猪肺炎支原体净化检测程序研究进展

猪支原体肺炎（猪气喘病）是由猪肺炎支原体引起的一种严重危害全球养猪业生产的传染病之一。很多国家,特别是西欧各国和北美,均通过彻底净化病原的方式来控制该病的爆发。实行净化程序必须对净化后的猪群进行各项检测以确定净化成功与否。然而,每个猪场采用的检测方案都不一样,也没有形成一个统一的阴性群标准。本研究就国外猪肺炎支原体净化后阴性群的检测方法和不同检测方案做一综述,给国内猪场实施气喘病净化后检测方案的制定提供依据。     

猪肺炎支原体主要抗原蛋白的研究进展

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae of Swine,MPS)的病原,给养猪业造成巨大的经济损失。由于对具有良好免疫原性的Mhp特异性蛋白缺少深入研究,使得Mhp在致病机制、血清学检测方法和新型疫苗的研究发展上受到一定限制,从而影响了对MPS的控制。本研究综合Mhp主要粘附因子、膜蛋白及细胞质蛋白等主要抗原蛋白的研究进展,为该病原致病机理研究、建立特异性诊断方法和推动基因工程疫苗发展提供一定的理论基础,对MPS的正确诊断、检测、免疫预防和控制也有重要意义。     

猪支原体肺炎及其检测和防制的研究进展

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种严重危害养猪业的疾病,其流行范围广、治愈难,对养猪业的经济损失巨大,得到了国内外学者的广泛关注。随着对猪支原体肺炎的深入研究,目前已对其有一定了解并有多种检测和防治方法,但这些方面的研究均不完善。本研究对猪肺炎支原体及其致病机理、检测方法和疫苗防治的研究进展进行了综述,并对其未来的发展进行了展望。从而促进对猪支原体肺炎的研究,对猪支原体肺炎的防制和诊断产生积极的作用。     

浅谈猪支原体肺炎的防治

<正>猪支原体肺炎,又称猪地方流行性肺炎,俗称猪气喘病。该病是由猪肺炎支原体引起的猪的一种慢性、接触性传染病。不同品种、日龄、性别的猪都有易感性,一年四季均可发生。患猪和带菌猪是该病的传染源,传播途径主要为呼吸道。该病潜伏期长、病程长,病原体在猪体内存在时间长,患猪在耐过或治愈后半年,甚至更长时间,仍可带菌、排菌。因此,猪场发病后如果净化不彻底,又会造成新进猪只感染,再次发生猪气喘病。     

糖化酶研究进展及其在食品工业中的应用

介绍了糖化酶产生菌株的分布、结构与多型性、作用机制、基因和固定化研究与处理及其在食品生产中的应用现状,并对其未来发展趋势进行了展望。     

山羊草基因组及其在小麦改良中的应用研究进展

山羊草属是小麦近缘植物中与小麦亲缘关系最为密切的属.其中蕴藏着许多抗病、抗虫、抗逆、蛋白含量高等有益基因.在小麦进化中起着重要作用,是小麦改良重要的基因资源.山羊草有益基因向小麦遗传背景的导入,主要利用小麦-山羊草双二倍体为桥梁亲本,通过杂交、回交等方式获得小麦异代换系、异附加系、异易位系;并且利用形态标记、细胞学标记、生化标记及分子标记对小麦遗传背景下的染色体组、染色体、染色体臂及片段进行鉴定.本文对这些方面的研究进展进行了综述,对山羊草可利用基因进行了展望.     

猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术的初步研究

为了建立一个简单易行的猪肺炎支原体气溶胶富集和检测技术,结合液体冲击式采样器和过滤式采样器的原理,自行设计一个气溶胶双重富集装置,并在密闭环境下采集人工制备的猪肺炎支原体气溶胶,荧光定量PCR检测以确定该装置的采集效率。再通过收集不同猪群中的气溶胶进行检测以确定该装置临床应用的可行性。首先,收集人工感染Mhp阴性仔猪后不同时间猪舍内的气溶胶;其次,收集1个猪支原体肺炎发病猪场和1个阳性未发病猪场的产房、保育舍和育肥舍共11个猪舍的气溶胶,荧光定量PCR或套式PCR检测所收集的气溶胶。结果显示：实验室模拟采样的采集效率达到(37.04±6.43)%,人工感染猪肺炎支原体后7天即在饲养房间的气溶胶中检到猪肺炎支原体;2个猪场共11个不同猪舍气溶胶中猪肺炎支原体检测结果均为阳性,检出率100%。成功建立了一个简单易行的猪场猪肺炎支原体气溶胶富集及检测技术。     

