杜鹃基因组DNA提取方法的研究及应用

杜鹃是广泛分布于北亚热带地区的常绿或者落叶灌木。本研究以杜鹃成熟叶片为材料,比较了4种方法提取基因组DNA的效率,并分别采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测所提取DNA的浓度和纯度,用ISSR和SSR两类分子标记进一步检测了DNA的质量。结果表明改良的3×CTAB法提取的基因组DNA效果最好,提取的DNA浓度为487.9μg/mL,得率为81.31μg/g,该种方法提取的DNA可直接用于分子标记扩增分析。因此,3×CTAB法是一种高效、可靠且非常适合杜鹃等灌木植物分子生物学研究的DNA提取方法。     

用随机扩增多态DNA (RAPD)技术分析野生与笼养绿孔雀种群的遗传多样性

利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对野生14个和笼养18个绿孔雀(Pavomuticus)个体进行了种群遗传多样性分析。用23个随机引物对野生与笼养绿孔雀基因组DNA扩增,分别获得161和166个扩增片段。计算发现野生与笼养绿孔雀的种群内平均相对遗传距离分别是0.0555和0.1355,两种群间的平均相对遗传距离为0.1635;野生绿孔雀和笼养绿孔雀种群的Shannon多样性指数平均分别是0.4348和1.0163,表明有显著性差异。以上分析都显示野生绿孔雀的遗传多样性很低。利用UPGMA法聚类显示两个种群都是分别来源于两个家系,可据此进行绿孔雀的繁育管理。图1表3参5。     

核桃DNA的提取及RAPD分析的引物筛选

以核桃叶片为材料,对其DNA提取方法和RAPD引物的筛选进行了研究。结果表明,采用核沉淀法从核桃叶片中能提取到高质量的DNA,可以用于RAPD分析;从120条随机引物中筛选出了14条显示核桃遗传差异的多态性引物。     

用于DNA分析的动植物检材的收集和保存

随着野生动植物保护执法力度的进一步加强和人们法律意识的提高,在森林刑事案件中,人们对证据的要求也越来越严格.在国内外野生动植物的保护执法中,DNA证据逐渐发挥重要作用.1989年,第一例关于野生动物保护的DNA证据在北美法庭上被采信.随后的十多年时间里,在北美洲野生动植物的保护执法中DNA证据逐渐被广泛使用.近年来,我国森林公安在执法活动中也开始重视DNA证据.但是,对用于DNA测试分析的检材,如野生动植物的整体或部分及其衍生物应该如何收集和保存才能使DNA证据更加准确可靠,这是一个需要关注的问题.     

12种夹竹桃科植物的RAPD分析

从80个随机扩增多态性DNA(RAPD)随机引物中筛选出22个谱带清晰且重复性好的引物用于PCR扩增,探讨夹竹桃科(Apocynaceae)10属12种植物的遗传关系。获得162个位点用于计算Nei’s遗传相似性系数,并应用NTSYS程序UPGMA法构建了系统发育树。黄蝉(Allamanda schottiiPohl.)与软枝黄蝉(A.catharticaL.)、红鸡蛋花(Plumeria rubraL.)与鸡蛋花(P.rubraL.‘Acutifolia’)之间的遗传相似性最高;在遗传相似性系数0.73处将12种植物划分为10个属,并在0.58处分为3支,但并不完全支持3个独立的亚科。RAPD分析结果与形态学的分析结果基本一致,可为夹竹桃科系统分类学提供分子生物学的证据。     

枫香DNA提取方法与PCR扩增程序的优化

从SDS、CTAB、高盐低pH值3种方法中选择了CTAB法作为枫香适合的DNA提取方法,同时构建了枫香DNA的PCR扩增程序,并从Mg^ 浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、引物浓度、DNA模板用量等方面优化了PCR扩增程序。     

相思基因组DNA提取及其RAPD初步分析

以马占相思、大叶相思、厚荚相思幼苗的叶片为材料,采用SDS法、改良SDS法和改良CTAB法进行了基因组DNA的提取并对DNA提取方法作了比较,结果表明改良CTAB法提取效果最好。同时利用改良CTAB法提取出的DNA为模板进行了RAPD分析,鉴别了不同树种之间的多态性。其中有11个引物共扩增出117条谱带,树种间多态性比率为54.7%,遗传多态性明显高于种内。     

