利用放线菌固态发酵生产农用抗生素的初步研究

采用杯碟法研究了4株拮抗性放线菌固态和液态发酵产物对辣椒疫霉病菌(Phytophthoracapsici)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureaus)、埃希氏大肠杆菌(Escherichiacoli)及青霉(Penicillium)4株供试靶标菌的抑菌活性。结果表明,利用放线菌固态发酵生产农用抗生素的思路是可行的。供试的04,07和08号3株放线菌大米固态发酵产物与黄豆粉液态发酵产物对靶标菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureaus)的相对抑菌环宽度分别为4.0mm/g与0.7mm/mL,对埃希氏大肠杆菌(Escherichiacoli)的相对抑菌环宽度分别为5.2mm/g与1.1mm/mL,供试菌固态发酵抗生素活性远大于液态发酵,表明通过固态发酵提高抗生素得率的设想在微生物合成阶段是可以实现的。同时还发现,固态与液态两种发酵模式对某些抗生素的合成有极显著影响。     

放线菌19G-317菌株发酵产物抑菌活性初步研究

【目的】明确放线菌19G-317菌株发酵产物对植物病原菌的抑制活性,为该菌株在农业病害防治中的开发应用及后续研究奠定基础。【方法】采用生长速率法、孢子萌发法、活体组织法和盆栽试验,测定放线菌19G-317菌株发酵产物的抑菌效果。【结果】生长速率法试验表明,放线菌19G-317菌株发酵产物对供试22种植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,发酵液对其中11种植物病原菌的抑制率大于60%,菌丝提取物对其中8种植物病原菌的抑制率大于90%;发酵液和菌丝提取物对油菜菌核病菌菌丝生长的EC50分别为84.30和18.80 mg/L。孢子萌发试验表明,发酵液和菌丝提取物对番茄灰霉病菌孢子的萌发均有较强的抑制作用,在0.5 mg/mL质量浓度下,其抑制率分别为94.26%和96.20%;组织法试验表明,在10 mg/mL质量浓度下,发酵液和菌丝提取物对番茄灰霉病的药效分别为72.17%和76.95%;盆栽试验表明,19G-317菌株发酵液和菌丝提取物对辣椒疫霉病均有一定的保护和治疗作用。【结论】放线菌19G-317菌株抑菌谱较广,对植物病菌的防治有很大的研究开发潜力。     

94株土壤放线菌抑菌活性的初步筛选

以油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌为指示菌,采用生长速率法对94株土壤放线菌进行抑菌活性筛选。发现AXW4-1菌株等10株放线菌发酵液至少对3种病原真菌中的1种有60%以上的抑制率,占总测试菌株的10.64%。对这10株放线菌进行抑制孢子及菌核萌发试验,结果获得4株活性较高的菌株,其中AXW4-1和HVA29-2菌株发酵液对番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率分别为86.9%和78.8%,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液10倍稀释液对油菜菌核病菌的菌核萌发抑制率均为86.1%;油菜叶片组织法试验表明,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液对油菜菌核病的药效均在90%以上。     

土壤中抑菌放线菌的筛选鉴定及发酵条件研究

采用弹土法从高黎贡山百花岭段土壤中共分离到放线菌38株,对分离得到的38株放线菌的发酵液进行抑菌活性测定,其中H33菌株对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母都具有较好的抑菌作用,其抑菌直径都在8 mm以上。通过对H33菌株培养特征、显微特征和生理生化特征的研究,初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)。H33菌株的最佳发酵培养基为发酵培养基2(葡萄糖0.5 g、蛋白胨0.25 g、胰胨0.15 g、NaCl 0.25 g、重铬酸钾7.5 mg、复合维生素10 g、水500 mL,pH 7.2),最佳发酵时间为6 d,最适发酵培养基pH为7.0,最适培养温度28℃。     

一株放线菌次生代谢产物抗菌活性的初步研究

研究了从秦岭山区中筛选得到的一株放线菌(编号为No.24),对其产生的次生代谢产物的抑菌活性进行了测定。生测结果表明,离体条件下,发酵液对农业常见的病原真菌均有较强的抑制作用,对苹果轮纹病菌和小麦根腐病菌的菌丝生长抑制作用最强,其EC50分别是146.87 mg.L-1和164.09 mg.L-1;对玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌孢子萌发的抑制作用较强,其EC50分别为129.33 mg.L-1和184.99 mg.L-1。盆栽试验在浓度为6 000 mg.L-1时对小麦白粉病的保护和治疗作用分别为76.1%和70.7%,对番茄灰霉病的保护和治疗作用分别为66.9%和61.1%。田间药效试验结果表明,No.24菌株发酵液可以有效控制番茄灰霉病和小麦白粉病的进一步蔓延。     

