利福昔明子宫注入剂稳定性及其对家兔阴道黏膜刺激性研究

为研究利福昔明子宫注入剂的稳定性,从而初步确定其保质期,本试验取3批利福昔明子宫注入剂进行稳定性试验考察,包括影响因素、高温加速及长期稳定性,利用高效液相色谱法测定试验过程中利福昔明含量及有关物质的含量,从而初步确定利福昔明子宫注入剂的保质期。根据相关技术指导原则对家兔进行阴道刺激性试验。稳定性试验结果表明,根据面积归一化法计算有关物质的含量均不超过3%,注入剂的性状、沉降、粒度未发生明显变化,主成分利福昔明的含量变化在拟定标示量90.0%~110.0%范围内,从而确定本品的有效期为2年。家兔阴道刺激性试验结果显示,利福昔明子宫注入剂给药部位（阴道）和生理盐水对照组给药部位都没有出现红斑和水肿,刺激强度的评分为0;试验组和对照组的阴道黏膜没有出现明显的充血、水肿及异常分泌物流出的现象,阴道黏膜刺激指数为0.25。因此,利福昔明子宫注入剂对家兔的阴道无刺激性。本品的临床安全性良好,可进一步推广使用。     

利福昔明子宫注入剂对奶牛产奶量的影响

利福昔明是一种治疗奶牛疾病的新药,抗菌谱广,抗菌活性强,抗菌机制独特,无致突变、致畸、致癌及生殖毒性等作用,适合作为局部用药。笔者选取12头健康奶牛,将1支利福昔明子宫注入剂通过输精管缓缓注入子宫内,观察奶牛产奶量及直肠温度变化。结果显示,用药后1 d~3 d,奶牛产奶量明显下降,5 d~10 d后趋于平稳。     

齐利宁——利福昔明乳房注入剂

正1 研发背景奶牛乳房炎是奶牛场防治难度较大的一种常见性疾病,严重影响奶牛养殖业的发展,是困扰奶业经济效益及迅速发展的的主要制约因素。奶牛干奶期是防控乳房炎的最佳时期,可以有效防治干奶期间以及上一个泌乳期所遗留下来的感染,并且能够显著降低下一个泌乳期乳房炎的发病率,对受损的乳腺组织有机会在下一个泌乳期到来之前得到较好的修复。国内目前用于干奶期奶牛乳房炎防治的药物主要以青霉素类抗生素为主,但随着近十年来国内奶牛乳房     

利福昔明子宫注入剂含量测定及方法耐用性试验研究

建立了利福昔明子宫注入剂HPLC含量测定方法,并对色谱测定条件进行了不同检测波长、流速及柱温等条件的耐用性研究。乙腈提取,超声离心后,经流动相稀释上机检测。结果显示,研究建立的利福昔明子宫注入剂含量测定方法在40~150μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9995),检测限(LOD)为0.25μg/mL,定量限(LOQ)为0.6μg/mL。以80、100、120μg/mL三个浓度水平进行添加回收,回收率在98.26%~101.12%之间,日内变异系数在0.17%~1.13%之间,日间变异系数0.73%。耐用性研究表明,在测试范围内,检测波长、流速、柱温对含量测定无明显影响(RSD2.0%)。三批制剂样品经测定后,含量分别为102.0%、99.8%、100.6%。本研究建立的利福昔明子宫注入剂含量方法操作简便、方法可靠,可用作该制剂的质量控制。     

利福昔明乳房注入剂对小鼠的急性毒性试验

为评估利福昔明乳房注入剂的急性毒性,采用标准的急性毒性试验方法进行了利福昔明乳房注入剂对小鼠的急性毒性试验。结果表明,最高组剂量达到5 000 mg/（kg·BW）时,小鼠未见不良反应,饮食活动正常,观察期内均未出现死亡,即利福昔明乳房注入剂对小鼠经口灌胃的LD50大于5 000 mg/（kg·BW）,属于实际无毒级物质。     

利福昔明对家兔肠道菌群的影响

本试验将利福昔明按25、50、100 mg/kg 3个剂量组分别给40日龄家兔口服,连续用药3 d,并于首次用药后第4、7、10 d剖杀家兔,取盲肠和回肠内容物进行乳酸杆菌和大肠杆菌的选择性培养并计数,以此评价利福昔明对家兔肠道菌群数量的影响。结果显示：与对照组相比,利福昔明高、中、低剂量组的肠道大肠杆菌菌群数量减少,其中高剂量组（100 mg/kg）在首次用药后第7、10 d,对家兔回肠大肠杆菌的影响显著;与空白对照组相比,利福昔明高、中、低剂量组的肠道乳酸杆菌数量变化不显著。     

利福昔明对家兔肠道菌群的影响

本实验就利福昔明对家兔肠道菌群的影响进行了研究。将利福昔明按25、50、100mg,kg三个剂量组分别给40日龄家兔口服,连续用药3d,并于首次用药后第4、7、10d剖杀家兔,取盲肠和回肠内容物进行乳酸杆菌和大肠杆菌的选择性培养并计数,以此评价利福昔明对家兔肠道菌群数量的影响。结果显示：利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的大肠杆菌菌群数目与空白对照组相比数量减少,其中,高剂量组（100mg,k曲在首次用药后第7、10d对家兔回肠大肠杆菌影响差异显著（P〈0．05）。利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的乳酸杆菌与空白对照组相比差异不显著（P〈0．05）。     

