表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响

试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分为4个处理组,分别为对照组、STa组、LMG194组和K88组。整个试验期间均以人工乳饲喂,预饲期4d,试验第5天进行攻毒,STa组、LMG194组及K88组分别在早晚两次口服灌喂2×109 CFU大肠杆菌LMG194-pBAD-STa、LMG194和K88,对照组灌服等量生理盐水,试验第7天早上各组灌服D-木糖并采血,屠宰并取空肠、回肠组织样品,测量仔猪血常规指标、血浆D-木糖含量及二胺氧化酶(DAO)活力,以及吸收与转运相关基因与蛋白表达量。结果显示,与对照组相比,STa组仔猪血液中中性粒细胞、中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05),LMG194组与K88组仔猪血液中中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05);STa组与K88组仔猪血浆D-木糖含量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组血浆DAO活力显著升高(P<0.05);STa组与LMG194组空肠AQP8、AQP10、KCNJ13和b0,+AT基因表达量均显著降低(P<0.05),K88组空肠AQP8、AQP10基因表达量显著升高(P<0.05);STa组回肠AQP8基因表达量显著降低(P<0.05),AQP10、SGLT-1基因表达量显著升高(P<0.05),LMG194组、K88组AQP8基因表达量显著升高(P<0.05),K88组AQP10、KCNJ13、b0,+AT、SGLT-1基因表达量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组空肠HSP70蛋白的表达量显著升高(P<0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪小肠产生炎症,吸收与转运能力下降。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道免疫、屏障及抗氧化功能的影响

旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道吸收、屏障、转运及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,分成4个处理组,分别为对照组(基础日粮)、STa组(基础日粮+2×109 CFU重组菌LMG194-STa)、LMG194组(基础日粮+2×109 CFU大肠杆菌LMG194)和K88组(基础日粮+2×109 CFU大肠杆菌K88)。使用人工乳饲养,第5天进行攻毒,第7天屠宰取样。测量回肠免疫相关基因IFN-γ、IL-4与VNN1及回肠黏膜损伤基因Villin与MMP3的相对转录量,空肠黏膜上皮连接蛋白Occludin与Claudin-1相对表达量,以及十二指肠、回肠氧化相关酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)的活力与氧化相关产物丙二醛(MDA)的含量。试验结果表明,与对照组相比,STa组显著降低了回肠IFN-γ和IL-4基因相对转录量,VNN1相对转录量显著上调(P0.05);STa组显著降低了基因Villin与MMP3相对转录量(P0.05)及蛋白Occludin与Claudin-1相对表达量(P0.05);同时,STa组十二指肠、回肠GSH-Px和回肠MPO活力显著降低(P0.05);STa组十二指肠丙二醛(MDA)含量显著升高(P0.05)。结果显示,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪肠道免疫、屏障及抗氧化功能下降。     

表达耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响

试验旨在研究表达耐热肠毒素（STa）的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分在4个日粮处理组,分别为对照组（人工乳）,STa组（人工乳+2×10⁹ CFU重组菌LMG194-pBAD-STa）,LMG194组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌LMG194）,K88组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌K88）。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,测量小肠黏膜的绒毛高度和隐窝深度,检测空肠、回肠、结肠及血清中的过氧化氢酶（CAT）、总一氧化氮合成酶（TNOS）与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活力及血清中丙二醛（MDA）与过氧化氢（H₂O₂）的含量。试验结果表明,与对照组相比,STa组仔猪各肠段绒毛高度均显著降低（P<0.05）,十二指肠隐窝深度及绒毛高度与隐窝深度的比值显著降低（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠绒毛表面积显著降低（P<0.05）;同时,STa组回肠、结肠CAT活力显著降低,血清、空肠、回肠和结肠中的TNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组结肠iNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组血清中的MDA与H₂O₂含量显著提高（P<0.05）。结果显示,表达STa的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪肠道结构损伤和抗氧化能力下降。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌诱发仔猪小肠炎症的分子机制研究

