适用于PCR的棉花基因组DNA快速、批量制备方法的探讨

通过筛选和优化传统CTAB SDS法的操作步骤,建立了一种快速、批量提取棉花基因组DNA的方法.结果表明:利用该方法提取的DNA含量高,能够满足PCR的要求.初步解决了棉花基因组DNA提取步骤复杂、耗时耗力的问题,为转基因作物育种领域的分子检测提供可行的方法.     

棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。     

利用涡旋混合器对棉花基因组DNA提取方法的优化及SSR技术应用

为获得80个陆海杂交高代自交系材料的幼嫩叶片的高纯度、高完整性的DNA,应用涡旋混合器对传统的棉花基因组DNA的提取过程进行改进。结果显示:获得的棉花基因组DNA具有高完整性、高纯度的特性,SSR分子标记结果明显。利用涡旋混合器能有效提高棉花基因组DNA完整性及纯度,为后续开展棉花分子育种奠定了基础。     

水稻基因组DNA简易制备方法

介绍了一种用于PCR的水稻基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量(1～50mg)样品、适量提取液(500μL)和一粒钢珠放入2mL离心管,在细胞破碎仪中粉碎2min,经离心后可直接取少量(约5μL)上清液作为PCR的模板DNA,也可进一步根据需要实现高质量DNA的提取。该方法具有成本低、操作快速简便等优点,一个人可以在10min内完成96份样品DNA的简易制备,特别适合高通量的分子检测。     

不同方法提取棉花DNA的比较

主要通过选用国丰棉12为材料,对不同方法提取出的DNA进行扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明:改良SDS法和改良CTAB法分别优于原SDS法和CTAB法,原SDS法和CTAB法分别优于氯仿一异戊醇法,由改进方法提取的棉花基因组DNA质量较高,能满足SSR等后续分子生物学研究的需要.     

转导外源总DNA创造棉花新种质

采用不同的方法,将陆地棉某品种外源ＤＮＡ导入到另一品种中,第１代产生的变异能够在第２代得到表现。这对稳定后代性状,缩短种质创新所限提供了一种新的方法。     

转导外源总DNA创造棉花新种质

采用不同的方法,将陆地棉品种外源DNA导入到另一品种中,第一代产生的变异能够在第二代得到表现.这对稳定后代性状,缩短种质创新年限提供了一种新的方法。     

柚基因组DNA提取方法的研究

以下河蜜柚的幼嫩叶片为材料,采用CTAB法、SDS法和SDS-CTAB法3种不同的DNA提取方法提取其基因组DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。分析结果表明,无论从得率还是DNA质量上看, SDS-CTAB法明显优于其它两种方法。     

微波炉烘干棉花叶片用于DNA提取的效果分析

采集棉花未展真叶、平展嫩叶和平展成熟叶用微波炉中火烘干后提取DNA,简单序列重复(Simple sequence repeat,SSR)引物扩增后的图谱显示未展真叶的DNA扩增效果不好。进一步开展了用平展子叶和全展真叶烘干的试验,发现平展子叶和全展真叶在微波炉低火、中火和高火条件下烘干后均能获得质量较好的DNA,能够满足后续分子试验的要求。烘干叶片密闭存放1周后仍能获得较好的DNA。烘干叶片提取的DNA OD260/OD280比值偏高,但不影响后续的SSR分子鉴定试验。     

DNA鉴定棉花杂交种纯度势在必行

利用杂种优势是促进棉花高产优质的有效途径。杂种优势的表现在很大程度上取决于杂交种的纯度,棉花杂交种纯度鉴定的方法虽然有多种,但只有DNA分子标记技术鉴定快速而准确,是势在必行的鉴定方法。     

国际棉花基因组测序计划解读

通过对陈增建等2007年发表于美国《植物生理学》的《棉花基因组测序白皮书》等文章的综合理解,来解读国际棉花基因组测序的意义与展望,以及国际基因组织在棉花基因组测序的方法、重点突破方向、目标等方面达成的共识。为棉花种质研究和品种改良提供参考。     

甘蔗基因组DNA提取方法的比较

采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种高质量去除多糖、色素和蛋白质等杂质的有效方法,所提取的DNA适合于甘蔗各分子生物学研究。     

棉属D基因组5个野生种萌发期耐冷性初探

为了挖掘具有耐冷潜力的野生棉资源,分析了棉属D基因组5个野生棉种在20,15和10 ℃条件下萌发指标的变化,采用模糊隶属函数法综合评价了5个野生棉种的耐冷萌发能力。结果表明,随温度的降低,5个棉种的相对发芽率、相对发芽势、相对发芽指数和相对活力指数均呈降低趋势。在不同的低温胁迫下,各萌发指标及隶属函数结果均表明雷蒙德氏棉具有较高的耐冷水平。本研究对5个野生棉种的耐冷性进行了初步探讨,但对各棉种耐冷性的鉴定及分子机理等有待进一步研究。     

一种快速提取玉米基因组DNA的方法

实验以SDS为主要提取试剂,建立了用于玉米叶片基因组DNA的微量快速提取方法。结果表明:利用此方法提取的玉米叶片基因组DNA具有使用药品少、操作简单、迅速、成本低等优点,每人每工作日可以提取180～250个DNA样品,一个样品可供80～100次PCR反应使用。此DNA提取方法可有效用于玉米的转基因成分检测。     

油梨基因组DNA的提取及RAPD分析

用改进的ＳＤＳ法提取油梨基因组ＤＮＡ,即在细胞核被裂解之前,先去除细胞质中的酚类物质和蛋白质,然后用ＳＤＳ裂解细胞核,异丙醇和乙醇沉淀ＤＮＡ,成功地从油梨叶片中提取和纯化了ＤＮＡ。以１０个油梨品种的基因组ＤＮＡ为模板,４０个随机引物进行ＲＡＰＤ分析,结果表明,大部分引物可以在不同模板上扩增出条带,但仅有７个引物可以同时在１０个品种的油梨ＤＮＡ上扩增出条带;用ＲＡＰＤ结果对１０个油梨品种进行聚类分析,基本符合传统分类观点。     

两种不同甘蔗基因组DNA提取方法的比较

采用改良CTAB法和SDS法提取甘蔗嫩叶与正一叶基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳与紫外光吸收检测,证明SDS法能获得高质量的DNA,适合分子生物学操作的要求,为后续甘蔗遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究奠定基础。     

野生大豆核基因组Mb级DNA的制备与酶切

以野生大豆黄化幼苗为材料提取其细胞核DNA,经LMP包埋并用蛋白酶K裂解其中的核蛋白后,采用脉冲电泳回收2 Mb左右细胞核DNA.用HindⅢ对回收细胞核DNA进行部分酶切并用脉冲电泳回收酶切后的DNA片段,经电洗脱、浓缩和透析后DNA溶液浓度可达10 ng·μL<,-1>.连接转化检测结果表明:该DNA可用于后续野生...