腹水综合征肉鸡空肠黏膜组织结构及相关基因表达分析

试验旨在研究肉鸡腹水综合征发生发展过程中空肠核因子κB （NF-κB）及紧密连接蛋白（闭合蛋白（occludin）、紧密连接蛋白-1（claudin-1）和胞质紧密黏连蛋白1（zonula occluden 1,ZO-1）） mRNA相对表达量,以及绒毛长度、隐窝深度和绒隐比的变化,为肉鸡腹水综合征的防治提供理论依据。选取40羽1日龄罗斯肉鸡常规饲养7 d后,随机分为对照组和模型组（饲料添加3%猪油和4%鱼粉,饮水添加0.12% NaCl,9~11℃低温饲养）,35日龄检测体重,并取心脏组织测腹水心脏指数,取空肠组织以HE染色切片测量绒毛长度和隐窝深度,实时荧光定量PCR检测空肠NF-κB和紧密连接蛋白的基因表达量。结果表明,与对照组相比,模型组肉鸡体重极显著下降（P<0.01）,腹水心脏指数极显著升高（P<0.01）,空肠绒毛长度、绒隐比极显著下降（P<0.01）,隐窝深度极显著升高（P<0.01）,NF-κB mRNA相对表达量极显著升高（P<0.01）,occludin、claudin-1和ZO-1 mRNA相对表达量极显著下降（P<0.01）。表明肠道黏膜结构与功能异常及肠通透性增高促进了肉鸡腹水综合征的发生发展。     

海藻多糖对仔猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白及核转录因子-κB信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在研究不同浓度海藻多糖对仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)紧密连接蛋白及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关基因表达的影响。IPEC-J2细胞加入浓度分别为0(对照)、60、120和240μg/mL的海藻多糖处理培养基培养24 h,分析海藻多糖对IPEC-J2细胞机械屏障和免疫屏障相关基因以及蛋白表达的影响。结果表明:1)与对照组相比,60、120μg/mL的海藻多糖可以显著上调紧密连接蛋白闭锁蛋白(occludin)和闭合小环蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量(P0.05);但240μg/mL海藻多糖组occludin和ZO-1的mRNA相对表达量与对照组无显著差异(P0.05)。与对照组相比,120和240μg/mL的海藻多糖可以显著上调封闭蛋白-1(claudin-1)的mRNA相对表达量(P0.05)。与对照组相比,120、240μg/mL的海藻多糖可以显著上调claudin-1和ZO-1的蛋白相对表达量(P0.05)。2)与对照组相比,60、120和240μg/mL的海藻多糖均显著降低了髓样分化蛋白88(MyD88)和p65的mRNA相对表达量(P0.05),240μg/mL的海藻多糖显著降低了Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)的mRNA相对表达量(P0.05)。由此可知,海藻多糖可以上调IPEC-J2细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-1和ZO-1的mRNA相对表达量,降低IPEC-J2细胞NF-κB信号通路相关基因的表达,对改善仔猪小肠上皮细胞屏障功能具有积极的作用。     

21日龄断奶对仔猪肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障的影响

本试验旨在研究21日龄断奶对仔猪肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障的影响。采用2×3双因子完全随机试验设计,组别(哺乳组、断奶组)和日龄(22、24和28日龄)为2个主效应。选取6窝体况相近的健康大白仔猪,每窝选取6头平均体重为(6.1±0.2)kg的仔猪,随机分为2组,分别为断奶组和哺乳组,每组18头,分别于22、24和28日龄时屠宰,测定其生长性能、肠道形态、肠道通透性及肠黏膜屏障。结果表明:1)28日龄时,断奶组仔猪的末重和平均日增重均极显著低于哺乳组(P0.01)。2)组别和日龄对仔猪的空肠隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度、回肠绒毛高度有极显著交互作用(P0.01);断奶组的空肠、回肠隐窝深度极显著高于哺乳组(P0.01),空肠、回肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度极显著低于哺乳组(P0.01);哺乳组28日龄时的空肠绒毛高度/隐窝深度极显著高于22和24日龄时(P0.01),24日龄时的回肠绒毛高度极显著高于22日龄时(P0.01)。3)组别和日龄对仔猪的空肠黏膜二胺氧化酶(DAO)活性有显著交互作用(P0.05),断奶组的空肠、回肠黏膜DAO活性显著低于哺乳组(P0.05)。4)组别和日龄对仔猪空肠黏膜闭锁蛋白(occludin)的mRNA表达量有极显著交互作用(P0.01);空肠黏膜闭锁小带蛋白1(ZO-1)和哺乳组空肠黏膜occludin的mRNA表达量随着日龄的增加先升高后降低(P0.05);与哺乳组相比,断奶组回肠黏膜ZO-1、occludin和24日龄时空肠黏膜occludin的mRNA表达量显著降低(P0.05);24日龄时回肠黏膜ZO-1的mRNA表达量显著高于22日龄时(P0.05)。5)组别和日龄对仔猪空肠黏膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达量有显著交互作用(P0.05);断奶组24和28日龄时空肠黏膜TNF-α的mRNA表达量显著高于哺乳组(P0.05),空肠黏膜白细胞介素10(IL-10)的mRNA表达量显著低于哺乳组(P0.05)。回肠黏膜白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA表达量随着日龄的增加而降低(P0.05)。综上所述,哺乳仔猪22~28日龄时肠道发育趋于成熟,而断奶会破坏仔猪肠道上皮细胞的结构和紧密连接蛋白的mRNA表达,引起肠道绒毛变短和脱落、肠道通透性增加和炎症反应,降低平均日增重。     

