大鳞鲃人工繁育试验报告

从乌兹别克斯坦引进体质量20~40g的野生大鳞鲃(Barbus capito)鱼种,经5年人工培育性腺已发育成熟,2008年5月筛选8尾亲鱼进行人工繁殖试验。结果表明:注射催产药物LHRH-A2、HCG和DOM可促使亲鱼产卵和排精,催产的4尾雌鱼中有3尾成功产卵,获得受精卵4.8万粒,孵出鱼苗3万尾,其催产率、受精率、孵化率分别为75%,72.3%,67.1%。水温20~23℃时,从受精卵到孵出鱼苗需要约70h,到仔鱼上浮开口需要约6d。在哈尔滨地区池塘人工培育大鳞鲃鱼苗,1龄鱼体质量可达(40.06±1.19)g,体长(14.34±0.15)cm。     

大鳞鲃鱼同工酶的研究

本实验采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,分析了大鳞鲃鱼的肝、肾、眼3种组织中的醋酶（EST）、淀粉酶（AMY）、乳脱酸氢酶（LDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）4种同工酶。结果表明各种同工酶具有明显的组织特异性,肝脏酶活性最高,具有所有酶带。     

大鳞鲃鱼同工酶的研究

本实验采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,分析了大鳞鲃鱼的肝、肾、眼3种组织中的醋酶（EST）、淀粉酶（AMY）、乳脱酸氢酶（LDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）4种同工酶。结果表明各种同工酶具有明显的组织特异性,肝脏酶活性最高,具有所有酶带。     

大鳞鲃亲鱼培育及人工繁殖技术

邯郸市曲周东湖水产良种养殖场从黑龙江引进大鳞鲃(Barbus capito)后备亲鱼768尾,尾重1.8kg。经过3年的人工培育,亲鱼性腺已发育成熟,2015年筛选12条亲鱼进行人工繁殖试验,催产雌鱼5条,尾重3.9~4.1kg,雄鱼7条,尾重2.41kg。人工催产获得受精卵112万粒,受精率达67%,表明大鳞鲃亲鱼的培育已在当地获得成功。     

刺鲃幼鱼消化系统形态学和组织学研究

采用活体解剖、测量、组织学、组织化学等方法,对采自江西宜春锦河的51尾刺鲃(Spinibarbus caldwelli)幼鱼消化系统组织和形态学进行了研究。结果表明:(1)刺鲃消化腺包括胆囊、肝脏和胰脏,消化道包括口咽腔、食道、肠和肛门,无胃;(2)口亚下位,口咽腔占头长比例很大,均值为0.92;口裂长/吻长均值为0.86。口咽腔上皮为复层鳞状上皮,含有大量的黏液分泌细胞和味蕾结构;(3)食道粗短,前段有味蕾,内壁有较深的纵向褶皱;肌层发达,内外肌层间分布有发达的有髓鞘神经纤维丛;黏膜下层有发达的黏膜肌,黏膜层内有大量的杯状细胞、黏液分泌细胞,还有柱状上皮区域,游离面具有纹状缘;(4)肠盘曲7次,分为前肠、中肠和后肠,前肠和中后肠黏膜皱褶数量、黏膜皱褶高度、柱状上皮细胞高度显著减少(P0.05);肠道各段肌层厚度有极显著差异(P0.01);杯状细胞的数量从前肠往后肠呈高-低-高趋势,后肠数量最多,前后肠与中肠有显著差异(P0.05);肠道系数为(2.07±0.03);(5)食道及肠道各段粘膜上皮中下层发现数量较多嗜伊红颗粒细胞;(6)肝不分页,为长条形,胆囊被肝包围,比肝胰脏重(1.37±0.06)%。胰脏散布于肝脏、胆囊及消化管系膜周围,少量组织分布于肝门静脉周围形成肝胰脏;数个大小不一的独立Brockmann小体散布在食管及前肠连接部周围;(7)肠长(Y)与全长(L)的关系呈线性相关:Y=2.1048L-0.474(R2=0.669,F1,49=99.05,P0.01),锦河刺鲃幼鱼肠道特征为杂食性偏植食性。     

