屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌（Hps）的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象观察、生化试验和分离菌核酸片段序列分析,纯化获得Hps分离菌;用药敏纸片法分析Hps分离菌株对常用药物的敏感性。结果显示,从80份病变肺脏中检出39份Hps阳性,阳性率48.75%（39/80）;从39份Hps阳性肺脏中分离获得3株疑似Hps,分离菌在显微镜下呈革兰氏阴性、短杆状;在添加有胎牛血清和NAD的TSA平板上生长良好;在金黄色葡萄球菌周围呈现出典型的"卫星现象"生长;能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖和阿拉伯糖,不发酵甘露醇;PCR扩增序列与Hps同源性在98%以上。药物敏感性试验结果显示,3株分离菌对环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考等抗菌药物高度敏感,对青霉素、林可霉素和甲氧苄啶等抗菌药物耐药。本研究获得的Hps分离株为疫苗研制提供了基础材料,为生猪养殖场选择敏感药物防控Hps感染提供了参考依据。     

2020—2021年河北省部分地区副猪嗜血杆菌流行情况调查及耐药性分析

为调查河北省部分地区副猪嗜血杆菌（Hps）流行情况,研究于2020—2021年从河北邢台及周边地区采集疑似副猪嗜血杆菌病感染组织样品共2 844份,采用荧光定量PCR法检测样品Hps感染率;对部分阳性样品进行平板划线法,其后对分离菌株耐药性进行分析。结果表明,共887份样品检测为Hps核酸阳性,平均阳性率为31.19%(887/2 844);共分离获得34株Hps。药敏试验结果表明,大部分菌株对头孢曲松、氟苯尼考、米诺沙星和头孢噻肟等抗菌药敏感,但对卡那霉素和复方新诺明等存在较高的耐药性。以上研究结果提示：当前河北省猪场副猪嗜血杆菌流行情况较为严重,且血清型复杂,应引起足够重视。     

湖南湘潭县及周边地区屠宰生猪副猪嗜血杆菌流行情况调查与药敏试验

为分析湘潭县健康猪群副猪嗜血杆菌(Hps)隐性感染情况,研究于2019年4—9月对湘潭县某生猪屠宰场采集的120份病变肺脏进行细菌分离,对疑似Hps进行血清型鉴定并进行药敏试验。结果发现,共在27份肺脏样品中分离得到Hps,分离率为22.5%,其中分离血清型4型、5型、1型和不可分型菌株所占比例分别为40.74%(11株)、25.92%(7株)、18.52%(5株)和14.81%(4株),分型菌株占85.19%(23株);27株流行菌株对头孢噻呋、头孢噻肟和诺氟沙星等高敏,对庆大霉素和四环素中度敏感,对青霉素、卡那霉素和复方新诺明耐药。     

家养野猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

对江西省某家养野猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis,Hps）感染的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16SrRNA并进行测序分析,并对分离菌进行细菌形态、生化鉴定和PCR鉴定及序列比对分析。结果显示,获得1株家养野猪源Hps分离株（命名为HPJXYZ01）,该分离株与国内外参考菌株序列之闻的同源性为93．1％～99．2％,与本实验室江西省家猪源分离株的同源性为84％～92．1％。结果表明,江西省家养野猪中存在Hps感染,分离株与国内外家猪源Hps间的16SrRNA序列差异不大,Hps16SrRNA核苷酸序列比较稳定,其进化不存在明显的地域相关性。     