人参皂苷Rg1、Re对脂多糖诱导的肠道屏障损伤的保护作用

为了探究人参皂苷Rg1、Re对脂多糖(LPS)诱导的肠道屏障损伤的保护作用,将40只4周龄雄性昆明小鼠随机分为Control、LPS、Rg1和Re组,每组10只。Control和LPS组腹腔注射无菌PBS,Rg1组腹腔注射Rg1,Re组腹腔注射Re。在试验8 d后,Control组腹腔注射无菌PBS,其余组腹腔注射LPS,6 h后处死,采样后检测。结果表明：LPS处理后DAI评分显著增加,肝脏、脾脏和肺脏指数显著升高;空肠和回肠绒毛长度显著缩短,空肠和回肠隐窝深度增加,绒毛长度与隐窝深度的比率降低;空肠和回肠紧密连接蛋白Occludin的蛋白表达显著降低;TLR4、NF-κB和Caspase-1的mRNA表达水平显著上调。而Rg1和Re预处理减轻了LPS诱导的DAI评分增加,降低了肝脏和肺脏指数;显著增加了绒毛长度,Re显著降低了空肠隐窝深度,Rg1和Re显著提高了绒毛长度与隐窝深度的比率;Rg1预处理显著增加了回肠Occludin的蛋白表达,Re预处理显著增加了空肠和回肠Occludin的蛋白表达;Rg1预处理显著下调了TLR4、NF-κB和Caspase-1的mRNA表达水平。Re...     

敌草快和硫辛酸对育肥猪肠道结构及消化功能的影响

本文旨在研究敌草快和硫辛酸(LA)对育肥猪肠道结构及消化功能的影响,以探究LA对敌草快引起的应激是否有缓解作用。选取24头(70.64±3.61)kg的健康大白阉公猪,按照2×2因子设计,随机分为对照组、LA组、敌草快组和LA+敌草快组,每个组设6个重复,每个重复1头猪。试验期29 d。LA添加剂量为800 mg/kg饲粮,饲喂贯穿试验全程,而一次性腹腔滴注敌草快于试验第15天进行,无腹腔滴注敌草快试验猪滴注等量的生理盐水。于试验第29天对所有试验猪前腔静脉采血后屠宰取样,运用试剂盒检测血浆和肠道氧化损伤标志物的含量以及空肠食糜消化酶的活性,苏木精-伊红(HE)染色后运用图像分析软件观察肠道形态结构并测定绒毛高度、隐窝深度,并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C),荧光定量PCR法检测闭合蛋白(occludin)和紧密结合蛋白(ZO-1)的相对表达量。结果表明:1)敌草快极显著升高了试验猪血浆和肠道丙二醛(MDA)、蛋白质羰基(PCO)和8-羟基鸟苷(8-OHd G)的含量(P0.01),极显著降低了十二指肠、空肠及回肠绒毛高度、隐窝深度(P0.01),极显著增大了十二指肠和空肠V/C(P0.01),显著增大了回肠V/C(P0.05),极显著降低了空肠occludin和ZO-1 m RNA相对表达量(P0.01),极显著降低了空肠食糜中淀粉酶、胰蛋白酶以及脂肪酶的活性(P0.01)。2)饲粮中添加LA对试验猪血浆和肠道MDA、PCO和8-OHd G含量的影响均不显著(P0.05),对十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度以及V/C的影响均不显著(P0.05),对空肠occludin和ZO-1 m RNA相对表达量的影响也不显著(P0.05),对空肠食糜中淀粉酶、胰蛋白酶以及脂肪酶活性的影响差异也均不显著(P0.05)。3)在应激状态下,饲粮中添加LA使猪血浆8-OHd G含量显著降低(P0.05),十二指肠绒毛高度、空肠绒毛高度以及回肠隐窝深度显著升高(P0.05),空肠V/C显著降低(P0.05),回肠V/C极显著降低(P0.01),空肠occludin和ZO-1 m RNA相对表达量显著升高(P0.05),空肠食糜淀粉酶和胰蛋白酶的活性显著提升(P0.05)。由此可见,敌草快引起了育肥猪强烈的氧化应激,导致了肠道结构的严重损伤并减弱了肠道的消化功能;在敌草快引起的应激状态下,饲粮中添加800 mg/kg LA能够减缓肠道结构的损伤并能一定程度地提高肠道的消化功能。     