除草活性放线菌SYM-2的筛选与发酵条件研究

从辽宁省丹东、营口、大连、盘锦、铁岭和沈阳6个地区的蔬菜田采集29份土样,分离得到138株放线菌,用种子萌发法筛选出对马唐种子萌发有显著抑制活性的菌株SYM-2,校正抑制率达71.43%。通过单因素试验和正交试验对其摇床发酵培养基成分及发酵条件进行研究。当发酵培养基的碳源为可溶性淀粉,氮源为硝酸钾,无机盐为硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁、氯化锰和磷酸氢二钾时,放线菌SYM-2发酵液校正抑制率显著高于添加其他同类成分的处理。正交试验得到发酵培养基各组分的最佳配比为可溶性淀粉2.0%、硝酸钾0.1%、硫酸镁0.075%、氯化钠0.025%、硫酸亚铁0.001%、氯化锰0.1%、磷酸氢二钾0.025%,优化后发酵液对于马唐的校正抑制率达到84.13%。当该菌株的发酵条件的初始pH值6.0,发酵时间84h,接种量10%,250mL容器装液量100mL,温度32℃时,发酵液的校正抑制率显著高于其他各组。     

产抑菌活性物质放线菌菌株的筛选

[目的]筛选产抑菌活性物质的放线菌菌株。[方法]以金黄色葡萄球菌、对青霉素和头孢菌素类耐药的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为指示菌,采用滤纸片扩散法对300株放线菌的发酵产物进行抗菌活性筛选,通过最小抑菌浓度法（MIC）对筛选的阳性菌株进行抗菌活性测定。[结果]筛选到抗菌活性物质产生菌111株,抑菌率为37.0%;其中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和耐药金黄色葡萄球菌有抑制活性的菌株分别为111、10和47株。各菌株的最小抑菌浓度有很大差别,菌株174883对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,其发酵样品稀释到2 048倍仍然表现出抑菌活性。用青霉素酶和头孢菌素酶作用于阳性菌株发酵产物,筛选到6株菌株代谢产物的抑菌活性变弱,菌株32349和kj0428的抑菌活性被抑制最明显。[结论]筛选得到的阳性放线菌菌株具有良好的抗菌活性,为新型抗生素的筛选提供了研究基础。     

土壤中抗真菌放线菌LH33发酵提取物活性研究

【目的】对抗真菌放线菌LH33菌株发酵提取物的活性进行初步测定,为后续的生防制剂研发提供科学依据。【方法】制备从渭北旱塬轮作土壤中筛选出的放线菌菌株LH33的发酵提取物,检测其对番茄灰霉病菌孢子萌发的抑制作用及对番茄灰霉病的防治和番茄的促生作用,并采用生长速率法测定其抑菌谱。【结果】在离体条件下,LH33发酵提取物对番茄灰霉病菌孢子的萌发具有强烈的抑制作用。在温室条件下,LH33发酵提取物对蕃茄灰霉病具有很好的预防和治疗效果,100 mg/L的LH33发酵提取物对番茄灰霉病菌预防和治疗效果最高,分别为94.2%和80.4%。LH33提取物对大多数供试病原真菌都有很好的抑制效果,其中1 mg/L药液对部分病原真菌抑制率在45%以上。菌株LH33发酵提取物能促进番茄的生长,番茄植株鲜质量的增幅可达到95.1%。【结论】菌株LH33可防治水稻、番茄、小麦、棉花等多种植物真菌病,并对植物的生长有促进作用。     

蓟县山区土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选

[目的]筛选能产生新的抗菌物质的放线菌菌株。[方法]采用稀释法从蓟县山区采集的土样中分离放线菌菌株,并通过抑制菌丝生长速率法、管蹀法和盆栽试验测定其抗菌活性。[结果]在分离到的159株放线菌菌株中,有9株放线菌的发酵液在离体条件下对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用;有26株菌株发酵液对至少1种供试病原真菌的菌丝生长抑制率在70%以上。其中,TJ93菌株发酵液对6种供试真菌均有较强的抑制作用,对黄瓜霜霉病和小麦白粉病有一定的保护和治疗作用。[结论]TJ93菌株抗菌谱较广,对植物病害的防治具有较大的研究开发潜力。     