两种方法分析大鳞鲃染色体核型的比较研究

染色体核型分析是细胞遗传学研究的主要内容。为了获得准确、便捷的染色体核型分析方法,以引进耐盐碱品种大鳞鲃为实验材料,取头肾细胞冷滴片法制备染色体标本,采用E-ruler测量软件和Photoshop图像软件结合完成了染色体核型分析,并与常规方法的测量结果、核型分析进行了比较。结果显示,E-ruler软件与常规方法对伸展平直染色体的测量无显著差异,前者对弯曲形态染色体的测量结果更为准确;Photoshop图像软件能剔除染色体中期分裂相照片的背景,准确判断着丝粒的位置,快速、便捷地完成染色体核型图拼贴。研究表明,利用E-ruler软件和Photoshop软件相结合可获得准确、清晰的核型分析结果,本方法适用于其他鱼类和生物的染色体核型分析。染色体分析结果显示,大鳞鲃的染色体组为二倍体,未发现与性别有关的异型染色体,核型公式为2n=100=12m+38sm+38st+12t,NF=150。同鲃科其他鱼类的核型相比,大鳞鲃与国内几种倒刺鲃核型类似,具有鲃亚科进化核型特征。     

大鳞鲃的人工繁殖、胚胎发育和耐盐碱测定

2008-2010年进行大鳞鲃的人工繁殖和胚胎发育观察,并测定了胚胎、仔鱼的耐盐碱能力。结果表明,大鳞鲃是产漂流性卵的鱼类,繁殖性周期为1年产卵1次类型。水温19～23℃时,催产药物的效应时间在21～26 h,1.4～2.3 kg的雌性亲鱼产卵量在8×105～1.4×106粒,人工繁殖的催产率、受精率和孵化率平均为63.9%、81.5%、86.6%。大鳞鲃的卵为灰白色,直径约1.5 mm,遇水后卵膜会迅速吸水膨胀,1 h后达到最大为4.5 mm。水温20～23℃时,从卵授精到仔鱼孵出需要的积温为49.82℃.d,到仔鱼平游摄食需要积温125.14℃.d,刚出膜的仔鱼全长(6.07±0.18)mm,当达到(8.30±0.47)mm开始平游摄食。在耐盐碱实验中,测得大鳞鲃的胚胎72 h在盐度3.2以下、碱度14.32 mmol/L以下的水体中对成活率无影响;仔鱼96 h在盐度5.1以下、碱度14.32 mmol/L以下的水体对成活率无影响。     

大鳞鲃幼鱼对脂肪的适宜需要量研究

为了解大鳞鲃(Barbus capito)幼鱼脂肪的需求量。试验分为5组,分别饲喂脂肪水平为3.92%(L1)、6.25%(L2)、8.36%(L 3)、10.75%(L4)、和12.91%(L5)的等氮等能饲料,养殖56 d后采样。结果显示:当饲料中脂肪水平从3.92%到8.36%逐渐增多时,鱼体增重率(WG)和特定生长(SGR)显著升高,饵料系数(FCR)明显降低;当饲料中脂肪含量继续增加时,鱼体WG和SGR呈下降趋势,FCR数则相反,且当饲料中脂肪水平为12.91%时,鱼体WG和FCR与饲料脂肪水平为8.36%时差异显著。大鳞鲃形体指标受饲料脂肪水平显著影响,其中,脏体比(VSI)随着饲料脂肪含量的升高而上升,而肝体比(HSI)却呈降低趋势,且当饲料中脂肪水平分别为10.75%和12.91%时,大鳞鲃幼鱼HSI显著低于对照组。饲料脂肪水平对全鱼、胴体和内脏的水分、粗蛋白和粗灰分显著影响较小,但仍能看出当饲料脂肪水平为6.25%时,全鱼的粗蛋白显著低于其他四组;全鱼、胴体和内脏的粗脂肪含量随饲料中脂肪水平的增加而上升,而肝脏中粗脂肪含量的变化趋势则相反,呈下降趋势。此外,以饲料中脂肪含量为自变量,分别以WG和FCR为因变量进行二次回归方程分析可得,大鳞鲃幼鱼WG最大时对脂肪的最适需求量为7.99%,而大鳞鲃幼鱼FCR最小时对脂肪的最适需求量为8.76%。综上可知,大鳞鲃幼鱼对饲料中脂肪的适宜需求量为7.99%~8.76%。     