香菇多糖对大肠杆菌攻毒大鼠空肠形态结构、上皮细胞数量和紧密连接蛋白表达的影响

本研究旨在探讨香菇多糖对大肠杆菌攻毒大鼠空肠形态结构、上皮细胞数量和紧密连接蛋白表达的影响。将24只SD大鼠随机分成4个组(A、B、C、D组),每组6个重复,每个重复1只。A、B组饮用蒸馏水,C、D组饮用蒸馏水中添加20μg/m L的香菇多糖;试验第15天B、D组灌服2 m L浓度为1×1010CFU/m L大肠杆菌K88,A、C组灌服等量生理盐水。试验第18天心脏采血处死,取空肠固定和冻存,制作石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色和高碘酸雪夫氏(PAS)染色,测定绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度、上皮内淋巴细胞(IEL)数量和上皮杯状细胞(GC)数量,计算绒毛高度与隐窝深度的比值(V/C);并采用蛋白质印迹(Western-blot)法测定空肠紧密连接蛋白Occludin的表达水平。结果表明:各组绒毛高度和绒毛宽度无显著差异(P0.05)。C组隐窝深度极显著低于A、B组(P0.01),显著低于D组(P0.05)。C组V/C极显著高于A、B、D组(P0.01)。C组IEL数量极显著低于B、D组(P0.01),显著低于A组(P0.05)。C组上皮GC数量极显著高于A、D组(P0.01),与B组差异不显著(P0.05)。D组Occludin表达水平明显高于A、B和C组,B组Occludin表达水平高于A组。综上,大鼠饮用水中添加香菇多糖可改善大鼠空肠形态结构,并提高其抵抗大肠杆菌感染能力,促进Occludin的表达。     

代乳粉添加枯草芽孢杆菌对7～28日龄湖羊羔羊胃肠道发育的影响

旨在观察代乳粉中添加枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)对7～28日龄湖羊羔羊胃肠道生长发育的影响。本研究选择健康、生长发育正常的7日龄湖羊公羔(双羔)30只,按同质性原则随机分为2组,每组15只,每只为1个重复,分别饲喂枯草芽孢杆菌含量为0和0.2%的代乳粉,试验期21 d。28日龄时每组随机选择8只羔羊进行屠宰,称量各胃室和各肠段内容物重量和净重量,量取各肠段长度,计算各段的相对重量和相对长度及内容物分布。采集皱胃胃底腺区及十二指肠、空肠和回肠中段的组织样品,用多聚甲醛固定后用于组织形态学测定,并测定小肠上皮细胞凋亡率。同时采集十二指肠、空肠和回肠黏膜,测定闭锁蛋白(occludin)、闭锁小带1(zonula occludens-1,ZO-1)和紧密连接蛋白1(claudin 1)mRNA表达量。结果表明:1)枯草芽孢杆菌显著降低7～28日龄湖羊羔羊十二指肠指数(占活体重量百分比,P=0.037)、空肠相对长度(占全肠长度百分比,P=0.009)和十二指肠绒毛宽度(P=0.001),显著升高羔羊结肠相对长度(占全肠长度百分比,P=0.012)、空肠内容物相对重量(占全肠内容物重量百分比,P=0.003)、回肠绒毛高度(P=0.010)和隐窝深度(P=0.034);2)枯草芽孢杆菌显著上调十二指肠黏膜ZO-1蛋白mRNA表达量(P=0.012),此外,枯草芽孢杆菌有上调羔羊回肠黏膜occludin蛋白mRNA表达量以及降低回肠上皮细胞凋亡率的趋势(P=0.053,P=0.079);3)枯草芽孢杆菌对其他胃肠段的相对重量(占活体重量、总胃重量、总肠重量和总胃肠重量百分比)及其内容物相对重量(占活体重量、总胃内容物重量、总肠内容物重量和总胃肠内容物重量百分比)、肠道相对长度(占全肠长度百分比)以及皱胃和小肠组织形态与小肠黏膜occludin蛋白、ZO-1蛋白和claudin 1蛋白mRNA表达量和小肠其他肠段上皮细胞凋亡率均未产生显著影响(P0.05)。枯草芽孢杆菌对7～28日龄湖羊羔羊胃肠道生长发育基本无显著影响,但可提高小肠屏障功能并减少上皮细胞凋亡,有利于保持小肠结构和功能完整。     