3种制备猪肺炎支原体DNA模板方法的探讨

为了筛选出一种快速、高效、廉价提取猪肺炎支原体模板DNA的方法,本研究分别对试剂盒法、双蒸水煮法、酚-氯仿法进行比较,从中选出最佳提取方法。结果显示：这3种方法均适合由菌液中提取基因组DNA;水煮法不能由组织中提取出基因组DNA,试剂盒法可由组织中提取出基因组DNA且得到的目的DNA较纯,但每次提取量少;酚-氯仿法能大批量提取组织基因组DNA,但操作繁琐,易污染且稍有杂带。针对不同的模板,选择合适的DNA制备方法,有利于做出准确检测、提高检测效率,为疾病的早期诊断提供保障。     

微生物修复技术在重金属污染治理中的研究进展

为了研究微生物修复技术在重金属污染治理中的应用,综述了国内外近几年有关微生物修复技术作用机理及方法的研究,同时阐述了不同微生物（细菌、真菌和藻类）对重金属的修复及其应用现状。微生物修复治理重金属污染具有良好的应用前景,但该技术在工业化应用等方面还存在不足,今后还需要进一步研究。     

小麦条锈病抗性基因研究进展及在育种中的应用

概述了已知小麦条锈病抗性基因的来源、染色体定位和分子标记研究现状,回顾了抗性品种与生理小种的演变,评价了小麦抗条锈基因,并浅谈了小麦抗条锈基因的分子标记在育种中的应用     

高渗溶液条件下猪肺炎支原体形态和活性变化的研究

为研究高渗溶液对猪肺炎支原体(Mhp)形态、大小,以及活力的影响。Mhp经终浓度为1.8% NaCl的高渗溶液分别作用1、2、4、6、8 min后,分别进行染色镜检、粒径分析仪测定粒径、CCU测定和PCR鉴定。结果表明：在高渗溶液作用不同时间后,从2 min开始,Mhp皱缩变圆,且直径变小,菌体数量也快速变少至消失;测定的终CCU降低了一个梯度,且时间延长了1天;在作用不同时间后的样品中,PCR均能扩增出Mhp目的条带。经终浓度为1.8% NaCl作用1~6 min,Mhp的形态大小发生了变化,且具有活性,这将为Mhp经肌肉注射进入血液循环研究和猪支原体肺炎活疫苗的新免疫途径研究提供参考数据。     

绵羊肺炎支原体的分离与鉴定

对疑似为患有绵羊肺炎支原体的刚死病羊无菌采取病料,经直接培养与间接培养后分离到可疑绵羊肺炎支原体。然后对培养生长的支原体分别进行形态学观察、各种生化试验、血清学试验以及药物敏感性试验,最后确诊为绵羊支原体肺炎,并分离得到绵羊肺炎支原体。     

牛支原体FJ-HJ分离株的分离及鉴定

从福建省患呼吸道疾病牛肺组织中分离到1株支原体,采用形态学观察、生化试验、特异性PCR检测和16S r RNA序列分析等进行鉴定,旨在明确该病病原。结果显示分离株菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起,命名为FJ-HJ分离株。分离株不能水解精氨酸,不能发酵葡萄糖,不分解尿素,血细胞吸附试验和溶血试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性;PCR反应扩增出牛支原体特异大小为1911 bp的目的片段;分离株16S r RNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列相似性为99.7%。研究结果表明:本次分离到的支原体为牛支原体,证实福建省存在牛支原体病的流行,为福建省牛支原体病的防治提供了科学依据。     