抗多重耐药金黄色葡萄球菌土壤放线菌筛选

[目的]从土壤中发现拮抗多重耐药金黄色葡萄球菌的放线菌。[方法]将土壤稀释后在高氏一号培养基上划线分离放线菌,并测试抗菌活性。[结果]获得放线菌一株B0602具有很强的抗菌活性。[结论]放线菌B0602可能开发出高活性的抗生素制品。     

拮抗放线菌的筛选培养基与筛选方法研究

从黄土高原人工植被土壤中分离得到若干放线菌,研究了从中筛选的50株拮抗性放线菌在不同培养基上对8种供试靶标菌的拮抗性。结果表明:1在黄豆粉琼脂和玉米粉琼脂培养基上,放线菌生长较好,在PDA和高氏1号琼脂培养基上生长次之。玉米粉和黄豆粉琼脂均可作为拮抗性放线菌的筛选培养基。2反向放置琼脂块是筛选拮抗性放线菌的一种有效且可靠的方法。3筛选拮抗性放线菌时,制备琼脂块的培养时间应控制在8～12d,培养时间过长将会导致拮抗作用减弱。4筛选得到的50株供试放线菌中对辣椒疫霉、黄瓜枯萎菌、棉花枯萎菌、西瓜枯萎菌、青霉、假丝酵母、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有拮抗性的放线菌株数分别为27,26,33,36,35,29,35和20株。     

筛选放线菌活性产物防治烟草黑胫病的初步研究

研究结果表明,通过菌丝培养后并以生长速率法测定抑菌活性,对225份放线菌发酵液提取物进行室内毒力测定,筛选到对烟草黑胫病菌Phytophthora nicotianae菌丝生长抑制率在70.00%~94.60%的有28份,占总发酵液提取物的12.44%;对菌丝生长抑制率70%以上的发酵液提取物进行盆栽烟苗防治效果测定,防治效果在40%以上的有19份;并对防治效果筛选模型方法进行了试验比较。     

携带NRPS基因的新疆嗜盐放线菌抑菌活性筛选

为了筛选具有抗生素产生潜能的放线菌菌株,以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),表皮葡萄球菌(Staphylococcus pidermidis),大肠杆菌(Escherichia coli),白色念珠菌(Candida albican),热带念珠菌(Candida tropicalis)和克柔氏念珠菌(Candida krusei)为靶标菌,采用牛津杯法对48株携带NRPS基因的放线菌发酵液甲醇和乙酸乙酯萃取相进行了抑菌活性筛选。结果表明:共有18株菌表现出抑菌活性,其中抗金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的有15株,抗白色念珠菌的有10株,抗大肠杆菌的有3株;18株菌分属于放线多孢菌属(Actinopolyspora),拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)和链霉菌属(Streptomyces);且18株菌中有16株含有两种以上抗生素合成基因。菌株发酵液抗G+细菌的抑菌活性部位在乙酸乙酯萃取相中,抗白色念珠菌和大肠杆菌的抑菌活性部位在甲醇相中。     

番茄叶霉病拮抗内生放线菌的筛选及其生防效果初报

采用皿内对峙试验从175株植物内生放线菌株中筛选具有生防效果的拮抗菌株,然后通过盆栽试验和田间试验,对筛选出的生防菌的生防效果进行了研究。结果表明,皿内对峙试验共筛选出对番茄叶霉病菌和番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌有拮抗作用的内生放线菌株26株;菌株BAR1-5对番茄叶霉病的防治效果最佳,相对防效达到49.7%,接种番茄叶霉菌前和接种后喷施BAR1-5发酵上清液的相对防效分别达到62.6%和50.6%;BAR1-5菌株发酵液原液和5倍液的相对防效分别达到42.5%和33.1%。试验结果表明,菌株BAR1-5对番茄叶霉病具有较好的防治效果,是1株很有生防潜力的内生放线菌株。     

放线菌活性产物对烟草赤星病抑制作用的初步筛选研究

通过孢子萌发法从278份放线菌发酵液提取物中筛选出对烟草赤星病菌[Alternaria alternate(Fr.)Keissler]孢子萌发抑制率在50.00%~100.00%的有34份,占总发酵液提取物的12.23%;离体叶片悬滴法测定了孢子萌发抑制率70%以上的发酵液提取物对赤星病的防治作用,防治效果在50%以上的有17份;并进一步在温室盆栽植株上对防治效果进行了验证试验。     