急性冷刺激对断奶仔猪十二指肠组织结构及核转录因子-κB/肠道碱性磷酸酶信号通路的影响

本试验旨在探究急性冷刺激对断奶仔猪十二指肠肠道结构及核转录因子-κB(NF-κB)/肠道碱性磷酸酶(IAP)信号通路的影响。试验选取16头30日龄的健康"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分为4组,每组4个重复,每个重复1头仔猪。对照组饲养于温度为(24±2)℃的环境中,3个急性冷刺激组在温度为(4±2)℃的人工气候室中分别饲养2、6和12 h。急性冷刺激试验结束后屠宰各组仔猪,取十二指肠进行固定、石蜡切片、苏木精-伊红(HE)染色,观察肠黏膜形态变化,并检测肠绒毛长度、隐窝深度,同时应用Western-blot法检测十二指肠NF-κB/IAP信号通路关键蛋白的表达情况。结果表明:对照组仔猪十二指肠结构完整,绒毛排列紧密,急性冷刺激组仔猪十二指肠绒毛出现断裂和少数上皮细胞变性脱落现象,绒毛排列稀疏。急性冷刺激12 h时,仔猪十二指肠绒毛高度与对照组和急性冷刺激2、6 h时相比显著降低(P0.05)。与对照组相比,3个急性冷刺激组隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度均下降,但差异不显著(P0.05)。在十二指肠中,与对照组相比,急性冷刺激2 h时,p65相对表达量略有升高,但差异不显著(P0.05);急性冷刺激6 h时,p65相对表达量基本恢复到冷刺激前(对照组)水平;与对照组和急性冷刺激6 h时相比,急性冷刺激12 h时p65相对表达量显著升高(P0.05);与对照组相比,急性冷刺激2和6 h时核转录因子抑制蛋白(IκB)相对表达量有增加的趋势,但差异不显著(P0.05);急性冷刺激12 h时IκB相对表达量与对照组相比极显著增加(P0.01),与急性冷刺激2和6 h时相比也极显著增加(P0.01);与对照组相比,急性冷刺激2和6 h时磷酸化IκB(p-IκB)相对表达量略有增加,但差异不显著(P0.05);急性冷刺激12 h时p-IκB相对表达量与对照组相比极显著增加(P0.01);与对照组相比,急性冷刺激2、6和12 h时IAP相对表达量极显著升高(P0.01);与急性冷刺激2 h时相比,急性冷刺激6和12 h时IAP相对表达量极显著降低(P0.01)。结果提示,急性冷刺激损伤断奶仔猪十二指肠黏膜结构,这可能与急性冷刺激激活NF-κB/IAP信号通路,并上调NF-κB/IAP通路相关蛋白的表达有关。     

溶菌酶对热应激肉鸡肠道炎症和氧化应激的影响

为了研究溶菌酶添加饲料对热应激肉鸡肠道健康的影响,采用单因素随机设计试验,将800只1日龄的健康肉鸡随机分为4组(对照组、热应激组、抗生素添加热应激组和溶菌酶添加热应激组),每组10个重复,每个重复20只。在试验第42 d分别检测空肠黏膜炎症因子和紧密连接蛋白mRNA表达水平、绒毛高度、隐窝深度以及抗氧化状态。结果表明,与热应激组相比,溶菌酶能够显著降低肉鸡肠黏膜中IL-1β、IL-6和iNOS mRNA的表达水平(P<0.05);溶菌酶添加组肉鸡肠黏膜紧密连接相关蛋白Claudin-1、Claudin-5以及ZO-1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与此同时,溶菌酶添加组肉鸡回肠绒毛高度显著增加(P<0.05),肠绒毛高度/隐窝深度比率明显变大(P<0.05);溶菌酶添加还能改善肉鸡氧化应激状态,肉鸡血清中MDA水平显著降低(P<0.05),SOD、GSH-Px和TAOC活性显著升高(P<0.05)。研究结果表明,添加溶菌酶能够缓解热应激肉鸡的肠道炎症和氧化应激反应,改善肠道形态并提高动物肠道屏障功能。     

