鸡胚致死孤儿病毒的研究现状

鸡胚致死孤儿病毒,(Chicken Embro Lethal Orphan Virus,CELOV)属于腺病毒科,禽腺病毒属,鸡腺病毒1型,归于腺病毒A群。1954年ates等首次报告从鸡胚中分离到一种     

CELO病毒与包涵体肝炎

CELO病毒(Chicken Embryo Lethal Orphan Virus,CELOV)即鸡胚致死孤儿病毒,属于腺病毒科,禽腺病毒属,鸡腺病毒Ⅰ型,归于腺病毒A群.1954年Yates等人首次报告从鸡胚中分离到一种新病毒,并于1957年命名为鸡胚致死孤儿病毒,简称CELO病毒[1].由于CELO病毒具有禽腺病毒属各种的主要生物学特性及抗原特性,1982年国际病毒学分类委员会(ICTV)第四次报告把CELD病毒确定为禽腺病毒属的代表种.     

一例鸡腺病毒感染的诊断及防控

鸡腺病毒感染可引起鸡包涵体肝炎,病变为肝脏脂肪变性、坏死以及肝细胞内存在包涵体。为了加强对鸡腺病毒感染的治疗,需要在临床上加强诊断,给出有效意见,达到防治效果。1发病特点血清学试验证明,鸡腺病毒是禽类中的常在病毒,可从正常鸡和病鸡,以及火鸡、野鸡、鸽、鹌鹑和鹅等禽类中分离到,并广泛存在抗体。鸡腺病毒主要通过鸡胚垂直传播,可从感染鸡群的鸡胚或雏鸡所制备的细胞培养物中检出病毒。     

鸡腺病毒的保存与鉴定

本试验对保存的鸡腺病毒进行了鉴定和研究。12株鸡腺病毒在-70℃冻结保存9年后,经过SPF鸡胚肾细胞繁殖复壮2代,加入保护剂进行冷冻干燥制成种毒。12株种毒的病毒TCID50达到了104.0/0.5ml~105.5/0.5ml;其特异性鉴定表明,同型病毒可以被同型抗血清中和,而不能被异型抗血清中和。     

利用CRISPR/Cas9腺病毒载体在鸡胚中进行基因敲入研究

为研究CRISPR/Cas9腺病毒载体在鸡胚中进行基因敲入的可行性,将包装不同滴度增强型绿色荧光报道基因(Enhance green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体和慢病毒载体显微注射到HH14时期鸡胚的外周血管中,对胚胎发育至3.5 d和9d鸡胚存活、各器官中EGFP荧光强度等指标进行...     

鸡包涵体肝炎的诊断与防制

鸡包涵体肝炎是由禽腺病毒引起鸡的急性传染病。 1病原 鸡腺病毒属于腺病毒科的Ⅰ群禽腺病毒,病毒粒子的直径为70～90纳米,无囊膜。病毒的核酸为双股DNA,核内复制,产生嗜碱性包涵体。Ⅰ群禽腺病毒的血清型较多,已报道从病鸡中分离到12个以上血清型。     

CAG和MLP启动子控制的重组禽腺病毒构建

根据鸡胚致死孤儿病毒(CELOV)的序列设计引物,通过PCR方法扩增了禽腺病毒FAVI-JS株的晚期启动子(MLP),序列与CELOV的MLP同源性为99%。分别构建了MLP和商品化启动子CAG控制的表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的禽腺病毒转移载体。通过载体与禽腺病毒FAVI-JS株在原代鸡胚肾细胞内进行同源重组,分别获得了MLP和CAG控制的表达eGFP的重组禽腺病毒,为探讨不同启动子对禽腺病毒活载体疫苗免疫效果的影响提供了条件。     

