELISA方法的准确率较高, 与分子检测结果基本一致, 可以胜任日常香蕉组培苗BBTV的检测。     

葡萄卷叶伴随病毒2实时荧光定量RT-PCR技术的检测应用

通过引物筛选和体系优化建立了葡萄卷叶伴随病毒2 Grapevine leafroll-associated virus 2(GLRaV-2)的SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术。该技术标准曲线扩增效率为102.2%,决定系数为0.999,最低检出限可达10^-3稀释梯度,是常规RT-PCR的100倍。对不同季节和不同部位葡萄样品的检出率普遍高于常规RT-PCR。春夏秋季样品检出率分别为67%、89%和86%,比常规RT-PCR检出率分别高42%、28%和17%。冬季休眠枝条检出率最高(100%),与常规RT-PCR相同。夏季老叶柄和卷须、秋季和冬季枝条等样品检测效果最好,检出率均为100%。对来自我国17个省38个品种的116份田间葡萄样品检测结果表明,qRT-PCR共检测到10个样品为阳性,检出率略高于常规RT-PCR。     

西瓜和土壤中啶氧菌酯残留分析方法

本文建立了西瓜和土壤中啶氧菌酯残留检测方法。西瓜样品用乙腈提取,离心后用气相色谱ECD检测器检测。在添加0.05~1.0mg/kg水平时,啶氧菌酯在瓜瓤、全瓜和土壤中的添加回收率分别为89.3%～92.9%,91.2%～94.9%,85.4%～90.7%;RSD分别为6.6%~10.6%,7.1%~9.3%,7.3%~11.3%,检出限均为0.01mg/kg。该方法灵敏度高,检测限低,重现性好,完全能够满足西瓜和土壤中杀菌剂啶氧菌酯残留的检测。     

一种快速测定蔬菜中有机磷农药残留的气相色谱前处理方法

本文介绍了一种简捷的气相色谱前处理方法,对蔬菜中的有机磷农药残留进行快速检测.检测不溶于水的有机磷农药,添加回收率在73%～97%,相对标准偏差为1%～5%.     

毛细管气相色谱法测定茶叶中多种常用农药的残留

本文采用岛津CBP1 -M25 -025毛细管柱为分离柱 ,ECD检测 ,测定了茶叶中7种常用的不同性质农药的残留。本方法对7种农药的回收率范围为83.56%～101.16% ,变异系数为1.62%～12.62 % ,检测限为0.04～0.47×10-9g。     

烟嘧磺隆的高效液相色谱分析

本文采用高效液相色谱内标法,以乙腈 水为流动相,邻苯二甲酸二甲酯为内标物,使用SymmetryShieldTMRP-C18不锈钢柱和二极管阵列检测器,在237nm波长下对试样中的烟嘧磺隆进行分离和定量分析。结果表明烟嘧磺隆的线性关系系数为0.9998,测定4%烟嘧磺隆悬浮剂时,标准偏差为0.029,变异系数为0.70%,平均回收率为99.92%;测定烟嘧磺隆原药时,标准偏差为0.23,变异系数为0.26%,平均回收率为100.16%。     

水胺·硫丹乳油的气相色谱分析

本方法采用１０％ＳＥ－３０玻璃填充柱,正十九烷为内标物,在同一色谱条件下测定水胺硫磷、硫丹含量,其变异系数、回收率、相关系数分别为：水胺硫磷０．２１％;９９．７％～１０１．１％;０．９９９８。硫丹０．７８％;９９．６～１００．１％;０．９９９９。     

基于洛伦茨曲线的陕北黄土高原降雨分布不均匀性分析

利用建立的基尼系数降水分布不均匀性模型,对延安市和榆林市1961—2010年的降水量、基尼系数和洛伦茨不对称系数的系列进行研究,并用Mann—Kendall方法趋势分析和检验。研究结果表明,近50年来榆林市和延安市的年降水量呈下降趋势,年平均基尼系数分别为0.61和0.56;大于1的洛伦茨不对称系数的年份占总年份的比例分别约为33%和16.7%。榆林市的基尼系数呈上升趋势,洛伦茨不对称系数呈下降趋势;延安市的基尼系数呈下降趋势,洛伦茨不对称系数呈上升趋势。榆林市的降水分布不均性增强,主要是由于降水量小的月份所占的比例较大;延安市降水分布趋于均匀,降水量大的月份所占比例增加。榆林市在1972、1986年和1997年的洛伦茨不对称系数有较大波动,这些年中降水不均匀性主要是由于降水量大的月份引起的,同期也是土壤干旱异常的年份。因此,洛伦茨曲线从一种新的角度来量化评价降水分布时间不均匀性及其成因,为研究土壤干旱和水土流失等自然灾害成因机理提供科学依据。     