盐度胁迫对大鳞鲃抗氧化酶和血清皮质醇的影响

为阐明盐度胁迫对大鳞鲃(Luciobarbus capito)肝、肾和鳃组织抗氧化系统及血清皮质醇的影响,本研究设置4个NaCl盐度组(3、6、9和12 g/L)和1个淡水对照组,检测分析了不同盐度胁迫下曝露3、6、12、24、48、96 h和7 d大鳞鲃肝、肾和鳃组织中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量的变化,以及血清中皮质醇浓度的变化。结果显示,在相同盐度胁迫下,大鳞鲃的肝、肾和鳃组织中ACP、AKP、GSH-Px抗氧化酶的活力、MDA含量以及血清皮质醇含量随胁迫时间的延长均呈先上升后下降、随后趋于稳定的变化趋势,在胁迫开始24 h内各指标达到峰值,并在48 h开始逐渐趋于平稳;胁迫初期,相同曝露时间,大鳞鲃的肝、肾和鳃组织中3种抗氧化酶活力、MDA含量及血清皮质醇含量均与盐度呈显著正相关性。大鳞鲃在盐度胁迫过程中,ACP、AKP活力和MDA含量在肾组织的范围分别为1.42~2.15 U/g prot、1.01~1.87金氏单位/g prot和13.05~57.27 nmol/mg prot;肝组织中分别为1.27~1.96 U/g prot、0.31~0.86金氏单位/g prot和17.02~55.98 nmol/mg prot;鳃组织则为0.98~1.96 U/g prot、0.13~0.84金氏单位/g prot和8.33~53.93 nmol/mg prot,肾组织中ACP、AKP活力和MDA含量均高于肝、鳃组织;而GSH-Px的活力在肝、肾和鳃组织的范围分别为44.41~114.77、16.52~67.59和9.07~48.00活力单位,肝组织中GSH-Px活力显著高于肾和鳃组织。此外,血清皮质醇在盐度胁迫过程中的含量变化范围为197.00~355.50 ng/L。综上所述,在12 g/L的高盐胁迫下大鳞鲃通过自身调节,各项指标仍可恢复正常,表明其对盐度环境有较强的适应能力。     

水温和养殖密度对大鳞鲃幼鱼的生长影响

分别进行水温和密度对大鳞鲃(Barbus capito)幼鱼的生长影响实验,旨在探索大鳞鲃适宜的放养密度和生长温度。水温实验设计为6个梯度值15℃、18℃、21℃、24℃、27℃、30℃,幼鱼初始体重为9~12 g,投喂75 d后,结果得出:在水温15~27℃时,随着温度的升高,终末体重会逐渐增加,27℃时最大值为(44.47±9.54)g,水温达到30℃时,终末体重开始下降。24℃、27℃和30℃组体重增长无显著差异,但温度达到30℃时,体重变异系数最大,为(29.82±11.36)%。密度实验设计为4个梯度值20 ind/m3、15 ind/m3、10 ind/m3、5 ind/m3,幼鱼初始体重为0.6~0.7 g,投喂60 d后,结果得出:随着放养密度的下降,体重增长的速度越快。体重、特定增长率、日增重变化在密度为5 ind/m3时最高,密度10 ind/m3与15 ind/m3没有显著差异,达到20 ind/m3时会显著下降。综合考虑,大鳞鲃适宜的养殖温度在24~27℃,静水池塘的放养密度建议在15 ind/m3左右。     