无动物性蛋白质饲粮添加胍基乙酸对断奶仔猪生长性能和肠道屏障的影响

本试验旨在探讨在断奶仔猪饲粮中采用一定量的胍基乙酸与去皮豆粕替代鱼粉,研究其对断奶仔猪生长性能、血清生理生化相关指标以及肠道屏障功能的影响。试验选取42日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪204头,随机分为3组(每组4个重复,每个重复17头),分别为对照组(饲喂含3%秘鲁进口鱼粉的基础饲粮)、无动物性蛋白质组(用3%去皮豆粕替代对照组饲粮中3%的鱼粉)、胍基乙酸组(在无动物性蛋白质组饲粮中添加600 mg/kg胍基乙酸),参与试验的各组饲粮调整后营养水平和限制性氨基酸含量均相同。试验期为28 d。结果表明:1)与对照组相比,在无动物性蛋白质饲粮中添加600 mg/kg胍基乙酸显著提高断奶仔猪的末重(P0.05),极显著提高断奶仔猪平均日增重(P0.01),显著降低料重比(P0.05),且断奶仔猪的死淘率无显著差异(P≥0.05);与对照组相比,采用3%的去皮豆粕替代3%的鱼粉,断奶仔猪的死淘率增加了33.33%(P≥0.05),而在此基础上添加适量的胍基乙酸后死淘率降低至与对照组同一水平。2)与对照组相比,在无动物性蛋白质饲粮中添加胍基乙酸显著提高断奶仔猪血清中总蛋白和球蛋白的含量(P0.05),对血清中脂代谢、糖代谢以及相关激素指标均无显著影响(P≥0.05)。3)与对照组相比,在无动物性蛋白质饲粮中添加胍基乙酸除显著降低断奶仔猪空肠绒毛高度(P0.05)外,对空肠隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度(V/C)值以及对十二指肠、回肠的绒毛高度、隐窝深度和V/C值均无显著影响(P≥0.05)。4)与对照组相比,在无动物性蛋白质饲粮中添加胍基乙酸极显著增加断奶仔猪十二指肠和回肠封闭蛋白(occludin)的表达量(P0.01),显著增加十二指肠闭合蛋白-1(claudin-1)的表达量(P0.05),显著降低血清内毒素的含量(P0.05),极显著增加空肠和回肠的杯状细胞数量(P0.01),显著提高回肠抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)的mRNA表达量(P0.05);与无动物性蛋白质组相比,在无动物性蛋白质饲粮中添加胍基乙酸极显著增加断奶仔猪回肠occludin的表达量(P0.01),显著增加十二指肠occludin和空肠claudin-1的表达量(P0.05),显著降低血清内毒素的含量(P0.05)。由此可见,在无动物性蛋白质饲粮中添加600 mg/kg胍基乙酸能有效改善断奶仔猪的肠道屏障功能,促进仔猪的生长。     

植物乳杆菌抑制产肠毒素型大肠杆菌诱发猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制

本试验旨在研究植物乳杆菌抑制产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)诱发猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制。试验利用植物乳杆菌预处理猪肠上皮细胞IPEC-J2 3 h,ETEC刺激细胞1、3、6、12和24 h,收集细胞及其培养上清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用实时荧光定量PCR检测细胞中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)以及NOD样受体3(NLRP3)和NOD样受体6(NLRP6)的表达,采用Western blot检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)[p38和细胞外信号调节激酶(ERK)]和核转录因子-κB(NF-κB)p65的磷酸化水平以及紧密连接蛋白——闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭锁蛋白(occludin)的表达。分别采用p38 MAPK抑制剂、ERK-MAPK抑制剂和NF-κB p65抑制剂处理IPEC-J2细胞1 h,再用植物乳杆菌预处理细胞3 h,最后用ETEC处理细胞24 h,收集细胞和培养上清,采用ELISA法检测IL-1β、IL-8和TNF-α含量以及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果表明:1)与ETEC处理相比,植物乳杆菌预处理能够极显著降低ETEC感染12～24 h细胞产生IL-1β、IL-8和TNF-α的含量(P0.01),显著或极显著提高ETEC感染3～12 h细胞中TLR2、TLR4、NLRP3和NLRP6的mRNA相对表达量(P0.05或P0.01),极显著降低ETEC感染24 h细胞中TLR2和NLRP3的mRNA相对表达量(P0.01),极显著降低ETEC感染3～6 h细胞中p38 MAPK和NF-κB p65的磷酸化水平(P0.01),显著或极显著提高ETEC感染6～24 h细胞中ZO-1和occludin的表达量(P0.05或P0.01)。2)与ETEC处理相比,抑制剂和植物乳杆菌共同作用能够极显著降低ETEC感染细胞产生IL-1β、IL-8、TNF-α的含量和LDH的活性(P0.01),植物乳杆菌单独作用也可以极显著降低ETEC感染细胞产生LDH的活性(P0.01),并且信号通路抑制剂对植物乳杆菌调控部分促炎性细胞因子的产生有协同作用。综上所述,植物乳杆菌可以通过致弱p38 MAPK磷酸化和阻断NF-κB信号通路的活化而降低炎症相关因子的产生,从而表现出提高猪肠上皮细胞完整性的潜力。     