螺虫乙酯240g／L悬浮剂高效液相色谱分析方法研究

本文采用高效液相色谱法,以乙腈＋0．1％醋酸水溶液为流动相,使用XTerra RP18、5μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,检测波长240nm。结果表明,该方法测得螺虫乙酯的标准偏差为0．09,变异系数为0．41％,线性相关系数为1,平均回收率为100．54％。     

乙氧呋草黄20％乳油高效液相色谱分析方法研究

本文采用高效液相色谱法,以乙腈＋水为流动相,使用以ZORBAXSB—C18、5μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在225nm波长下对乙氧呋草黄20％乳油进行分离和定量分析。结果表明,该分析方法的线性相关系数为0．9991;标准偏差为0．056;变异系数为0．27％：平均回收率为100．01％。     

滴灌灌水均匀系数对温室番茄生长的影响

为探究适宜温室番茄生长的滴灌灌水均匀系数,试验设置了65%(C1)、75%(C2)、85%(C3)不同滴灌灌水均匀系数及190 mm(I1),220 mm(I2),250 mm(I3)不同的灌水量处理,以裂区试验法研究各处理对番茄生长、光合色素及品质的影响。结果表明,滴灌灌水均匀系数对番茄株高增长无显著影响(P0.05),对茎粗增长有显著影响(P0.01),灌水量、灌水量与灌水均匀系数二者的交互作用对株高、茎粗增长无显著影响(P0.05);灌水量对番茄可溶性糖、番茄红素、维生素C、可溶性固形物(除有机酸)均有极显著影响(P0.01),灌水均匀系数及二者的交互作用对以上番茄品质指标无显著影响(P0.05);在灌水量、灌水均匀系数及二者的交互作用对果实形态指数均无显著性影响(P0.05)。灌水均匀系数为75%、灌水量为190 mm条件下番茄综合品质最佳。整个生育期内滴灌灌水均匀系数65%～85%处理下,土壤含水率均匀系数为85%～95%,能满足番茄生长需要,因此针对西北地区温室作物建议下调现行滴灌灌水均匀系数标准。     

氟噻唑吡乙酮10%可分散油悬浮剂高效液相色谱分析

本文采用高效液相色谱法,以乙腈+磷酸溶液为流动相,使用以ZORBAX SB-C18、5μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在260nm波长下对氟噻唑吡乙酮10%可分散油悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明,该分析方法的线性相关系数为0.999 1,标准偏差为0.15,变异系数为1.51%,平均回收率为100.18%。     

丙炔噁草酮80％可湿性粉剂高效液相色谱分析方法研究

本文采用高效液相色谱法,试样用乙腈溶解,以甲醇＋水为流动相,使用ZORBAX80A Extend—C18、5um为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在290nm波长下对试样中的丙炔噁草酮进行分离和定量分析。结果表明,该方法测得丙炔噁草酮的线性相关系数为0．9999;标准偏差为0．13;变异系数为0．16％;平均回收率为99．84％。     

烯酰吗啉·唑嘧菌胺悬浮剂高效液相色谱分析方法研究

本文采用高效液相色谱法,以甲醇＋水为流动相,使用以ZORBAXExtend—C18、5μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在294nm波长下对烯酰吗啉·唑嘧菌胺悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明,烯酰吗啉和唑嘧菌胺线性相关系数分别为1．0000、1．0000;标准偏差分别为0．089、0．033;变异系数分别为0．44％、0．12％;平均回收率分别为100．0％、99．9％。     

毒死蜱原药中微量甲苯气相色谱分析方法的研究

本文采用气相色谱法,以外标法定量检测毒死蜱中微量甲苯的含量,其方法的标准偏差为0.13;变异系数为0.16%;线性相关系数为0.9999;平均回收率为100.4%。