本试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌诱发7日龄仔猪小肠炎症反应。选取24头7日龄健康仔猪,随机分为4个处理组:对照组(人工乳)、STa组(人工乳+2×10~9 CFU重组菌LMG194-pBAD-STa)、LMG194组(人工乳+2×10~9 CFU大肠杆菌LMG194)和K88组(人工乳+2×10~9 CFU大肠杆菌K88),每组6头。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,观察空肠组织形态学变化,并检测血清中炎性细胞因子含量及空肠免疫相关基因的相对表达量。结果显示,与对照组相比,STa与K88组仔猪空肠绒毛明显萎缩变短,有明显损伤甚至脱落;STa、LMG194及K88组血清中IL-10、IL-8和IL-6浓度均显著升高(P<0.05),LMG194和K88组血液和肠道iFABP浓度均显著降低(P<0.05),STa和K88组血清中TNF-α浓度显著降低、NF-κB浓度显著升高,LMG194组NF-κB浓度显著降低、TNF-α浓度显著升高(P<0.05);STa和LMG194组CCL2和CXCL9基因表达水平显著上调(P<0.05),VNN1基因表达水平显著下调(P<0.05),STa和LMG194组IFN-γ组基因水平分别显著上升和下降(P<0.05);K88组CXCL9和IFN-γ基因表达水平显著下调(P<0.05),VNN1基因表达水平显著上调(P>0.05),CCL2基因表达水平无明显差异(P>0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素STa的重组大肠杆菌几乎具有与K88一样的毒性,可导致7日龄仔猪小肠黏膜受损,诱发严重的炎症反应,导致仔猪腹泻,可作为仔猪腹泻模型的候选菌株。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌诱发仔猪小肠炎症的分子机制研究

本试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌诱发7日龄仔猪小肠炎症反应。选取24头7日龄健康仔猪,随机分为4个处理组:对照组(人工乳)、STa组(人工乳+2×10~9 CFU重组菌LMG194-pBAD-STa)、LMG194组(人工乳+2×10~9 CFU大肠杆菌LMG194)和K88组(人工乳+2×10~9 CFU大肠杆菌K88),每组6头。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,观察空肠组织形态学变化,并检测血清中炎性细胞因子含量及空肠免疫相关基因的相对表达量。结果显示,与对照组相比,STa与K88组仔猪空肠绒毛明显萎缩变短,有明显损伤甚至脱落;STa、LMG194及K88组血清中IL-10、IL-8和IL-6浓度均显著升高(P0.05),LMG194和K88组血液和肠道iFABP浓度均显著降低(P0.05),STa和K88组血清中TNF-α浓度显著降低、NF-κB浓度显著升高,LMG194组NF-κB浓度显著降低、TNF-α浓度显著升高(P0.05);STa和LMG194组CCL2和CXCL9基因表达水平显著上调(P0.05),VNN1基因表达水平显著下调(P0.05),STa和LMG194组IFN-γ组基因水平分别显著上升和下降(P0.05);K88组CXCL9和IFN-γ基因表达水平显著下调(P0.05),VNN1基因表达水平显著上调(P0.05),CCL2基因表达水平无明显差异(P0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素STa的重组大肠杆菌几乎具有与K88一样的毒性,可导致7日龄仔猪小肠黏膜受损,诱发严重的炎症反应,导致仔猪腹泻,可作为仔猪腹泻模型的候选菌株。     

重组大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及对小鼠胚胎稳定性的影响

为研究大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）对小鼠胚胎稳定性的影响,运用大肠杆菌表达系统制备了具有生物活性的重组大肠杆菌LT,用重组LT通过腹腔注射处理妊娠小鼠,分析了LT对小鼠胚胎稳定性的影响。首先采用PCR方法从产毒大肠杆菌菌株44815基因组中扩增LT的A、B亚基基因,将其插入到pET-20b（＋）原核表达载体pelB信号肽的下游,分别构建成LTA和LTB分泌型表达载体;将载体分别转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,在IPTG的诱导下进行表达,利用Ni-NTA琼脂糖凝胶从细菌周质释放液中提取和纯化重组LTA和LTB蛋白;利用细胞毒性试验检测重组蛋白的生物活性。然后用制备的重组LT注射妊娠6d的小鼠,连续注射3d后,统计小鼠的胚胎存活率。同时用ELISA方法检测小鼠血清中与胚胎稳定性密切相关的Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）及IL-β的表达水平。结果表明,采用分泌性表达策略实现了重组LT在大肠杆菌中的高效分泌表达,LTA和LTB的表达量分别达68、62mg/L。表达的重组LT具有明显的细胞毒性作用;用LT处理妊娠小鼠,胚胎的存活率为32%,明显低于对照组;小鼠血清中Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的含量明显高于对照组（P〈0.01）,分别为对照组的2、3倍。同时细胞因子IL-1β为对照组的2倍（P〈0.01）,而稳定胚胎发育的Th2型细胞因子IL-4、IL-10没有明显变化（P〉0.05）。据此推测,LT可能与大肠杆菌性肠炎引起妊娠家畜流产有关,LT对胚胎稳定性的影响除与LT的直接毒性有关外,可能还与LT介导的免疫调节异常有关。     