北方寒地池养大鳞鲃生长和越冬成活

池塘人工养殖条件下测定了大鳞鲃(Barbus capito)的生长和越冬存活率,结果得出,水温20～23℃时大鳞鲃仔鱼的全长与生长时间相关方程为L全长=0.577 9t天数+5.422 1(R2=0.994 2,n=30);池塘水温13～28℃时,1龄鱼体长与生长时间的相关方程为L=18.234e0.132 6t(R2=0.978 5,n=30),体重与体长的关系式为W=0.017 3 L2.953 6(R2=0.9976,n=30)。夏季(5～10月)在室外池塘饲养,冬季(11～4月)自然越冬条件下,大鳞鲃1龄鱼体重为(40.06±6.53)g,2龄鱼体重为(241.35±45.31)g;夏季饲养条件不变,冬季在室内水泥池中(水温15～23℃)饲养条件下,12月龄体重为(90.02±32.17)g,24月龄为(807.27±150.46)g,30月龄为(1 380.08±176.26)g。大鳞鲃采取在越冬池中饲养,冬季直接在原塘自然越冬,存活率可达90%以上。     

细鳞鲑早期发育过程中的消化系统发生

应用连续切片技术和显微观察法, 对胚胎至幼鱼期的细鳞鲑(Brachymystax lenok)消化系统(口咽腔、胃、幽门盲囊以及肠道等组织)早期发生进行了系统研究。研究表明, 在实验水温为12.0～16.2℃时, 细鳞鲑胚胎期消化系统原基发生与分化的过程为, 在卵受精后125～165 h, 胚胎进入原肠期发育, 随着原肠作用的进行, 脊索开始分化; 卵受精后201 h, 消化系统原基细胞团在脊索下方出现, 为单层的扁平细胞; 卵受精后480 h, 消化系统原基位于脊索和卵黄囊之间, 呈直管状; 卵受精后552 h, 管状消化系统内层细胞大量增殖, 外层由两层细胞构成。细鳞鲑胚后消化系统的发育过程为, 初孵仔鱼即具有富含油球的大卵黄囊, 消化系统呈简单的盲管状, 肛门尚未与外界连通; 2～7 DAH, 仔鱼消化系统分化加快; 7 DAH后, 仔鱼已初步分化出口咽腔、食道、胃、肠以及肝; 10 DAH, 仔鱼消化器官已基本分化完毕, 肛门已向外界连通; 14 DAH, 仔鱼从内源性营养向外源性营养的过渡基本完成, 卵黄囊和油球吸收完毕; 19 DAH, 稚鱼胃固有膜内出现胃腺; 49 DAH, 幼鱼幽门盲囊分化完毕, 肝和胰脏功能完善; 64 DAH, 幼鱼口咽腔和胃的组织结构与成鱼基本相同, 前后肠组织结构相似; 105 DAH, 幼鱼幽门盲囊指状分支已具有28～36个。细鳞鲑仔鱼的最佳人工开口驯化时间应该在10～14 DAH, 可通过不断投喂适口饲料的方式来强化仔鱼的主动摄食行为。本研究旨在为深入了解细鳞鲑仔鱼的消化生理、摄食转变及开口驯化时机提供基础资料。

     

大鳞鲃形态特征及其同工酶电泳分析

为了解大鳞鲃(Barbus capito)的形态特征和生化遗传特性,为其种质鉴定提供理论依据,本研究采用传统形态观察和测定可数可量性状的方法对30尾样品鱼进行形态特征分析,并通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对大鳞鲃5种组织(心脏、眼睛晶状体、肝脏、肾脏和脾脏)的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和酯酶(EST)进行分析。结果表明：大鳞鲃的主要形态特征为体呈梭形,头部较小,体修长,口亚下位,具有吻须和颌须各一对。身体被覆发光的鳞片,鱼体背部呈银灰色,腹部银白色。鳍式为背鳍D.Ⅲ-7～8、胸鳍P.Ⅰ-16～18、腹鳍V.Ⅱ-8、臀鳍A.Ⅲ-5和尾鳍C. 22-28;侧线鳞数64-74、侧线上鳞数12～14、侧线下鳞数10～11;下咽齿齿式为2·3·5/5·3·2;脊椎骨数为46～49。大鳞鲃的LDH、MDH和EST同工酶具有组织特异性,这种特异性与组织行使其生理功能有关,肝脏组织3种同工酶表达活性最强,肾脏组织3种同工酶的表达活性较强,可能与肾脏具有调节渗透压功能有关。[中国渔业质量与标准,2022,12(4):27-35]     