天津地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选

为了给天津地区各区县养猪场提供副猪嗜血杆菌病的科学防控及合理的治疗用药方案,本试验对天津地区各区县养猪场疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪进行了解剖及病理变化观察,无菌采集36份各猪场病猪组织脏器并进行细菌分离,对分离菌进行染色镜检、卫星试验、接触酶反应试验、微量生化反应和PCR鉴定。结果显示,剖检结果以纤维素性胸膜炎及腹膜炎常见,关节腔切面内有大量黄亮黏稠液体;分离出了9株疑似副猪嗜血杆菌菌株,染色镜检均可见革兰氏阴性多形态菌;分离菌有明显的卫星现象;接触酶反应试验均为阳性;微量生化反应D-核糖、山梨醇、果糖、阿拉伯糖和硫化氢均为阴性,麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇和脲酶均为阳性,山梨糖和木糖各有1株为阳性,5株菌β-半乳糖为阳性;PCR鉴定结果显示9株疑似副猪嗜血杆菌菌株在822 bp处均与阳性对照处于同一条带上,均判定为副猪嗜血杆菌,分离率达25%。用16种抗菌药物对9株副猪嗜血杆菌进行敏感药物筛选,药敏结果显示头孢曲松钠和氧氟沙星对分离株有良好的抑菌效果。本试验结果可为天津地区副猪嗜血杆菌病的科学防制提供依据。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定

副猪嗜血杆菌(Hps)为猪呼吸道疾病综合征(PRDC)的重要病原之一。在对广西65个猪场281份病猪组织样品进行PRDC病原学调查的基础上,对PCR检测的Hps阳性样品进行了细菌分离,并进行了生化特性、药敏试验、16 S RNA基因片段序列分析和基因组DNA的PCR指纹图谱分析。结果显示,11份(3.91%)检测样品为Hps阳性,且均为混合感染;从南宁市四塘、桂林市永福、玉林市容县和钦州市浦北分离出5株Hps,分离菌株的生化鉴定结果均符合Hps生化特性,且对头孢噻呋和头孢菌素高度敏感;其中3株为血清5型,1株为血清12型,另1株未能定型;分离菌株16 S RNA基因片段之间及与GenBank其他一些代表菌株的核苷酸同源性在99%以上。     

某蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为了解某蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌对抗菌药物的耐药情况,采集重庆市某蛋鸡场48份羽毛样品、123份肛拭子样品,将羽毛样品经MH高盐培养液增菌后划线接种于MH高盐平板,将肛拭子样品经沙门菌增菌液增菌后划线接种于S.S.平板。将疑似菌落接种LB液体培养基培养后提取基因组,PCR扩增金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和沙门菌特异性invA基因片段。对分离鉴定的金黄色葡萄球菌和沙门菌进行药物敏感性试验。最终共分离鉴定出9株金黄色葡萄球菌、6株沙门菌。药敏试验结果表明,分离的金黄色葡萄球菌和沙门菌耐药严重,且存在多重耐药。本研究基本摸清了该蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌对常见抗菌药物的敏感性,为该蛋鸡场的临床用药提供了参考。     

牦牛源溶血致病性表皮葡萄球菌的分离鉴定及药敏分析

对1株分离自西藏那曲地区养殖场有出血性症状牦牛的致病性菌进行分子鉴定及药敏分析,为西藏地区牦牛出血性疾病提供治疗依据。通过对病死牦牛肺脏、肝脏进行细菌分离纯化获得疑似菌株,对所得疑似菌株进行形态学观察与哥伦比亚血平板试验筛选出疑似致病菌株,再对疑似致病菌株进行生理生化鉴定试验、16S rDNA通用引物检测及测序、同源性比对,后经药敏试验得到该疑似致病菌株的敏感药物,最后通过动物回归试验验证其敏感药物的治疗效果。结果表明,通过对病死牦牛肺脏、肝脏分离纯化获得6株疑似菌株,经形态学观察试验、哥伦比亚血平板试验筛选出1株具有溶血性的革兰氏阳性球菌S-4。经生理生化鉴定试验、16S rDNA测序、同源性比对,鉴定S-4菌株为表皮葡萄球菌;药敏试验结果显示,S-4菌株对恩诺沙星、新霉素、多黏菌素B、卡那霉素、环丙沙星敏感,对氟苯尼考、多西环素中介敏感,对链霉素、红霉素、四环素、青霉素、头孢氨苄耐受;动物回归试验显示,该菌株具有致病性,且恩诺沙星、新霉素、卡那霉素3种药物治疗效果良好,多黏菌素B、环丙沙星治疗效果差。本试验获得1株具有致病性的牦牛源表皮葡萄球菌,该致病菌在养殖过程中可使用恩诺沙星、新霉素、卡那霉素3种药物进行治疗。     