补料日龄对哺乳期仔猪小肠黏膜形态的影响

为研究补料日龄对哺乳期仔猪小肠绒毛形态的影响。试验采用单因素完全随机试验设计,选取母猪分娩时间相差在48 h之内、泌乳性能良好、产仔数接近的12窝仔猪,分4个处理组,每组3个重复,分别于仔猪出生后7、10、15日龄和21日龄开始补料。结果表明:28日龄断奶时,7日龄与10日龄补料组仔猪十二指肠、空肠前段和空肠后段部位小肠绒毛高度显著高于其他两组(P<0.05),10日龄补料组回肠部位绒毛高度最高(P<0.05)。7日龄与10日龄补料组仔猪十二指肠、空肠前段隐窝深度显著低于15日龄与21日龄补料组(P<0.05),而空肠后段和回肠部位的隐窝深度以10日龄最低(P<0.05)。除十二指肠外,补料日龄对小肠不同部位肠壁厚度没有显著影响。因此,仔猪出生后10日龄补料对断奶时仔猪小肠绒毛形态影响最小。     

断奶日龄对仔猪血液主动免疫功能的影响

选15窝杜洛克×长白×约克夏三元杂交初生仔猪,按14、21、28、35日龄断奶和不断奶随机分为5组,每组3窝。研究仔猪主动免疫功能的发育及不同断奶日龄对仔猪主动免疫功能的影响。结果表明:哺乳仔猪外周血Et玫瑰花环形成率、淋巴细胞转化率(LTT)随日龄增长而呈线性加大的趋势(P<0.05);断奶应激均使Et、LTT(PHA)、LTT(LPS)降低(P<0.05)。断奶日龄越早,断奶后血液LTT(PHA、LPS)下降的幅度越大,其中14日龄断奶后1～3周、21、28日龄断奶后1周LTT(PHA)显著低于对照组(P<0.05);14日龄断奶后1～4周、21日龄断奶后1～3周、28日龄断奶后1～2周、35日龄断奶后1周LTT(LPS)显著低于对照组(P<0.05)。     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基表达系统的研究进展

正随着分子生物学的快速发展,各种工程菌株的遗传操作体系逐渐完善,蛋白质、酶和多肽制剂等产品的生产制备在满足科研需要的同时,也为生物制剂市场带来了巨大的经济效益~([1])。原核和真核表达系统是使用最广泛和研究最成熟的表达系统,利用原核或真核表达系统获取各种发酵产物开始进入工业化生产阶段~([2])。     

大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的表达及活性研究

利用重叠延伸PCR扩增技术,体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段,酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换。诱导表达产物用SDS-PAGE检测,野生型LT蛋白及3个突变体均表达出约33．0Ku和13．0Ku的2个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量大小相吻合;Westernblot检测,2个蛋白带均可与抗His抗体发生特异性免疫反应,而13．0Ku的蛋白带还可与抗霍乱毒素（cT）抗体发生免疫学反应。ADP-核糖转移酶活性试验分析,各突变体蛋白酶活性均低于野生型LT蛋白,但仍保留一些酶活性。Patent-mouse毒性试验检测,LTK63、LTR72和LTG192突变体蛋白的毒性均有不同程度降低,LTK63毒性降低最显著,TJTG192蛋白毒性相对较大。     