禽腺病毒QU分离株的致病性及细胞适应性研究

QU分离株是一株类似产蛋下降综合征病毒,属于鸭腺病毒1型病毒。通过人工感染和细胞增殖试验,结果显示QU分离株接种无特定病原雏鸡未出现临床病症及生长发育障碍,不致死鸡胚,对鸭胚的致死率明显比引起产蛋下降的HS株低。QU株在鸡胚肝细胞、鸭胚成纤维细胞及鸡胚成纤维细胞上生长良好,产生典型细胞病变,且在鸡胚肝细胞上的增殖滴度最高,但不适应鸡胚肾细胞。这些数据说明QU株系对鸡具有低毒力的腺病毒,有可能用作禽用基因疫苗或基因治疗的候选病毒载体。     

鸡包涵体肝炎病原检测及病理学观察

取临床疑似鸡包涵体肝炎病例的肝组织,接种SPF鸡胚获取尿囊液,对获取的尿囊液进行PCR扩增和基因测序分析,成功分离并鉴定出1株鸡包涵体肝炎病毒,同时对送检病例采样进行病理组织学观察。将病死鸡肝组织研磨后,经尿囊腔接种9日龄的SPF鸡胚,用获得的尿囊液提取病毒DNA,成功获得DNA模板。根据已发表的Ⅰ群禽腺病毒hexon全基因的保守区域设计并合成1对引物,用这对引物对病毒的DNA模板进行PCR扩增,结果扩增出与目的基因大小一致的片段。病理学观察见肝组织淤血,细胞核浓缩,发生坏死,核内出现包涵体,伴有脂肪变性。测序分析表明,分离株与Ⅰ群禽腺病毒中血清4型相似性为98.6%,与其他血清型的相似性为68.7%~96.9%,与Ⅱ群禽腺病毒的鸡出血性肠炎病毒和Ⅲ群禽腺病毒的减蛋综合征病毒的相似性为44.6%,最终确定分离病毒为Ⅰ群禽腺病毒,为进一步鉴定和分离Ⅰ群禽腺病毒提供了依据。     

浅谈禽腺病毒感染鸡的特征及诊断

1949年，Van den Ende分离出一株禽腺病毒。以后．又从鸡胚中无意分离到多株鸡胚致死孤儿(Chicken embayo lethal orphan CELO)病毒。1952年Olson自患呼吸道疾病(支气管炎)的北美鹌鹑病料中分离获得了第一株发病禽的腺病毒，即鹌鹑支气管炎病毒(QBV)。鸡类腺病毒(A viadeno vires)包括鸡胚致死孤儿病毒(CELOV)，包涵体肝炎病毒(IBHV)，减蛋综合症(EDS-76)。     

鸭源禽腺病毒分离株的致病性及细胞培养特性研究

为进一步了解Ⅰ群禽腺病毒鸭源分离株的致病性和生物学特性,采取接种鸡胚和鸭胚,攻毒SPF鸡和雏鸭,并应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肝细胞(CEL)培养观察细胞病变。试验结果表明,SPF鸡胚和鸭胚均出现死亡以及心包积液等典型症状,SPF鸡和雏鸭也引起不同程度死亡,且出现与临床送检病例类似的症状,PCR检测与序列分析证实分离的2株鸭源Ⅰ群禽腺病毒均为FadV-4血清型,病毒接种CEF细胞后没有细胞病变,而接种CEL细胞后则出现很强的聚集性、细胞变圆等典型病变。表明分离的鸭源FadV-4对SPF鸡和雏鸭均具有一定的致病性,对CEL细胞具有一定的适应性。     

禽腺病毒家禽分离株的生物学特性

为了解禽腺病毒(FAV)家禽分离株的致病性,通过病毒凝集试验、电镜观察、细胞病变试验以及接种鸡胚或鸡体,研究了3株A型FAV分离株的生物学特性。结果表明,分离株具有腺病毒的典型形态,不能凝集鸡的红细胞;不引起鸡胚成纤维细胞的病变,可导致鸡胚肾细胞变圆、折光性增强;对SPF鸡胚无明显致病作用;以1.0×1010TCID50的剂量,经皮下注射和口服2种途径接种1日龄的SPF鸡,攻毒后未出现明显的临床症状,体重和免疫器官的重量基本不受影响,除肝脏出现一过性病变,大部分脏器基本无病变。因此,FAV分离株致病性低,生物安全性高,可能是较好的FAV载体。     