屠宰生猪肺脏健康状况评估及主要病原的检测

肺部感染引发的不同程度的肺脏病变在屠宰生猪的宰后检验中常有发现。本试验对某规模化生猪养殖企业屠宰生猪连续10周采集肺脏,每次取约300份肺脏,共3 000份肺脏进行健康评价,并每次选择8份病变肺脏(共80份)进行猪呼吸道疾病常见病原的核酸检测,通过分析可能引起屠宰生猪肺部感染的病原,以期为生猪的疾病防控、动物产品安全评估提供基础资料和参考。结果显示,3 000份肺脏中评估为健康的有1 822份,占60.7%(1 822/3 000);病变肺脏有1 178份,占39.3%(1 178/3 000);病变类型主要为炎症、肉变。80份病变肺脏中猪圆环病毒2型(PCV2)核酸阳性有16份,副猪嗜血杆菌(HPS)阳性有39份,猪链球菌(SS)阳性有36份,猪肺炎支原体(Mhp)阳性有4份;PCV2与Mhp、HPS、SS混合阳性率分别占到PCV2阳性数量的12.5%、56.25%、81.25%;未检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、巴氏杆菌(Pm)和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)等病原。本次评估结果表明,屠宰生猪肺脏病变比例较高,引起肺脏发生病变的呼吸道病原主要为HPS、SS、Mhp和PCV2,且以和PCV2的混合感染居多。     

重庆市荣昌区动物源沙门菌的检测与耐药性分析

为了了解重庆市荣昌区畜禽源沙门菌的流行特征和耐药情况,从荣昌区的一家规模化生猪养殖场和一家肉鹅养殖场分别采集动物粪便样品80份和30份,样品经过前增菌、选择性增菌、平板划线接种、挑取可疑菌落革兰氏染色并扩增沙门菌特异性基因invA,从而鉴定沙门菌分离株。对沙门菌分离株进行血清型分型和药物敏感性试验。试验结果显示,110份样品中共分离到8株沙门菌,其中猪源沙门菌6株,鹅源沙门菌2株。沙门菌血清型鉴定表明,8株沙门菌中有5株为鼠伤寒沙门菌,1株为乙型副伤寒沙门菌,1株为圣保罗沙门菌,1株沙门菌尚不能判断。药敏试验表明,沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的耐药现象最为严重,其次为酰胺醇类、青霉素类和氨基糖苷类。8株沙门菌分离株菌均为多重耐药菌株,尤其需要注意的是,分别有1株鹅源和猪源沙门菌对16种和17种抗菌药物产生耐药,多重耐药现象严重。     

猪源金黄色葡萄球菌分离鉴定及16srRNA基因遗传进化分析

从湖南省养猪场采集猪拭子和肺脏300份进行金黄色葡萄球菌(S.aureus)分离.用生化试验和PCR进行鉴定;选择5株分离菌进行遗传进化分析.结果显示,所有分离株触酶试验、糖发酵试验、VP试验、溶血试验和耐热核酸酶试验均为阳性.92.3%的分离株血浆凝固酶试验为阳性.PCR鉴定均为阳性.分离株16s rRNA和nuc部分基因片段与Genbank公开的相关序列相似性分别为98.0%以上和99.0%以上.5株分离株与S.aureus GHA10等处于同一进化分支.S.aureus分离率21.67%.肺脏、拭子、母猪和仔猪分离率分别是21.52%、21.79%、19.71%和23.41%.本研究结果对湖南地区S.aure-us致病性、耐药性和耐药机制的研究提供了素材.     