断奶日龄对仔猪抗氧化功能和免疫力的影响

本试验研究了断奶日龄对仔猪抗氧化能力和免疫力的影响。96头杜×长×大三元杂交仔猪按照断奶日龄分为4个组,断奶日龄分别为14、21、28、35天,每组4个重复,每个重复6头猪。试验期从仔猪42日龄到70日龄。在仔猪42日龄和70日龄,每个重复随机选取2头猪采血测血浆抗氧化指数和免疫参数。结果表明,在仔猪42日龄时,14日龄和21日龄断奶组血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著低于28日龄和35日龄断奶组(P0.05),血浆丙二醛(MDA)浓度显著高于28日龄和35日龄断奶组(P0.05),血浆IgG和白细胞介素2(IL-2)的浓度显著低于28日龄和35日龄断奶组(P0.05);到70日龄时,21、28、35日龄断奶仔猪的免疫力无显著差异(P0.05)。总之,断奶日龄越早,仔猪的抗氧化功能和免疫力下降的程度越大,21日龄断奶仔猪随着年龄的增长抗氧化功能和免疫力逐步恢复。     

大肠杆菌不耐热肠毒素LTB大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体的构建及表达

为了获取大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因,试验以产肠毒素大肠杆菌的大质粒为模板,采用PCR技术扩增大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因,并将PCR产物克隆至p MD18-T载体中构建克隆质粒p MD18T-LTB;通过酶切、纯化将LTB基因与大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体p W425et连接构建成重组质粒p W425et-LTB,将p W425et-LTB转化至thy A基因缺陷型大肠杆菌X13感受态细胞中,再进行SDS-PAGE、Western-blot检测。结果表明:重组大肠杆菌表达出LTB蛋白,且表达的融合蛋白能被LTB特异性抗体识别。     

大肠杆菌耐热肠毒素的结构与特性

产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxic Escherichia coli,ETEC)是引起人和动物急性腹泻的常见病原菌,其危害在发展中国家尤其突出.引起腹泻的根本因素是ETEC分泌的耐热肠毒素(Heat-stable enterotoxin,ST)及不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT).现已清楚,ST单独或联合LT即可引起重症腹泻[1].LT是一种分子质量较大的蛋白质,在人源菌株与猪源菌株高度同源,免疫原性好,已研究得比较深入.ST为小分子肽,免疫原性很弱或缺少,对其研究颇受重视.     

大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究

为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。     

断奶日龄对仔猪生长的影响

仔猪的生长受机体神经-内分泌调节中枢的控制,其中下丘脑-垂体-肝脏轴(简称生长轴)对仔猪的生长发育影响最大。目前国内外关于不同断奶日龄对仔猪生长影响的报道较多,结果不尽一致,较为统一的结果显示,断奶日龄显著影响仔猪早期的日增重、日采食量和相对生长速率等生长指标,且断奶日龄越早,这些指标于断奶后下降的幅度越大。至42日龄以后,不同断奶日龄仔猪日增重、日采食量、体重以及相对生长速率等指标均无显著差异。然而,不同断奶日龄影响仔猪早期生长的分子机理目前尚不清楚,开展相关研究对指导不同断奶日龄仔猪确定合理的营养对策、科学确定仔猪断奶时间等均有重大理论意义。     

大肠杆菌热敏肠毒素对猪小肠黏膜微血管内皮细胞活力及细胞因子表达的影响

本试验旨在探究大肠杆菌热敏肠毒素处理(heat labile enterotoxin,LT)后,猪小肠黏膜微血管内皮细胞活力及细胞因子ET-1、IL-1β水平的变化。首先采用D-半乳糖凝胶树脂层析法提取猪E coli LT,利用SDS-PAGE验证蛋白纯度,并用Vero细胞检验提取物的生物学活性,最后采用CCK-8法检测LT对猪小肠黏膜微血管内皮细胞活力的剂量时间效应,ELISA法检测细胞培养上清中ET-1、IL-1β水平的变化。结果表明:所提蛋白为AB_5结构的LT,且具有良好的生物学活性;0.01 mg/L的提取蛋白作用3 h后便可显著降低小肠黏膜微血管内皮细胞的活性(P0.05);作用细胞6 h后,0.01,0.1和10 mg/L LT组细胞培养上清中ET-1的含量显著升高(P0.05),0.01和1 mg/LLT组IL-1β的含量显著升高(P0.05)。结果表明,E coli LT可以显著改变猪小肠黏膜微血管内皮细胞的活力及细胞因子的表达。     