微卫星标记分析大鳞鲃养殖群体的遗传结构及生长性状

大鳞鲃作为水产引进种,受建群数量较小的影响其遗传资源相对有限,因此在育种实践中有效地保护和利用现有的基因资源显得尤为重要。实验用24个微卫星标记分析了大鳞鲃养殖群体的遗传结构,在随机采样的96个个体中共检测到74个等位基因,各标记等位基因数为2～5个,片段大小为109～367 bp,有效等位基因数(Ne)为1.144 5～4.626 4,观测杂合度(Ho)为0.135 4～1.000 0,期望杂合度(He)为0.126 9～0.788 1,标记的多态信息含量(PIC)为0.118 3～0.749 0,平均为0.428 1。统计结果显示,大鳞鲃养殖群体处于中度多态水平;经χ2检验估计Hardy-Weinberg平衡,结果表明,大鳞鲃养殖群体处于平衡状态,但有8个微卫星标记显著偏离了平衡。利用SPSS 19.0的GLM模型分析24个微卫星标记与体质量、体长、体高和体厚的相关性,结果表明,B1、B20、B45、B51、B59、BC38与4项生长性状均具有显著相关性,B26与体质量、体高和体厚具有显著相关性,BC3与体质量和体长具有显著相关性,进而使用Duncan氏多重比较找到了每个微卫星标记具有生长性状优势的基因型。     

碱度驯化对大鳞鲃幼鱼血液生理生化及肝脏抗氧化系统的影响

为了从血液生理生化、肝脏抗氧化应激等方面研究大鳞鲃(Luciobarbus capito)对碱度驯化的生理适应性变化,选择体重为(13.66±1.26) g的大鳞鲃幼鱼开展NaHCO3碱度适应性驯化实验,空白组一直处于淡水中养殖,驯化组经20 mmol/L的碱度适应性驯养7 d后再放入40 mmol/L的碱度水体中,未驯化组直接放入40 mmol/L的碱度水体中,测定并比较了鱼体放入40 mmol/L碱度水体中第0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、96 h、7 d幼鱼血液生理生化指标和肝组织抗氧化系统相关指标变化。结果显示,驯化组和未驯化组鱼体的血液渗透压、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、血红蛋白、红细胞、血小板、尿素、白蛋白含量和血小板压积等生理生化指标以及肝组织抗氧化系统中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)在0 h~7 d的碱度胁迫过程中,均表现为先升高后降低的变化趋势(P<0.05),且驯化组峰值大小均显著性低于未驯化组(P<0.05),空白组在此期间均未表现出显著性变化(P>0.05)。驯化组鱼的血常规指标参数和肝脏组织的SOD、CAT出现峰值的时间均晚于未驯化组。驯化组鱼体在高碱度胁迫第7天时,其血液中的尿素浓度、淋巴细胞、单核细胞、血红蛋白、红细胞、血小板、白蛋白含量、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)以及肝组织中的SOD、CAT、GSH-Px、MDA参数均显著性低于未驯化组(P<0.05)。研究表明,大鳞鲃幼鱼经过一定程度的碱度驯化后,在遭受更高碱度的水环境胁迫时,从生理层面反映出机体具有更强的适应性。     

大鳞副泥鳅肾脏的胚后发育组织学观察

为了解大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)肾脏发育的一般规律,利用组织学的方法,对0~50日龄大鳞副泥鳅肾脏的胚后发育进行显微观察和研究。结果显示:大鳞副泥鳅初孵仔鱼体内有一条贯穿身体的原始肾管。2日龄仔鱼前肾小管管壁细胞排列疏松;5日龄前肾小管上皮为单层立方上皮,细胞间界限不清;7日龄前肾小管之间出现散在的未分化的造血干细胞;12日龄前肾小管继续分化,可见分化雏形的肾小体,中肾近曲小管开始分化形成;15日龄后,出现肾单位,肾小球形成由间充质细胞构成网状结构,肾脏腹侧可见大血管;20日龄中肾结构致密,腹侧血管(静脉)充满血液,远曲小管分化形成;30日龄中肾小管管壁多为单层柱状上皮细胞组成,排列十分紧密;50日龄后,中肾肾小体散在分布,远曲小管、近曲小管以及集合管等肾小管结构趋于完善。     