鸡传染性喉气管炎病毒培养特性的研究

本试验从发病鸡群分离一株鸡传染性喉气管炎病毒(命名为NM98a)，并用分离株和ILT王岗株对鸡胚绒毛尿囊膜、鸡胚尿囊腔及鸡胚肾细胞上培养进行比较研究。结果表明：ILTV经不同途径接种鸡胚和鸡胚肾细胞上培养，在鸡胚绒毛尿囊膜和鸡胚肾细胞上引起的病变不同，但最终增殖达到的感染性病毒量没有明显区别。鸡胚尿囊腔接种是ILTV增殖最佳途径。     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株生物学特性的研究

从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒，在9－11日龄SPF鸡胚上连续传代9次，通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变化、病毒在CEF中的增殖特性、凝集鸡红细胞的特性以及动物回归试验等来研究我国鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的生物学特性。结果表明，该毒株的第一代尿囊液对鸡胚无肉眼可见的致病作用，当继代到第5代后，胚体严重病变；电镜观察该病毒为典型的冠状病毒；病毒在鸡胚中随着接种病毒时间的延长，其效价增高，96小时可达到48小时的1倍，该毒株可在CEF上生长，但不能形成明显的蚀斑；并且经1％胰酶处理后可疑集鸡红细胞；鸡胚的第4代尿囊液病毒回归动物体，可致鸡病变病死鸡肾脏病变尤为明显，呈典型的花斑肾，腺胃则未见肉眼可见的病变，接种鸡、同居鸡和对照鸡之间NDV疫苗免疫后其HI抗体水平无明显差异，但从发病症状来看，IBV对ND疫苗具有干扰作用。     

Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定及hexon基因的序列分析

为调查禽腺病毒的感染状况,2008—2010年从广西南宁市活禽市场采集样品259份,通过SPF鸡胚传代增殖,经PCR鉴定,92份为禽腺病毒阳性,阳性率为35.5%(92/259)。选取不同年份的8株进行免疫琼脂扩散、血凝性、致细胞病变、形态学和鸡胚致病性试验。结果:8株均与Ⅰ群禽腺病毒阳性血清反应,不能凝集鸡红细胞,病毒粒子具有腺病毒典型特征,可致鸡胚肝细胞变圆、折光性增强,使鸡胚发育不良。将克隆的8株hexon基因进行序列比对及遗传进化分析,显示均与Ⅰ群禽腺病毒同源性最高,亲缘关系最近。结果表明,8株分离株均为Ⅰ群禽腺病毒。     

禽用活疫苗外源病毒污染情况的调查研究

为对禽用活疫苗污染外源病毒的情况进行彻底摸底调查,抽取了目前使用量大、覆盖面广的禽用活疫苗重点品种共8种28批,涉及18家国内生产企业、7家国外企业,疫苗生产用SPF鸡胚来自国内8家企业。按照《中国兽药典》2010年版三部鸡检查法和《欧洲药典》对抽检的禽病活疫苗进行了外源病毒污染和禽腺病毒污染检验。结果显示所抽检的禽用活疫苗均无外源病毒污染和禽腺病毒污染,表明我国禽用活疫苗的质量控制和安全性良好。     

不同来源鸡传染性支气管炎病毒M41株病毒特性的分析比较

为了比较2株不同来源的鸡传染性支气管炎病毒(M41)毒株的生物学特性、免疫原性及S1基因同源性.将TONG-IBV和MOU-IBV分别接种10日龄SPF鸡胚,观察鸡胚病变特点、计算病毒含量(EID50)、制备灭活疫苗进行免疫抗体效价检测,进行S1基因测序分析.试验结果表明:接种TONG-IBV株后鸡胚出血较严重,蜷缩程...     