西藏低温放线菌的多样性及其生物活性

【目的】研究西藏低温环境下放线菌的组成及其抑菌效果和酶活性,为放线菌新药物先导化合物和高活性酶的筛选提供资源。【方法】从西藏低温地区采集16份土样,用平板稀释法分离放线菌,经形态学和培养特征初步鉴定后得到有代表性的低温放线菌,对这些代表性菌株的16S rRNA基因序列进行系统发育分析,对其进行鉴定;采用菌丝生长速率法测定代表性低温放线菌菌株发酵液对11种农作物真菌的抑菌活性,并对其纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等活性进行测定。【结果】从16份土样中共分离到22株有代表性的低温放线菌,其在10~25℃均能生长。16S rRNA基因序列分析表明,这22株菌分布于放线菌门放线菌纲2个亚目3个科的3个属,即链霉菌亚目(Streptomycineae)链霉菌科(Streptomycetaceae)链霉菌属(Streptomyces)、假诺卡氏亚目(Pseudonocardineae)束丝放线菌科(Actinosynnemataceae)伦茨氏菌属(Lentzea)和假诺卡氏亚目(Pseudonocardineae)假诺卡氏菌科(Pseudonocardiaceae)拟无支酸菌属(Amycolatopsis),其中以链霉菌属最多,占分离菌的91%。在分离的22株代表性低温放线菌菌株中,27.3%的菌株有抑菌活性;40.9%的菌株具有纤维素酶活性,22.7%的菌株具有淀粉酶活性,18.2%的菌株具有蛋白酶活性。【结论】西藏低温生境中蕴藏着丰富的低温放线菌资源,其中一些菌株具有拮抗活性和酶活性。     

生物絮凝高活性菌株筛选及发酵优化

【目的】从种植野生稻的稻田土壤中分离筛选对环境无污染、具有高效生物絮凝活性的菌株.【方法】采用VM培养基从药用野生稻中分离135个菌株,以发酵液对高岭土悬液絮凝效果为指标,筛选到絮凝活性高的菌株YH39.【结果和结论】16S rDNA序列分析表明,该菌株与越南伯克霍尔德菌Burkholderia vietnamiensis有98.6%的相似性.YH39产絮凝剂最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为硝酸钾.发酵动力学研究表明,菌株YH39发酵培养16 h,菌体浓度和絮凝活性达到最高值.对絮凝剂成分分析表明,絮凝剂为多糖,具有很好的耐热性,在60℃下加热30min,絮凝活性不改变.应用研究结果表明,此絮凝剂对3种印染废水均有很好的絮凝效果,不仅可以高效地降低废水的CODCr,还有很好的脱色效果.     

不同植被土壤产淀粉酶放线菌的分离与筛选

为了从土壤中获得产淀粉酶放线菌,对陕西省洛南县7种植被下不同土层土壤中的产淀粉酶放线菌进行了分离纯化,研究了化学抑制剂K2Cr2O7质量浓度和土壤稀释液浓度对放线菌分离效果的影响,并通过菌落形态特征和生理生化指标对产淀粉酶放线菌进行了综合分析。结果表明,当土壤稀释液为10-5～10-4 g/mL、K2Cr2O7质量浓度为50mg/L时,最有利于放线菌的分离;同一植被下表层土壤(5～20cm)中放线菌数量显著多于深层土壤(20～30cm);从7种不同植被下土样中共筛选出10株放线菌菌株,其中有8株是产淀粉酶放线菌菌株,从槐树下土壤中分离出的M4菌株对淀粉的水解能力最强,u0为14.27,并初步被判定为诺卡氏菌属放线菌;8株产淀粉酶放线菌均能利用葡萄糖进行糖酵解,6株能利用乳糖,7株不能利用蔗糖,6株不能利用麦芽糖,仅2株能够产生色氨酸酶,并且所有菌株均具有较强的耐碱性(pH值7.0～7.5),6株具有较强的耐盐性(10%),6株具有柠檬酸盐利用能力。     

高盐环境中抗动物病原菌拮抗放线菌筛选及发酵条件优化

对西北地区高盐环境中拮抗性放线菌进行筛选并对其中的16号优良拮抗菌株进行发酵条件优化。结果表明:①以固体琼脂块法和液体发酵法相结合,发现该地区放线菌对鸡大肠埃希菌和牛大肠埃希菌的拮抗效果明显优于其他动物病原菌。②优选出的16号放线菌在种龄为36 h发酵84 h时,其发酵液抑菌活性为最大。③依据16S rDNA序列构建的供试菌株系统发育树及形态及培养特征,初步确定16号菌株为达氏拟诺卡氏菌白红亚种(Dassonvillei subsp.albirubida)。