猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG的制备

应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定.结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和Western-blot的鉴定显示该特异性抗体IgG具有很好的免疫原性,特异性强,仅与该病毒毒株的ORF5发生特异性结合.说明兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体具有良好的免疫原性和特异性,可与猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5特异性结合,可以作为诊断试剂和诊断试剂盒的一抗.     

柴胡解毒注射液的制备及体外抗PRRSV作用试验

为筛选抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的中药，制备柴胡解毒注射液，并以其为试验药物，同时以利巴韦林注射液作为对照药物。观察在细胞上对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的作用效果。结果表明，自最大安全浓度做倍比稀释后．对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒均具有一定的抑制、杀灭和阻断作用。其中，柴胡解毒注射液抑制和杀灭作用均较为突出．利巴韦林注射液杀灭和抑制作用均较为显著。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制

为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体,用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA）筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1D12、5H5,经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM,2株均为κ链,腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以纯化的PRRSV全病毒抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,并测定其免疫球蛋白亚类、效价和特异性。结果成功获得2株能稳定分泌抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为3C3、3D2,经鉴定亚类均为IgG2a、kappa链。2株单克隆抗体腹水ELISA效价达105～107,IPMA效价达1:2560～1:10240,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒等无交叉反应。结论获得特异性针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的单克隆抗体,为研究该病的快速诊断技术奠定基础。     

不同特性IgG促进PRRSV在PAM细胞中的增值作用

本试验通过研究IgG对猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)增殖情况的影响,来探讨抗PRRSV特异性和PRRS非特异性抗体在PRRSV-ADE中的作用。分别将抗PRRS特异性IgG(2.64g/L)和非特异性IgG(2.63g/L)作倍比稀释,与等体积含200TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备成一系列的感染性免疫复合物(PRRSVIgG)和阴性抗体-病毒混合液(PRRSV+IgG),接种PAM细胞;同时将纯化的猪阴性IgG(2.63g/L)和兔抗猪IgG(2.64g/L l)等体积混合制备免疫复合物(IC),分别与等体积含200TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备成免疫复合物-病毒混合液(PRRSV+IC),接种PAM细胞。接种24h后,用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV的mRNA水平。同样的方法,分别将2倍稀释的PRRSV-IgG,PRRSV+IgG和4倍稀释的PRRSV+IC接种PAM细胞,用实时荧光定量PCR方法分别检测感染12、24、36和48h后不同时间段内PRRSV的mRNA水平。结果显示,一定质量浓度的PRRS特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体,在感染48h内均能极显著促进PRRSV在PAM细胞中增殖;而适当剂量的免疫复合物,在感染48h内也均能促进PRRSV在PAM细胞中增殖。结果表明,一定质量浓度的PRRS特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体均能促进PRRSV在PAM细胞中增殖,但是不同特性的抗体对PRRSV的增殖能力存在着差异。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93．3％。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。     

高致病性猪蓝耳病直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原.本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16 h可检测到抗原阳性细胞,接种后60 h～72 h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38).该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定.FA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法.     

驴抗犬细小病毒IgG的研制

用关中驴制备抗犬细小病毒（CPV）免疫球蛋白，预防和治疗犬CPV感染。制备CPV抗原复合物，通过免疫驴，用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体（IgG），经过物理化学检定、血清学、免疫金电镜技术、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG，免疫金电镜可观察到抗原抗体免疫复合物；血凝抑制试验（HI）≥1：512（IgG浓缩浓度为60mg/mL)；可保护犬免受CPV攻击；室温保存半年，4℃两年效价不变。已成功地应用CPV免疫驴制备出高效价特异性抗CPV－IgG。     

分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定

用纯化的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)免疫Balb／c小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术．取脾细胞与NSn骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选，3次有限稀释法克隆，得到1株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株：6Pg。经鉴定，该单抗为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条，杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1：256和1：20480。经Western-blot鉴定为针对N蛋白的单抗。6Pn株单克隆抗体与伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应，显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体。此单克隆抗体的获得为PRRSV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

为制备具有中和活性的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用PRRSVSD53株的超离病毒作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠并进行细胞融合。采用PRRSVSD53株和真核表达的PRRSV各结构蛋白作为检测抗原,应用间接免疫荧光试验(IFA)筛选到一株稳定分泌抗SD53株GP4蛋白的杂交瘤细胞株(LM26)。抗体亚类鉴定其为IgG2a,轻链为κ链。原核表达一系列截短的GP4蛋白鉴定LM26的抗原表位结果显示,LM26识别的抗原表位序列为57VVLQDI^62,此抗原表位在美洲型PRRSV中相对保守。病毒中和试验结果显示,MAb LM26仅针对PRRSV SD53株具有中和活性,中和效价最高为1∶50,对其它美洲株PRRSV均不具有中和活性。该MAb的制备为进一步研究PRRSVGP4蛋白的结构和功能奠定了基础。     

