4种有机溶剂对Vero细胞活力和弓形虫增殖的影响

本研究旨在筛选低细胞毒性和低弓形虫毒性的有机溶剂。Vero细胞在96孔板培养12 h后，将培养基更换为200μL分别含0、0.1%、0.3%、0.5%、1%、3%、5%、10%（V/V）的二甲基亚砜（DMSO）、二甲基甲酰胺、乙醇和甲醇的完全培养基，同时设立空白对照孔，继续培养12和24 h后，采用噻唑蓝（MTT）法评价4种有机溶剂对Vero细胞增殖活力的影响，筛选出对宿主细胞毒性最小的有机溶剂并确定其安全浓度；弓形虫接种Vero细胞12 h后，弃上清后分别加入含有0、0.1%、0.3%、0.5%、1%、3%（V/V）的DMSO、二甲基甲酰胺、乙醇和甲醇的完全培养基120μL，接种36 h后判定各组溶剂对弓形虫增殖的影响，计数感染细胞数并计算相对感染率，筛选出对弓形虫增殖影响最小的有机溶剂及其安全浓度。结果显示，对于Vero细胞，DMSO、二甲基甲酰胺、甲醇和乙醇分别在其体积分数低于1%、0.1%、3%和1%时无明显毒性；对于弓形虫，DMSO、二甲基甲酰胺、甲醇和乙醇对弓形虫增殖的安全添加浓度分别为1%、0.1%、1%和0.1%。本研究表明，DMSO、甲醇对Vero细胞、弓形虫的毒性较小，可作为水溶性较差药物进行抗弓形虫筛选时优先选择的有机溶剂。     

有机溶剂和EDTA对兔肝脏碱性磷酸酶活力的影响

碱性磷酸酶（ALP）是一种膜结合蛋白,参与体内的钙磷代谢,维持适宜的钙磷比例（陈清西等,1998）,并在免疫反应中发挥重要作用。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性，坏死，空泡化，合肥体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体，８天可见核内包涵体，核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比，ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性、坏死，空泡化、合胞体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体，８天可见核内包涵体，核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比，ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖后的毒力较高，除不同毒株间可能存在差异外，培养温度的高低亦是原因之一。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的最佳增殖条件是在３３℃培养８～１２天。     

Vero细胞中禽呼肠孤病毒的增殖特性研究

为了研究绿猴肾(Vero)细胞中禽呼肠孤病毒(ARV)的增殖特性,试验采用了光学显微镜观察、半数组织感染量(TCID50)测定、RT-PCR检测等方法对细胞培养物进行了研究。结果表明:ARV S1133毒株在Vero细胞中能有效增殖,并出现细胞破碎、萎缩、抱团、脱落、边缘模糊、胞体变大,甚至死亡等典型的细胞病变(CPE);RT-PCR检测成功扩增出一条大小为1 248 bp的条带;ARV在感染Vero细胞后会经历三个时期,即潜伏期、快速增长期、稳定期,并在稳定期病毒效价达到峰值,TCID50为1×10~(-8.46)/0.1 m L。     

减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达弓形虫SAG1基因

将PCR扩增获得的弓形虫SAGI基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建成pcDNA3-SAG1真核表达质粒,高压电转化入dam和PAOP基因双突变的减毒沙门氏菌(ZJ111株)中,并直接转染Vcro细胞,胰酶消化、收集细胞,SDS-PAGE和western blot可检测到30 ku左右的蛋白条带和印迹带.结果表明减毒沙门氏菌能将外源基因呈递给Vero细胞并进行表达.     

Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响

本研究旨在探讨Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响。收集屠宰场废弃卵巢,抽取卵母细胞。采用电激活联合化学激活的方法得到孤雌胚胎,同时用所得的卵母细胞与卵丘细胞构建猪体细胞核移植重构胚;并将所得的孤雌胚、核移植重构胚移入NCSU-23(培养液)中与Vero细胞共培养。结果,Vero细胞共培养组的囊胚率显著高于对照组(P0.05),各组囊胚细胞数无显著差异(P0.05)。结果表明,Vero细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于猪胚胎的早期发育。     

硒对体外培养小鼠成骨细胞形态、增殖和活力的影响

本文旨在探讨不同浓度亚硒酸钠溶液对体外培养的小鼠成骨细胞的形态、增殖及活力的影响。以出生24h的昆明小鼠颅骨为材料,通过酶消化法来分离成骨细胞,并分别接种于不同浓度的亚硒酸钠培养液(0.00、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.75、1.0 mg/L)中,倒置显微镜下观察成骨细胞的形态变化,采用MTT法测定细胞增殖率,结晶紫染色法测定细胞活力。48 h内,浓度高于0.4 mg/L时亚硒酸钠抑制细胞增殖且降低细胞活力,而低于0.2mg/L时亚硒酸钠可促进细胞增殖,增强了细胞活力。结果显示硒对成骨细胞的增殖和活力呈双向调节,硒作用呈浓度剂量依赖性。     

犬瘟热病毒MD-77株在Vero细胞上增殖规律的观察

犬瘟热病毒ＭＤ┐７７株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖规律的观察遇秀玲田克恭吴娜李俊梅隋丽华任晓明（军事医学科学院实验动物中心,北京丰台１０００７１）犬瘟热病毒（ＣａｎｉｎｅＤｉｓｔｅｍｐｅｒＶｉｒｕｓ,ＣＤＶ）是对我国养犬业危害较大的病毒之一。近年来,我们从临...     

猪繁殖与呼吸综合征毒株在Vero细胞上的增殖验证试验

为验证猪繁殖与呼吸综合征病毒在Vero细胞上的增殖,进一步规范非禽源外源病毒检验操作,将目前国内用于疫苗生产的5个猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株分别在Vero细胞上继代．观察细胞病变并进行荧光抗体染色。结果显示,国内5个猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株均能在Vero细胞上增殖,且能引起细胞出现圆缩、聚集和脱落等典型的PRRSV细胞病变,在细胞胞浆内也可观察到特异性绿色荧光。结果提示在进行猪繁殖与呼吸综合征活疫苗外源病毒检验时,样品须进行特异性血清中和处理．以赍,干扰外源病毒枪蛤结集垧判常     

4种因素对NK细胞杀伤活性的影响

为了探讨效应细胞与靶细胞的比例(效靶比)、孵育时间、显色时间以及小牛血清浓度对NK细胞杀伤活性的影响,采用乳酸脱氢酶释放法来测定不同因素对NK细胞杀伤活性的影响,结果表明,最佳效靶比和孵育时间分别为50∶1和2 h。在最优效靶比及孵育时间的基础上,显色0.5 h,小牛血清浓度为50 mL/L时NK细胞活性最高,证明4种因素对NK细胞杀伤活性均有不同程序的影响。     

猪流行性腹泻病毒在微载体培养Vero细胞上的增殖试验

为了探索猪流行性腹泻病毒(PEDV)在微载体培养Vero细胞上的增殖效果,采用2 L生物反应器进行微载体培养Vero细胞和PEDV繁殖,并摸索细胞生长和病毒繁殖的最佳条件,检测病毒滴度,与方瓶培养的病毒滴度进行比较。结果显示:当微载体为5 g,种子细胞数约3.05×107个,采用灌注式培养,Vero细胞经72 h长满单层,细胞数约为3.02×109个,此时用滴度为104.45TCID50/m L的PEDV 1 m L感染Vero细胞,培养96 h,微载体上80%细胞脱落时收毒,培养的PEDV具有较高的病毒滴度。相同病毒在微载体系统与方瓶上进行同步传代,经检测病毒滴度均有提高,但在微载体系统上培养的PEDV最高滴度可达到106.05TCID50/m L,明显高于方瓶培养。本试验为研究PEDV能更好适应Vero细胞,提高PEDV产量提供技术支持。     