养殖大鳞鲃发病死亡F_3个体的微卫星标记分析

采用24个已报道的多态微卫星标记对天津市天祥水产有限责任公司养殖的大鳞鲃Barbus capito F_2亲本及F_3成活和病发死亡个体进行基因分型,结果有8个标记无多态,13个标记用以分析本研究群体的遗传多样性、亲缘关系及遗传结构。遗传参数分析显示,13个标记在87个大鳞鲃个体中分别检测到2~7个等位基因,平均等位基因数(4.27~4.53)极显著高于平均有效等位基因数(3.09~3.22)(P0.01);观察杂合度(0.58~0.64)整体低于期望杂合度(0.64~0.65),多态位点比例明显下降(8/24),表明大鳞鲃F2及F_3个体的纯合度增加,遗传多样性下降。聚类分析显示,F2亲本与成活子代亲缘关系更近,聚在一起;而死亡子代单独聚为1支。遗传结构分析显示,亲本与子代清晰地划分成两大类群,多数亲本与多数成活个体归为第一类群(划分概率为51.8%~97.7%),少数亲本与多数死亡个体归为第二类群(划分概率为52.9%~98.4%),这与亲缘关系分析的结果一致,表明少数亲本是F_3死亡个体遗传组成的直接贡献者。本研究初步认定,由于几个亲本的近亲交配,子代基因组纯合度增加,遗传多样性下降,抗逆性下降,这可能是F_3出现不明缘由病发死亡的主要原因之一。     

大鳞副泥鳅卵巢发育的组织学研究

采用组织切片方法,对大鳞剐泥鳅的卵巢发育进行了组织学研究,系统地描述了卵巢的形态结构、组织学特征.2个卵巢序有成对,位于体腔中线两侧和消化管的背面,以肠系膜与体壁相连.大鳞副泥鳅卵巢的发育分为Ⅵ个时期,第Ⅱ期卵巢出现产卵板,卵母细胞明显增多,原牛质增长,胞质嗜碱性增强,早期排列紧密,后期排列疏松;第1II期卵巢体积显著增大,扁圆,浅黄色,卵黄颗粒出现在皮质M,单层滤泡层形成,放射带…现;第IV期卵巢体积更加增大,圆筒形,深黄色,能见许多血管分枝;第V期卵巢一般只在繁殖季节达到性成熟的可自然排卵产出体外的雌鳅体内出现;第VI期卵巢呈现排空的滤泡.卵母细胞的发育分为5个时相,在第2时相晚期列第3时相早期,卵母细胞中具有卵黄核.     

细鳞鲴卵巢发育的组织学观察

采用组织学方法对细鳞鲴卵巢周年变化和卵母细胞发育进行了观察研究。结果表明,细鳞鲴卵巢发育分为6个时期,卵母细胞发育分5个时相,从第Ⅲ时相卵母细胞开始表现出种的特异性。3月卵巢处于产前发育阶段,4-7月为繁殖期,5-6月为繁殖盛期,8月卵巢基本修整完毕,9-10月为Ⅱ′期发育,11月至翌年2月以Ⅲ期卵巢越冬。细鳞鲴的产卵方式为短期分批同步产卵类型,在一个生殖周期内一般产卵2~3次。     

大鳍异鮡消化系统形态学和组织学观察

通过形态解剖和显微技术对大鳍异（Creteuchiloglanis macropterus）消化系统的形态学和组织学进行了观察研究。结果显示,大鳍异消化系统具有以下特征：口下位,口咽腔大,颌齿发达,鳃耙稀疏;食道粗短,肌层发达,黏膜层具有大量杯状细胞; U 型胃,包括贲门部、盲囊部和幽门部,具胃腺;肠道系数为0．93±0．11,肠长与体长呈显著线性关系,肠分为前肠、中肠和后肠,肠腔内有密集的肠绒毛;肝脏与胰脏分离,肝脏分为两叶,具有“腹腔外肝”,胰脏弥散分布于前肠和中肠周围。