山核桃基因组DNA提取方法的比较研究

植物体内所含的蛋白质、单宁、酚类、多糖及色素等次生代谢物质影响TaqDNA聚合酶的活性,是导致PCR扩增反应失败的主要因素。以山核桃嫩叶为材料,对分别用经过改良的SDS法、改良的CTAB法、简易CTAB法及改良的高盐低pH法提取的基因组DNA进行检测比较,结果显示,改良的SDS法更适合于山核桃基因组DNA的提取,此方法提取的DNA能很好地用于PCR扩增。     

八角基因组DNA的提取方法

采用4种植物基因组DNA提取方法(CTAB法、SDS法、高盐法、试剂盒法)对八角基因组DNA进行提取试验.结果表明,对传统CTAB法稍加改良可以得到较为理想的提取效果,改良的内容包括①在加入CTAB提取缓冲液之前,先用CTAB-free缓冲液抽提1～2次;②将CTAB提取缓冲液中CTAB的用量从2％提高到3％;③提取缓冲液的用量由样品干重的10倍增加到60倍.用改良CTAB法提取的DNA经RAPD-PCR扩增,条带清晰,其质量能够满足分子标记的要求.     

油松DNA的提取及RAPD标记技术试验初报

本试验利用RAPD技术,对陕西陇县八渡林场油松种子园14个无性系进行遗传分析.试验确立了提取油松嫩梢DNA方法,提取的DNA可用于RAPD扩增;通过对RAPD反应体系的优化,建立了油松扩增的反应体系和反应程序;用筛选出的8个引物对14个油松无性系进行扩增.共扩增出23个条带,其中具有多态性的条带为14条,占总扩增条带数的60.8%,结果表明:检测到了14个油松无性系具有较丰富的DNA多态性.     

倍蚜种间亲缘关系及角倍蚜种群分化的RAPD分析

从40条RAPD随机引物中筛选了13条和9条,分别对11种倍蚜和角倍蚜4个地理种群的DNA进行PCR扩增和分析.结果表明:倍蚜的遗传距离在不同属之间为0.482 8±0.170 8,不同种之间为0.252 0±0.178 0,不同亚种之间为0.147 2±0.076 4,聚类分析反映了倍蚜属间、种间的亲缘关系及其远近程度,与形态分类结果基本一致;圆角倍蚜属与其他3个属的差异明显,可能是倍蚜中较早分化的类群.角倍蚜不同种群间的遗传距离为0.075 9±0.030 2,种群间具有丰富的DNA序列多态性并出现了一定程度的遗传分化,造成这种分化的原因可能是地理上的隔离.     

一种用于软枣猕猴桃ISSR分析的芽DNA提取方法

建立以芽为试材的软枣猕猴桃DNA提取方法,可实现样品的随时采集和ISSR分析。以软枣猕猴桃品种桓优1号为试材,分别采集展叶期的叶片和落叶期的芽,用改进的CTAB法提取基因组DNA并进行ISSR检测。结果表明:两种试材提取的DNA无降解,OD260/OD280值介于1.72～1.85,纯度和完整性均较好,两者ISSR扩增条带一致。该方法为后续软枣猕猴桃种质资源的鉴定和评价提供了技术保障。     

鲜叶保存方法对杜鹃红山茶基因组DNA提取的影响

以富含次生代谢物的杜鹃红山茶嫩叶为材料,研究了杜鹃红山茶鲜叶保存方法及其基因组DNA提取方法。结果表明,改进的CTAB和SDS区室法都适合杜鹃红山茶基因组DNA的提取,能提取到完整性较好、纯度较高的基因组DNA。采用-20℃、液氮、硅胶脱水干燥3种方法保存样品,均可获得高质量DNA,说明硅胶脱水干燥法保存样品的方法可行,为远距离采样提取杜鹃红山茶DNA提供了一种较好的鲜叶保存方法。     

杜仲种仁桃叶珊瑚苷含量的测定及积累规律

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是我国特有的名贵经济树种,杜仲皮、叶、果实、雄花等都是我国十分珍贵的药用、工业原料和新材料资源,具有很高的经济价值[1-3].杜仲果实包括杜仲果皮和种仁,果皮中富含杜仲胶和多糖等,对杜仲果皮内杜仲胶的形成积累规律及其群体变异规律、个体变异规律均已进行了系统研究[4-8].     