牛坏死杆菌对EPH4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

为探究牛坏死杆菌对小鼠乳腺上皮细胞系(EPH4细胞)增殖和凋亡的影响,本研究将坏死杆菌(牛A25菌株)以感染复数(MOI)为100感染EPH4细胞,用EdU细胞增殖法检测细胞增殖率,用Hoechst染色以及DNA Ladder检测细胞凋亡,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测凋亡基因的mRNA相对表达量变化。EdU检测结果显示,坏死杆菌可抑制EPH4细胞增殖;Hoechst染色以及DNA Ladder检测结果均显示,坏死杆菌可促进细胞凋亡的发生;RT-qPCR结果显示,与对照组相比,坏死杆菌感染EPH4细胞2 h时,促凋亡基因Bax、Bax/Bcl-2的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),感染4 h时,促凋亡基因Caspase-3和Caspase-9的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001),感染6 h时,促凋亡基因AIF的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001)。由此可见,牛坏死杆菌能够抑制EPH4细胞增殖且诱导细胞凋亡,为进一步研究坏死杆菌致病机制提供了相关数据支持。     

冷冻密度和复苏温度对BHK21细胞活力的影响

就细胞的冷冻密度和复苏温度对细胞活力的影响做了分析。取处于对数生长期的细胞以0．5×107～4．0×107／mL之间的4个细胞密度分别进行冷冻,2周之后复苏细胞,检验其复苏活力;又分别在37℃、38℃和39℃的水温复苏同一批细胞,复苏后检验细胞的活力。结果表明,随着冷冻密度的升高,复苏活力逐渐下降;在38℃水温复苏细胞的平均活力比在37℃和39℃水温复苏细胞的平均活力高,而且稳定。因此,细胞的冷冻密度和复苏活力之间存在显著负相关性,38℃的水温更适于复苏细胞。     

弓形虫环核苷酸依赖性蛋白激酶真核表达载体构建及在Vero细胞内的定位分析

为研究弓形虫环核苷酸依赖性蛋白激酶(PKAR)基因在Vero细胞内的定位情况,本研究构建弓形虫TgPKAR-RFP-C2真核表达质粒,并将其真核转染至Vero细胞内。试验中利用PKAR基因序列设计引物,以反转录获得的cDNA模板进行PCR扩增,成功获得目的片段,并构建克隆质粒pMD-PKAR。经BglⅡ和HindⅢ双酶切后构建真核表达质粒PKAR-RFP-C2,利用脂质体转染法将其导至Vero细胞内,利用Leica激光共聚焦显微镜观察PKAR基因在Vero细胞内的表达情况及其定位。结果显示,成功获得了PKAR基因,与GenBank公布的基因序列相似性为100%,并成功构建真核表达质粒及在Vero细胞内表达。Western blot试验成功检测到目的条带;激光共聚焦显微镜观察发现PKAR基因主要在Vero细胞的细胞质中呈点状表达。结果为进一步研究PKAR基因生物学功能及核酸疫苗研制奠定基础。     

黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响

为探讨黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响,将无菌条件下分离得到的家兔睾丸细胞培养于含有不同浓度黄芪提取液的培养液内,培养48 h后,用CCK-8试剂测定细胞相对活力。结果表明,培养液内添加适当浓度的黄芪提取液可以提高家兔睾丸细胞的活力。     

女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力的影响

为了筛选女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力影响的最佳剂量,并对其毒性进行评价,试验首先采用细胞计数法和MTT法绘制IPEC-J2细胞7 d的生长曲线,然后用梯度浓度的女贞子多糖刺激IPEC-J2细胞24 h,用MTT法检测细胞活力。结果表明:细胞生长稳定,生长曲线第4～7天为明显的对数生长期;0.1～10 mg/mL的女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力有明显促进作用,其中1 mg/mL的女贞子多糖效果最好(P0.01)。说明女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力有促进作用,且安全范围广。     

复苏温度对BHK-21细胞活力的影响

分别用几组不同温度(37、38、39、40、41、42℃)的水浴来复苏BHK-21细胞,研究不同温度对BHK-21细胞的影响。结果表明,在温度为38、39℃时,复苏细胞的平均活力分别为99.8%、99.6%,说明了复苏温度与活力的相关性。