大肠杆菌热敏肠毒素对仔猪病理及生理学指标的影响

本试验旨在构建仔猪产热敏肠毒素大肠杆菌模型和热敏肠毒素模型,观察各组的病变情况,并检测相关生理生化指标和病理指标来进行对比分析。通过产热敏肠毒素大肠杆菌灌胃以及热敏肠毒素腹腔注射的方法建立2种仔猪腹泻模型;观察各组的病变情况,检测仔猪模型生理生化、病理指标。结果显示:2个试验组在试验期间与空白组相比较平均日增重均呈现负增长,白细胞和中性粒细胞数显著升高(P0.05),淋巴细胞数显著降低(P0.05);剖检可见肺实变严重,肠系膜淋巴结肿胀,肠腔积液;病理组织学检查发现,各试验组小肠肠壁变薄,肠绒毛脱落变短,杯状细胞增多;免疫组化结果显示,空肠组织中有热敏肠毒素存在。试验结果对比分析表明,毒素组与细菌组具有相似的症状表现与指标类型;热敏肠毒素可能为产热敏肠毒素大肠杆菌病的直接致病因子。     

感染产肠毒素大肠杆菌的猪小肠上皮细胞microRNA表达谱分析

试验旨在探索产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）诱导的microRNA （miRNA）表达谱变化,为解析宿主miRNA在ETEC感染过程中的调控作用提供理论基础。利用Illumina 6000 Novoseq SE50测序平台分别对ETEC感染前后的IPEC-J2进行高通量测序,用Bowtie与参考基因组比对,用DESeq R Package进行miRNA差异性分析。通过miRanda和RNAhybid共同预测差异表达miRNA的靶基因,对差异表达miRNA靶基因进行GO功能和KEGG通路分析。随机选取5个miRNAs,对测序结果进行实时荧光定量PCR验证。结果显示,IPEC-J2在感染前后的sRNA文库经过滤分别得到12 889 260和11 203 056条clean reads。感染前后文库中,miRNA所占比例最高,分别为73.16%和54.10%;分别有97.98%和69.83%长度为18~40 nt的sRNA可比对到参考基因组,表明测序质控良好。长度在22~24 nt的序列大部分首位碱基偏向U,2~8位点出现频率最高的碱基分别为AGCUUAU。共发现311个已知miRNAs,128个新miRNAs。在2个文库中,长度为23 nt的miRNA序列占比最高,分别为41.42%和23.56%。感染后共筛选到140个差异表达miRNAs,其中74个表达上调,66个表达下调。GO分析表明,miRNA靶基因显著富集于代谢过程、正向调节代谢过程、细胞成分或生物合成、免疫系统、细胞内部分和细胞器等功能。KEGG分析表明,差异表达miRNA靶基因显著富集于赖氨酸降解、生产IgA的肠道免疫网络、NF-κB信号通路和T细胞受体信号通路等。实时荧光定量PCR验证结果表明,随机选取的5个miRNAs表达趋势与测序结果一致,表明测序准确可靠。综上所述,IPEC-J2的miRNAs参与了ETEC感染过程,为进一步揭示调控ETEC感染的关键miRNA及其作用机制提供科学依据。     

断奶日龄对仔猪60日龄体重及母猪产仔影响

仔猪早期断奶技术在现代化养猪场已普遍采用，为探讨仔猪早期断奶对仔猪的育成率、60日龄体重及母猪下窝的繁殖性能的影响问题。笔者于1996年4～12月在福州市鼓二副食品开发公司猪场进行了探索试验。1试验分组：取50头经产长大杂一代母猪及所产仔猪，随机分为2组，每组25头。甲组28日龄断奶，乙组35日龄断奶。2饲养管理：2组母猪和仔猪给予相同的饲养管理条件，并作详细记录及统计处理。3试验结果：3．160日龄育成率和体重：甲、乙2组仔猪60日龄的育成率为90．55％和90．08％，体重为17．10kg和1788kg，经统计无差异显著（Pwto．os）。3．2…     

大肠杆菌不耐热肠毒素培养方法的研究

用兔肠结扎法、蓝斑法和琼脂扩散试验测定静置浅层、静置深层、振荡浅层和振荡深层培养获得的大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的滴度,证明静置浅层培养所获得的滴度比后三者高1～7倍,静置法比振荡法在生产上更容易推广。