云南箭竹基因组DNA的提取及RAPD反应条件的优化

用改良的SDS法从云南箭竹硅胶干燥的叶片中提取基因组DNA进行RAPD扩增。通过正交法对RAPD反应条件优化,6个试验因子的最适条件为:模板DNA1.5ng/μL,随机引物0.8～1.0μmol/L,dNTPs浓度0.1～0.15mmol/L,Mg2+浓度2.0～2.5mmol/L,Taq酶用量0.5～1.0U。最佳热循环参数为:94℃预变性2min,之后进行40次循环(94℃变性30s,36℃退火60s,72℃延伸90s),最后72℃总延伸7min后在4℃终止反应。     

大叶栎总DNA两种提取方法的比较

对大叶栎的总DNA两种提取方法进行对比试验,从外观、浓度、A260/A280、A260/A230、电泳检查和ISSR扩增对所提取到的DNA进行对比,结果显示用改良CTAB法提取的DNA在各方面都达到ISSR扩增的要求,是大叶栎总DNA提取的较好方法。     

杉木采样时间及DNA提取方法的研究

从材料中提取ＤＮＡ时,必须因材而异,杉木材料中含有较多的酚类等粘性物质。对杉木的采样时期及其 ＤＮＡ提取方法进行的研究表明：５月份采取杉木新芽 ３ ｇ,用 ＣＴＡＢ洗净法可以获得浓度和纯度最高的ＤＮＡ。     

接种ERM真菌对桃叶杜鹃幼苗的促生效应及生理生化影响

通过12个不同ERM真菌菌株接种2年生无菌实生桃叶杜鹃幼苗,研究接种对幼苗生长势与生物量的影响,分析ERM菌株对内源激素含量与氧化酶活性的变化.结果表明:接种显著提高桃叶杜鹃幼苗的苗高、地径、叶面积、主根长和生物量.接种苗苗高比对照增加29.47％ ～ 73.68％,地径比对照增加11.16％～70.09％,总生物量比对照增长3.86％～61.22％;地上部分干质量增幅最高值为99.69％,地下部分干质量增幅最高值为27.27％.ERM菌株显著提高接种苗地上和地下部分吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、玉米素核苷(ZR)、脱落酸(ABA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性,降低了丙二醛(MDA)含量.ERM真菌可能是通过分泌激素或刺激植株分泌激素,几种激素物质的协调配合来促进桃叶杜鹃幼苗的生长.从综合接种效应来看,TY29,TY35,TY12,TY18,TY14和TY02是培育桃叶杜鹃菌根苗优良备选菌株.     

不同提取方法对厚朴叶片总DNA提取效果的影响

以厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils)叶片为材料,采用SDS-CTAB结合法、高盐低pH值法、CTAB法、SDS法等4种方法分别对2种方法保存的样品及对照样(鲜叶)进行了基因组DNA提取效果的比较,并进行ISSR-PCR检测。结果表明:4种方法均能从厚朴叶片中获得高质量的DNA,其中以SDS-CTAB结合法所得的DNA纯度最高,高盐低pH值法次之,CTAB法提取的厚朴叶片DNA纯度最低;高浓度NaAc的引入及相应的冻融,可以提高所得厚朴基因组DNA的纯度;硅胶干燥和-70℃超低温保存的样品与鲜叶相比,所提DNA的质量无明显差异,均能满足PCR扩增的要求。     

一种适合AFLP分析的油茶DNA提取方法

以油茶的成熟叶片为材料提取DNA,40个样品用改良的提取纯化方法成功提取出适用于AFLP分析的高质量DNA,OD260/OD280在1.7-2.0之间,可以用于AFLP反应。该方法打破了仅能用幼嫩叶片作为提取材料的限制,具有更广泛的适用性和重要的实用性。