丁酸钠对LPS刺激肉仔鸡肠道炎症反应的作用研究

本试验旨在研究肉鸡在LPS应激下添加丁酸钠对肠道炎症反应的影响。120只1日龄AA肉仔鸡随机分成2个处理组,对照组饲喂基础饲粮(未添加丁酸钠),试验组饲喂基础饲粮+1g/kg丁酸钠。在试验第16、18和20天时,各处理组一半试鸡皮下注射0.5g/kg体重大肠杆菌LPS。试验发现LPS刺激显著降低是绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值(V/C值,P0.05),显著提高十二指肠隐窝深度(P0.01);添加丁酸钠显著提高十二指肠、空肠绒毛高度、V/C值和十二指肠隐窝深度(P0.05),对空肠隐窝深度无显著影响。LPS刺激显著提高空肠和回肠粘膜髓过氧化物酶(MPO)活性、细胞粘附分子1(ICAM-1)和NF-κB水平(P0.05),降低IGF-1含量。LPS刺激提高十二指肠粘膜白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达水平(P0.05)。添加丁酸钠降低十二指肠粘膜MPO活性和TNF-α基因表达水平,并降低十二指肠和空肠TNF-α基因表达水平(P0.05)。添加丁酸钠和LPS刺激对十二指肠粘膜MPO活性和ICAM-1水平具有交互作用(P0.05),对肠道组织形态和炎症因子没有影响。试验表明,添加丁酸钠可以改善肉仔鸡小肠形态结构和功能,并能降低LPS刺激引起的免疫应激,但不是通过激活NF-κB途经。     

猪胰高血糖素样肽-2通过细胞外信号调节激酶1/2调节仔猪空肠上皮细胞紧密连接蛋白表达

本试验以体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,研究了猪胰高血糖素样肽-2(p GLP-2)对紧密连接蛋白表达的调节及其信号传导机制。培养液中分别添加10-9mol/L p GLP-2(p GLP-2组)和10-9mol/L p GLP-2、10μmol/L U0126(p GLP-2+U0126组),对照组不添加以上试剂,每组3个重复,每个重复1个培养孔。测定IPEC-J2胞质紧密黏连蛋白-1(ZO-1)、occludin、claudin-1以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达量。结果表明:与对照组相比,IPEC-J2细胞培养液中添加p GLP-2显著增加了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量(P0.05);与p GLP-2组相比,在IPEC-J2细胞培养液中加入ERK1/2的抑制剂U0126,显著降低了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量(P0.05)。综合得出,ERK1/2通路是p GLP-2调控肠道上皮细胞紧密连接蛋白表达的一条重要信号通路。     

饲粮发酵棉籽粕水平对28～70日龄马冈鹅生长性能、屠宰性能、肠道形态结构及回肠黏膜免疫屏障相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮发酵棉籽粕水平对28～70日龄马冈鹅生长性能、屠宰性能、肠道形态结构及回肠黏膜免疫屏障相关基因表达的影响。选择体重相近、健康的28日龄马冈鹅公鹅432只,随机分成6个组,每组6个重复,每个重复12只。各组饲粮发酵棉籽粕水平分别为0(对照组)、5%、10%、15%、20%和25%(游离棉酚含量分别为0、22、44、66、88和110 mg/kg)。试验期42 d。结果表明:1)饲粮发酵棉籽粕水平对28～70日龄马冈鹅平均日增重和平均日采食量无显著影响(P0.05)。20%和25%发酵棉籽粕水平组的料重比显著高于对照组(P0.05)。2)饲粮发酵棉籽粕水平对70日龄马冈鹅屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腹脂率均无显著影响(P0.05)。25%发酵棉籽粕水平组的腿肌率显著低于对照组(P0.05)。3)饲粮发酵棉籽粕水平对70日龄肉鹅十二指肠、回肠、盲肠和总肠道相对长度以及空肠、回肠、盲肠、直肠和总肠道相对重量均无显著影响(P0.05)。25%发酵棉籽粕水平组空肠、直肠相对长度显著高于对照组和15%发酵棉籽粕水平组(P0.05),十二指肠相对重量显著高于其他各组(P0.05)。4)饲粮发酵棉籽粕水平对十二指肠隐窝深度、绒毛高度/隐窝深度,空肠绒毛高度、隐窝深度、绒毛高度/隐窝深度,回肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度均无显著影响(P0.05)。15%和25%发酵棉籽粕水平组十二指肠绒毛高度显著低于对照组(P0.05),15%发酵棉籽粕水平组回肠隐窝深度显著低于对照组(P0.05)。5)饲粮发酵棉籽粕水平对回肠黏膜闭锁蛋白(Claudin)的mRNA相对表达量无显著影响(P 0.05)。25%发酵棉籽粕水平组的回肠黏膜闭锁小环蛋白-1(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)、核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA相对表达量显著高于对照组(P0.05),回肠黏膜白细胞介素-10(IL-10)的mRNA相对表达量显著低于对照组(P0.05)。综上所述,饲粮发酵棉籽粕水平过高可引起肠道形态结构和免疫屏障功能受损,导致饲料转化率降低,推荐28～70日龄马冈鹅饲粮发酵棉籽粕水平不高于20%(游离棉酚含量不高于88 mg/kg)。     