牛源羊创伤球菌的分离鉴定

本实验从重庆某肉牛场肺炎患牛肺脏中分离一株革兰氏阳性双球菌,为进一步确定该菌株的分类地位,本研究对其进行细菌学分类鉴定。通过细菌培养特性、菌落形态观察、生化试验和PCR鉴定等研究表明,该分离菌与羊创伤球菌(H.ovis)(CCUG37441)特性相近;其16S rRNA序列与H.ovis标准株同源性达99.8%。药物敏感性试验和动物试验表明,该菌对菌必治最敏感,不致死小白鼠。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其OmpP5基因序列分析

为研究辽宁省副猪嗜血杆菌(Hps)OmpP5基因的遗传变异规律,从辽宁省阜新市某猪场疑似患有副猪嗜血杆菌病的患猪肺部采取组织病料进行细菌分离,通过革兰染色、生化鉴定、卫星现象及Hps 16S rRNA PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌。根据已发表的Hps OmpP5基因设计1对特异性引物,对分离株OmpP5基因进行扩增、克隆及测序,得到长度为1 116bp的OmpP5基因序列。将该序列与已发表Hps参考株的OmpP5基因进行同源性比对及系统发育树分析,发现核苷酸同源性为89.8%~99.5%,分离株与参考菌株№4在同一分支,表明OmpP5基因具有一定的保守性,分离株和№4亲缘关系较近。研究结果为阐明辽宁省Hps毒力基因及致病机理提供了参考依据。     

新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析

【目的】确定引起新疆石河子地区集约化牛场常发性肺炎的主要病原同时进行病原的体外药物敏感性分析。【方法】采集有典型咳嗽、流涕症状的牛鼻拭子10份和病死牛肺脏组织1份,用牛支原体特异性引物进行PCR检测,将检测为阳性的样本进行病原培养纯化,对纯化后的分离株菌落进行形态学观察、Dienes染色、生化试验及16S rRNA测序和进化分析,通过测定颜色变化单位(CCU)测定分离株生长曲线,并对分离株进行药物敏感性试验。【结果】PCR结果显示,10份鼻拭子中检测出7份牛支原体阳性样本,1份病死牛肺脏组织也检测为阳性;在涂有肺脏组织研磨液培养液的PPLO固体培养基上长出针尖状的菌落,纯化后分离株菌落形态为典型的煎蛋状;Dienes染色可见明显的深蓝色中心脐;生化试验结果显示,分离株不水解明胶、精氨酸、七叶苷,不发酵乳糖、葡萄糖和甘露醇,不分解尿素,可还原氯化三苯基四氮唑;16S rRNA测序结果显示,分离株与牛支原体国际标准株PG45相似性为99.7%,与国内牛支原体地方流行株XBY01、Ningxia-1、NM2012、Tibet-10的相似性最高,均为99.9%;生长曲线测定结果显示,分离株在培...     

2020年广东肇庆地区鹅细小病毒VP1基因遗传进化分析

2019～2020年从广东肇庆地区的部份鹅场中收集到12份疑似小鹅瘟病例,对疑似小鹅瘟病例进行病原核酸鉴定,对阳性病例进行病毒分离和VP1基因的序列扩增和遗传进化分析.结果表明,12份疑似小鹅瘟病例中,共检测到7份阳性样品,阳性检测率为58.3％.从阳性病例样本中分离获得7株小鹅瘟病毒毒株,其中1株与Ⅰa亚群毒株核苷酸...     

猪肺炎支原体JM株的分离鉴定及主要抗原蛋白基因序列分析

为了对从广东地区若干个屠宰场采集的164份疑似猪肺炎支原体感染的猪肺脏组织进行猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MHp)的分离鉴定,并了解其主要抗原蛋白基因的遗传变异特点,试验先对采集的肺脏组织进行16S rRNA基因PCR检测,阳性样本进行病原的分离培养、形态学观察、双重PCR鉴定、分离株主要抗原蛋白膜蛋白P46全基因与黏附蛋白P97基因R1R2区序列分析及效价的测定。结果表明：164份临床样本经16S rRNA鉴定后102份为MHp阳性,阳性率为62.2%;阳性样本接种江苏二号(KM₂)液体培养基生长良好,颜色呈规律性变黄,在固体培养基上均能呈现特异性菌落形态;各代次分离菌株经16S rRNA双重PCR鉴定均能获得3个大小约1 000 bp的目的条带,测序结果与国内外MHp各参考株核苷酸相似性为96.42%～98.21%,说明3株分离株均属于MHp,且可稳定遗传,分别命名为JM-24、JM-39、JM-44,分离株生长效价可达1×10^5.67 CCU/mL;3株分离株主要抗原蛋白P46全基因和P97基因R1R...     