传染性腺胃炎病毒ZJ971株的一些生物学特性

传染性腺胃炎病毒（暂定名）ＺＪ９７１毒株经鸡胚传代,可致鸡胚矮小并干扰新城疫在鸡胚中的复制。感染胚尿囊液红１％的雎酶处理后可凝集鸡和 红细胞。电镜何见８０￣１８０ｎｍ大小的冠状病毒粒子。ＺＪ９７１毒株对热（５６℃）、酸（ｐＨ３）、碱（ｐＨ１２）、乙醚和氯仿酶仿敏感,地反复冻融、胰酶不敏感。ＺＪ９７１毒株与传染性支气管炎病毒Ｍ４１、Ｔ、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ毒株病毒血清交叉中和的抗原相关Ｒ值分别为：０     

鸡胚致死孤儿病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

目的:建立鸡胚致死孤儿病毒CELO的荧光定量PCR检测方法,实现该病毒在鸡胚及禽源性生物制品中的快速检测.方法根据CELO L5纤突1序列设计引物和探针,建立荧光定量PCR检测方法,并对其线性、特异性、精密性、灵敏度进行考察.运用建立的方法对40份SPF鸡胚尿囊液和16株流感疫苗主种子批毒种进行CELO检测.结果:建立的荧光定量PCR其最佳线性范围为1x109~1x104拷贝/μl,R2值达0.99以上,特异性良好,与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应,灵敏度为102拷贝/μl;荧光定量PCR方法检测40份SPF鸡胚尿囊液和16株流感毒种结果为阴性.结论:本研究所建立的鸡胚致死孤儿病毒荧光定量PCR检测方法,特异性好,敏感性高,为鸡胚及禽源性生物制品中的快速检测提供了技术支撑.     

我国主要流行的4种血清型禽腺病毒-I群感染SPF鸡的致病性比较研究

旨在对我国流行的4种血清型(4、8a、8b和11型)禽腺病毒-I群(fowl adenovirus, FAdVs)对鸡胚和鸡的致病性进行研究,选取12日龄SPF鸡胚和10日龄SPF鸡感染4种血清型FAdVs,对SPF鸡胚和鸡的死亡率及鸡胚胚体质量进行统计;对感染鸡的大体剖检变化、组织学变化进行观察和病毒载量进行研究。结果显示,FAdV-8b和FAdV-11感染SPF鸡胚后其死亡率高于45%,FAdV-8a感染后胚体质量降低最严重,FAdV-4感染后对胚体质量影响最小;FAdV-4感染SPF鸡死亡率高达53.3%,其他组鸡无死亡;除肝出现肿胀、变性、出血和炎性细胞浸润外,4种病毒感染SPF鸡后分别造成不同组织器官的严重损伤,FAdV-4感染出现心包积液、FAdV-8a感染肌胃出现糜烂、FAdV-8b感染导致腺胃肿胀和FAdV-11感染导致胰腺坏死,各损伤组织均出现实质细胞坏死和炎性细胞浸润;4种病毒感染SPF鸡均出现免疫器官的组织学损伤,其中,FAdV-8a、-8b 和-11感染鸡引起的免疫器官内淋巴细胞缺失和损伤较FAdV-4更为严重;组织病毒载量结果显示,FAdV-4感染鸡心和肾病毒载量最高,FAdV-8b和FAdV-11感染鸡胰腺病毒载量高于FAdV-4感染组,且FAdV-4感染鸡心、肝和肾病毒载量在感染后第5天高于第3、7天,除FAdV-8a感染组外,病毒载量与各组织损伤情况相一致。综上表明,4种血清型FAdVs中,FAdV-11对SPF鸡胚的致死性最强,FAdVs对SPF鸡的致死率最高,尽管FAdV-8a、-8b 和-11不致死SPF鸡,但对SPF鸡胚、SPF鸡的消化系统和免疫系统损伤较为严重,这将会造成鸡胚孵化率降低、鸡生长发育缓慢和易于继发其他病原感染。