民猪母猪饲粮中添加精氨酸对初生仔猪小肠形态及IL-2基因表达量的影响

选取妊娠第45天民猪母猪12头,随机分成2组,每组6个重复,每个重复1头母猪。Ⅰ组(对照组)饲喂基础饲粮,Ⅱ组(试验组)饲喂基础饲粮+1%L-精氨酸。采取初生仔猪小肠,制作切片,进行小肠形态学观察,并测定小肠IL-2基因的表达量。结果显示,试验组初生仔猪十二指肠绒毛高度、绒毛宽度和微绒毛长度均有升高的趋势,而绒毛高度与隐窝深度的比值显著升高,隐窝深度较对照组显著降低。空肠绒毛宽度以及微绒毛长度均有升高趋势,而绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度的比值和隐窝深度较对照组分别显著升高22.89%、64.15%和降低37.12%(P0.05)。回肠绒毛宽度以及微绒毛长度均有不同程度的提高,而绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度的比值及隐窝深度较对照组分别极显著增加34.38%、86.75%及降低40.63%(P0.01);试验组初生仔猪十二指肠IL-2基因表达量显著升高(P0.05),空肠IL-2基因表达量极显著升高(P0.01),而回肠该基因表达量呈现升高趋势,但无显著差异(P0.05)。结果表明,妊娠母猪饲粮中添加精氨酸能够有效提高初生仔猪的肠道免疫力及促进肠道发育。     

羔羊断奶后应激腹泻对肠道屏障的影响

旨在研究羔羊在断奶应激期对肠道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、肠道上皮屏障紧密连接蛋白(ZO-1)、咬合蛋白(Occluding)及白细胞介素1β(IL-1β)基因、肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因mRNA转录水平和十二指肠绒毛长度/隐窝深度的比值的影响。为探索羔羊断奶应激腹泻肠道屏障的调节机制,随机采集45日龄断奶5 d内的羔羊,并分为腹泻组G0和健康组G3,每组5个样本。结果表明,肠道组织中G3健康组与G0腹泻组相比,肠道组织中sIgA的浓度显著增加(P0.01);G3健康组与G0腹泻组相比,ZO-1和Occluding基因的相对表达量显著增加,TNF-α基因的相对表达量显著下降,而两组的IL-1β基因的相对表达量均无显著差异(P0.05)。在十二指肠绒毛和隐窝HE染色测量中,G0腹泻组与G3健康组绒毛长度和隐窝深度的比值(V/C)也有显著差异(P0.05)。说明羔羊在断奶应激期肠道屏障的变化可能是引起腹泻的重要因素之一,研究结果为后续羔羊应激性腹泻分子调控机理及防治方法提供理论依据。     

日粮添加金霉素对断奶仔猪肠道核因子NF-κB活化的影响

以72头平均体重(5.06±0.49)kg的21日龄杜×大×长断奶仔猪为研究对象,探讨了日粮添加金霉素对肠道核因子NF-κB活化的影响。结果表明,在断奶仔猪日粮中添加75和150mg/kg金霉素,日均采食量分别提高了3.62%和8.35%(P<0.05);腹泻率分别下降了22.10%和52.23%(P<0.01);血清中TNF-α水平下降了28.78%(P<0.05)和78.29%(P<0.01);IL-6水平下降了12.85%和83.40%(P<0.01);空肠黏膜中核因子NF-κB活性分别下降了41.57%(P<0.05)和91.01%(P<0.01);IκK-βmRNA表达分别下降了56.16%(P<0.05)和89.72%(P<0.01),显著提高空肠和回肠组织绒毛长度,显著降低隐窝深度。结果提示,日粮中金霉素可能通过调控肠道黏膜组织NF-κB抑制蛋白激酶IκK-βmRNA水平,抑制核因子NF-κB的活化和核移位,进而影响肠道炎症因子的表达,改善断奶仔猪肠道黏膜形态结构,提高采食量,降低腹泻率。     

11S球蛋白通过核因子-κB、诱导型一氧化氮合酶、c-Jun N端激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导猪小肠上皮细胞损伤的研究