猪Toll样受体基因的变异及其与支原体肺炎感染的关系

Toll样受体(TLRs)作为重要的模式识别受体,在动物的天然免疫中发挥重要作用,是机体抵抗感染的第一道屏障;TLRs基因变异会改变机体对病原的抗性或易感性,本试验旨在探讨TLR2、TLR4基因突变与支原体肺炎感染的关系。试验以国外引进猪品种(长白、大白、皮特兰)、中国地方猪品种(梅山、二花脸、姜曲海、金华)以及江苏省培育猪品种(苏钟猪)为材料,通过PCR-SSCP技术检测实验猪群TLR2、TLR4基因SNPs分布,结合动物攻毒实验及文献报道,对其中部分SNP不同基因型猪的肺部巨噬细胞做LPS感染实验,借助RT-PCR跟踪不同时间点猪TLR2、TLR4基因以及促炎性因子TNF-α、IL-1β的表达变化,揭示猪Toll样受体基因的变异与支原体肺炎感染的关系。结果表明,本实验猪群TLR4基因存在4个SNP位点:T611A、G960A、G962A、C1027A,其中G960A为同义突变,其余为有义突变;位点C1027A在中、外猪品种间呈现明显的碱基分布差异。LPS诱导下的猪肺部巨噬细胞TLR2、TLR4基因及促炎性因子TNF-α、IL-1β均表现不同程度的表达上调;其中,位点C1027A的CC型猪TLR2、TLR4基因表达水平及增速均显著高于AC型猪(P<0.01),TNF-α、IL-1β的表达水平则显著低于AC型猪(P<0.01),提示C等位基因极可能是猪抗支原体肺炎感染的优势基因。     

数学方法在饲料配方设计中的应用

在饲料配方中,数学方法占有非常重要的地位。综述了饲料配方设计中应用的几种数学方法:试差法、线形规划、目标规划、模糊规划、灰线形规划和随机规划等方法,从而为建立科学、合理的饲料配方优化系统奠定良好的基础。     

猪肺炎支原体地方毒株P97-R1基因序列分析及原核表达

为克隆和表达猪肺炎支原体(Myeoplasma hyopneumoniae) 地方毒株Z株P97-R1基因,探索不同菌株P97-R1基因的差异及其蛋白作为诊断抗原的可能性,本研究根据GenBank登陆的猪肺炎支原体(Mhp)232株P97基因,使用Primer Permier 5.0和DNAman设计引物,以猪肺炎支原体地方毒株Z株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出了P97-R1基因片段,并将该基因片段连接到T-easy和pET-32a载体上分别进行测序和原核表达。测序结果与参考株232株序列对比分析发现Z株P97-R1区发生了多处碱基突变;经DNAstar软件分析表明Z株包含11个5aa重复序列,232株P97-R1区包含15个5aa重复序列,推测Rl重复序列的差异与菌株毒力强弱有关。Z株P97-R1基因原核表达产物经SDS-PAGE分析,得到了分子量约为30 KD的蛋白,经Western-blot鉴定表明该表达蛋白具有免疫原性。这为Mhp的诊断、预防及进一步深入研究奠定了基础。     

Application of Meshless Method in Dynamic Mechanics

As a new type of meshless method which has appeared in recent years, the Reproducing Kernel Particle Method has such meshless features as the need for nodes only without classified units, and is advantageous in the process of calculation. The present study introduces the Reproducing Kernel Particle Method and applies it to the research of nonlinear dynamic mechanics. The dynamic process involves different kinds of nonlinearity. The study assumes that deformation of dynamic analysis belongs to small one and that the material nonlinearity has been taken into account. When under small strain, the increment constitutive law and the total Lagrangian model of calculation are adopted to deduce the dynamic control equation by the Reproducing Kernel Particle Method. The instances of calculation demonstrate that this method is effective in the analysis of dynamic problems.     

丝状支原体山羊亚种FJ-GT株的分离和鉴定

为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S rRNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起;分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,血细胞吸附试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性,溶血试验为β溶血;PCR结果扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoidessubsp. capri, Mmc)特异大小为394 bp 的目的片段;菌株16S rRNA 序列与丝状支原体山羊亚种标准株PG3 的序列比较,同源性为99.5%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为丝状支原体山羊亚种。本研究首次从病原学角度证明了福建省存在由丝状支原体山羊亚种引起的羊支原体性肺炎,对福建省羊支原体性肺炎的诊断和有效防控具有重要的指导意义。