马的咽气癖及其防制措施研究进展

在动物的异常行为中以刻板行为最为常见,而咽气癖又是马最常见的口部刻板行为之一。作者就咽气癖在生理方面和心智方面对马体产生的影响、行为基础、诱因的研究进展及常见的防治措施进行综述。     

奶牛肢蹄病及其防治

简介常见奶牛肢蹄病种类及其症状,从日粮营养、运动场地面结构、环境卫生、饲养管理、遗传育种、疾病管理等方面简析奶牛肢蹄病的病因,并提出相应的预防措施。     

广西芒果主要病虫害及其防治

广西是我国主要的芒果生产基地。随着基地建设的发展,芒果病虫害已成为目前栽培管理的主要问题。为此,在调查、研究的基础了介绍了当前芒果生产中常见的病虫害,并提出了防治措施,以期为生产上提供技术参考。     

RFLP和PCR-RFLP标记与牦牛遗传育种研究

在归纳总结RFLP和PCR-RFLP标记技术的原理、优缺点的基础上,系统论述了其在牦牛遗传育种研究中的应用现状,并提出了个人的建议和看法。     

鸡禽霍乱疾病流行病学特点及防控措施

鸡养殖中禽霍乱疾病的出现主要是由于多杀性巴氏杆菌感染的一种传染性疾病,主要会导致鸡只出现急性败血症和机体炎症反应等,慢性型感染会导致鸡只出现皮下及机体内脏器官、关节等的化脓性炎症反应。禽霍乱疾病在鸡养殖全年均会出现,尤其是在气温变化较大的时期疾病爆发的可能性更高。禽霍乱疾病在急性爆发的情况下病死率相对较高,同时短期内即会出现死亡的情况,难以进行有效的治疗,易导致鸡养殖户出现严重的经济损失。该文主要对鸡禽霍乱疾病的流行病学特点、临床症状及相关的防治措施进行论述。     

微卫星标记及其在羊遗传育种中的应用

微卫星DNA (Microsatellite DNA)与其他DNA分子标记相比较,具有数量多、分布广且均匀、多态性丰 富、呈孟德尔共显性遗传、易于检测、分析快速方便等一系列优点,并在动植物遗传多样性评估、遗传连锁图谱构建、 绘制系统发生树、QTL定位、标记辅助选择、疾病诊断及血缘关系鉴定等研究领域中得到广泛应用。本文就微卫星标记 及其在羊品种遗传育种中的应用作一综述。     

再探草坪的起源与演化及其概念——中文·汉语的“草坪”一词及其他

初步考证中文·汉语的“草坪”一词及相关文史资料。再次证明中国自古分布有天然草坪。文字记载早在西汉武帝建元年间 (公元前 138年 )已大面积栽培草坪 ,于今至少有 2 139年历史。当时的草坪科学技术水平已有相当高度 ,发现并选用了结缕草 (Zoysiaspp .) [或狗牙根 (Cynodondactylon) ]和“戾莎 (Carexspp .)”等草坪草 ;发明了大面积整理地形、地貌及平整土地 ,针对不同生活型的草坪草采取“布”或“攒”等不同的建植草坪方式。嗣后 2 0 0 0年 ,处于移植天然草坪为“人工草坪” ,向人工草坪演化的过渡阶段。期间 ,于南齐·昏侯 (499～ 5 0 1)又发明了“满铺草坯”建植草坪等技术。所有的发现、发明不仅沿用至今 ,而且导致清道光朝 (182 1～ 185 1)诞生了中国式人工草坪。现代草坪缘鸦片战争 (184 0 )而传入。相伴近、现代草坪的普及 ,于清道光、咸丰年间 (184 0～ 186 1) ,市郊农村已有“草坪专业户”与“草坯专业户” ,至 2 0世纪 5 0～ 70年代 ,“草坪”一词先后被列入“词 (辞 )典”和“百科全书”等。　　中文·汉语自古以来的草坪概念“平的草地” ,“长草若毛 ,‘剥’取似皮的草地表层”都清楚地规定了 :草坪是一类特殊的草地