本研究旨在利用细胞体外培养技术,分析11S球蛋白通过核因子-кB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的作用差异。试验随机分为6组:A组(对照组)无添加;B组添加5 mg/mL的11S球蛋白;C、D、E和F组分别添加1μmol/L的NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)、iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、JNK抑制剂SP600125和p38 MAPK抑制剂SB202190预处理后,分别添加5 mg/mL的11S球蛋白。培养24 h后,CCK-8检测细胞活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)和白细胞介素-10(IL-10)含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察细胞及细胞核形态,用透射电子显微镜观察细胞超微结构,实时荧光定量PCR检测NF-κB、iNOS、JNK、p38 MAPK mRNA相对表达量,Western blot检测NF-κB、iNOS、JNK、p38 MAPK蛋白表达水平。结果显示:1)与A组相比,B组细胞活性极显著降低(P0.01);与B组相比,C、D、E和F组细胞活性极显著升高(P0.01),且C组细胞活性显著高于D、E和F组(P0.05)。2)与A组相比,B组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著升高(P0.01),IL-10含量极显著降低(P0.01);与B组相比,C、D、E和F组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著降低(P0.01),IL-10含量极显著升高(P0.01)。3)与A组相比,B组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平和mRNA相对表达量极显著升高(P0.01)。4)与B组相比,C和F组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P0.05或P0.01),D组NF-κB、iNOS和JNK mRNA相对表达量极显著降低(P0.01),E组NF-κB、JNK和p38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P0.05或P0.01)。5)与B组相比,C、E和F组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平极显著降低(P0.01),D组NF-κB、iNOS和JNK蛋白表达水平极显著降低(P0.01)。6) HE染色及透射电镜观察可见,B组细胞损伤、胞质空泡化、核染色质聚集,C、D、E和F组细胞损伤受到抑制,且C组细胞结构形态的完整性优于D、E和F组。由此可见,11S球蛋白通过JNK/p38 MAPK/NF-κB/iNOS信号通路诱导IPEC-J2细胞损伤,且NF-κB信号通路在诱导细胞损伤的过程中发挥关键作用。     

芪楂口服液药渣对断奶仔猪生长性能和肠道健康的影响

为了探讨中药渣作为饲料原料或饲料添加剂的可行性,本试验选用21日龄断奶仔猪120头,随机分为对照组、芪楂口服液药渣组、发酵芪楂口服液药渣组和氧化锌组,比较研究发酵前和发酵后芪楂口服液药渣对断奶仔猪生长性能、营养物质消化率、肠黏膜形态结构和紧密连接蛋白mRNA相对表达量。每组5个重复,每个重复6头仔猪。试验期为28 d。结果表明:1)试验全期(第1~28天),发酵芪楂口服液药渣组仔猪的料重比低于对照组和芪楂口服液药渣组(P0.05),氧化锌组仔猪腹泻率显著低于其他各组(P0.05)。2)试验第28天,发酵芪楂口服液药渣组仔猪的干物质、粗脂肪和粗蛋白质消化率显著低于对照组(P0.05),粗脂肪消化率显著低于芪楂口服液药渣组(P0.05),粗蛋白质消化率显著低于氧化锌组(P0.05)。3)发酵芪楂口服液药渣组仔猪空肠、回肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度值大于芪楂口服液药渣组(P0.05),绒毛宽度和隐窝深度小于芪楂口服液药渣组(P0.05)。4)各组空肠、回肠和结肠闭锁蛋白和紧密连接相关蛋白-1的mRNA相对表达量无显著差异(P0.05)。综上所述,与芪楂口服液药渣相比,发酵芪楂口服液药渣可在一定程度上改善断奶仔猪肠道形态结构,二者对紧密连接蛋白mRNA相对表达量没有显著影响。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对蛋鸡肠道健康的影响

试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对蛋鸡肠道形态结构、炎症因子、紧密连接蛋白表达的影响。选取26周龄产蛋率一致的海兰褐蛋鸡80只,随机分为4组,每组4个重复,每个重复5只,对照组每天灌服等量生理盐水,试验组每天分别灌服1、5和10 mg/kg·BW的DON,连续灌服6周。结果显示：与对照组相比,5和10 mg/kg DON组肠道形态结构均受到不同程度损伤,出现黏膜脱落、绒毛数量减少的现象,绒毛长度显著降低,隐窝深度增加,且呈剂量-效应关系（P<0.05或P<0.01）。DON剂量≥5 mg/kg时,白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)和紧密连接跨膜蛋白（claudin-1）的基因表达水平降低（P<0.05或P<0.01）;DON剂量为10 mg/kg时,紧密连接蛋白-1(ZO-1)和紧密连接跨膜蛋白（claudin-1）的蛋白表达也显著降低（P<0.05）;DON剂量为1 mg/kg时,白细胞介素8(IL-8)表达水平显著增加（P<0.01）。表明DON高于5 mg/kg·BW时能显著破坏蛋鸡肠道...