副猪嗜血杆菌病原的分离鉴定与药敏试验

从数例疑似副猪嗜血杆菌病患病猪的肺脏和腹膜中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,经生化试验和PCR鉴定,确定分离的2株菌为副猪嗜血杆菌.药敏试验结果表明,分离株对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星,以及头孢菌素、四环素和庆大霉素等药物敏感,对红霉素、壮观霉素和洁霉素有抵抗力.     

副猪嗜血杆菌四川株生物学特性及药物敏感性研究

为了解副猪嗜血杆菌四川分离株的生物学特性及耐药性情况,本研究采用微生物及分子生物学技术对副猪嗜血杆菌(Hps)四川分离株从生物学特性、16S rRNA基因PCR扩增和耐药性方面进行了研究.结果显示,Hps四川分离株具有一定的微厌氧性,能产生"卫星现象",分离株与其他地区分离株生化特性基本一致;所有分离株均扩增出821 bp的特异性16S rRNA基因片段.药物敏感性试验结果显示,分离株对头孢拉定、氨苄西林、头孢氨苄、阿莫西林、头孢克洛、氧氟沙星、头孢噻肟、呋喃妥因具有较高的敏感性,敏感率为75.61%~87.80%;对林可霉素、羧苄青霉素、恩诺沙星、阿米卡星、磺胺甲唑均表现出较高的耐药性,且多重耐药严重,5~8种耐药占比最多,为21.95%~30.49%,有7株可耐受多达13种药物.结果表明,Hps四川分离株存在严重的耐药性现象.     

3株松鼠葡萄球菌的鉴定及耐药性分析

为了对从2017年送检的3个病例中分离得到的病料进行病原菌鉴定,试验采用细菌分离、纯化、生化鉴定及16S rDNA基因PCR扩增与序列分析法进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验。结果表明:共分离得到3株分离菌,分别命名为J1、J2、J3株,3株分离菌均能发酵蔗糖和麦芽糖,产酸,不能发酵甘露醇和乳糖;PCR扩增分离菌,得到500 bp的目的条带,与NCBI中已知序列进行比对,均为松鼠葡萄球菌(同源性达99%);3株松鼠葡萄球菌对多西环素、阿莫西林、环丙沙星等药物敏感。说明3株分离菌为松鼠葡萄球菌,其对药物有不同程度的敏感性。     

1株鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 阐明青海省大通县某鸡场病鸡发病原因,为奇异变形杆菌病防控提供参考。[方法] 无菌采集病鸡肝脏、脾脏和泄殖腔拭子等样品,接种普通琼脂和SS琼脂平板进行细菌分离纯化培养,挑取平板上生长的疑似菌落进行革兰染色镜检,再将分离的菌落接种生化鉴定管进行生化鉴定,同时通过PCR扩增16S rDNA和tuf特异性基因并测序。将分离菌接种雏鸡进行致病性试验,采用K-B法评价分离菌对27种抗菌药物的敏感性。[结果] 分离菌为短杆、长杆状多形性杆菌,生化特性与奇异变形杆菌相符。PCR成功扩增出1 400 bp的16S rDNA,序列比对显示与奇异变形杆菌同源性最高,为99.9%。雏鸡致病性试验结果表明,该株奇异变形杆菌对雏鸡有致病性。药敏试验结果显示,该菌株对哌拉西林、头孢吡肟和头孢噻肟等高度敏感,对环丙沙星、奥格门汀中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林和头孢唑啉有耐药性,提示该菌对头孢类药物高度敏感。[结论] 分离到的一株奇异变形杆菌对鸡具有较强的致病性,且对多种药物表现出耐药性。