利福昔明对家兔肠道菌群的影响

将利福昔明按25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg 3个剂量组分别给40日龄家兔口服,连续用药3d,并于首次用药后第4、7、10天剖杀家兔,取盲肠和回肠内容物进行乳酸杆菌和大肠杆菌的选择性培养并计数,以此评价利福昔明对家兔肠道菌群数量的影响.结果显示：利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的大肠杆菌菌群数目与空白对照组相比数量减少,其中,高剂量组剂量组（100 mg/kg）在首次用药后第7、10天对家兔回肠大肠杆菌影响差异显著.利福昔明高、中、低剂量组对回肠和盲肠的乳酸杆菌与空白对照组相比差异不显著.     

利福昔明乳房注入剂(干乳期)对奶牛的安全性研究

研究利福昔明乳房注入剂(干乳期)对健康奶牛的正常体温、日产奶量、奶中体细胞数和乳房内菌群的影响。选择健康泌乳期奶牛12头,给药前1 d和给药前0 d,统计记录各试验奶牛的直肠温度、日产奶量,检测每个乳区采集奶样的体细胞数,并对给药前0 d的奶样进行病原菌分离检测。每头入选奶牛的四个乳区分别单次灌注利福昔明乳房注入剂,在给药后的第1、3、5、7、10天分别记录每头奶牛的日产奶量;在给药后的第12小时、3、5、7、10天分别采集奶样进行体细胞检测,同时检查直肠温度;在给药后的第10天对采集的奶样进行病原菌检测。比较奶牛用药前后直肠温度、日产奶量、奶中体细胞数和病原菌的变化。试验期间对给药奶牛进行连续观察,记录奶牛是否出现红、肿、热、痛等临床症状。结果表明。给药前1 d、给药当天和最后一次给药后的第1、3、5、7、10天,试验奶牛的日产奶量平均值分别为30.5、30.3、29.8、30.3、30.0、30.9和31.0 kg,相互之间无显著性差异(P>0.05);给药前后各时间点采集的奶中体细胞数大都维持在30~50万/mL;给药前后各时间点测得的奶牛直肠温度无显著性差异(P>0.05);病原菌检测结果显示,在给药前0 d分离到7株大肠杆菌、6株链球菌和9株葡萄球菌,给药后第10天采集的奶样中未检测到大肠杆菌和葡萄球菌,仅检测到1株链球菌。与给药前相比,奶中的病原菌数量有所减少,无新增感染。利福昔明乳房注入剂(干乳期)对奶牛正常体温、产奶量、奶中体细胞数无不良影响,该制剂对于奶牛是安全的。     

奶牛用利福昔明子宫注入剂有关物质反相高效液相色谱检测方法的建立及应用

本试验旨在建立利福昔明有关物质的检测方法。采用反相高效液相色谱法,紫外检测器进行检测,采用WondaSil C18-WR 250 mm×4.6 mm 5 μm色谱柱,柱温:40 ℃,流动相及其比例为:V（甲醇） ∶V（乙腈）∶V（3.16 g/L甲酸铵,浓氨水调pH至7.2）=31.5∶31.5∶37,检测波长276 nm。采用面积归一化法计算利福昔明子宫注入剂的检测限、定量限及其浓度;考察了方法精密度、线性相关性及有关物质专属性,并通过极端条件的破坏、有关物质的含量、分离度等对主成分峰面积降解程度进行了比较。利福昔明子宫注入剂主成分峰在浓度为40~150 μg/mL的范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性关系（R²=0.9998）,其有关物质浓度对峰面积线性回归方程为y=23 510x+7 182,其进样精密度RSD为0.13%,方法精密度RSD为0.46%,制剂一定时间内经过强酸、强碱、氧化、高温条件破坏后均有不同程度降解,以破坏前的样品主成分含量为100.00%,氧化破坏和高温破坏主成分降解达13%,酸、碱破坏主成分降解在18%左右,主成分峰保留时间在以上4种条件破坏前后一致,且主成分峰与杂质峰之间及杂质峰与杂质峰之间分离度良好（主成分峰与杂质峰之间分离度均大于1.5,杂质峰与杂质峰之间分离度均大于1.2）。本试验建立的利福昔明子宫注入剂有关物质检测方法操作简便,专属性和重复性好,可适用于利福昔明子宫注入剂有关物质的测定。     

利福昔明乳房注入剂对干奶期奶牛临床型乳房炎预防效果观察

本试验旨在观察利福昔明乳房注入剂对干奶期奶牛临床性乳房炎的预防效果.选择非临床型乳房炎的泌乳末期健康奶牛共计75头,随机分为空白对照组(不给药对照组),苄星氯唑西林乳房注入剂对照组(600 mg/乳区),利福昔明高(400 mg/乳区)、中(200 mg/乳区)、低(100 mg/乳区)三个剂量组,每组15头.分别在干乳期、泌乳期进行乳房观察,并采用致病菌的分离培养和乳汁中体细胞计数检测临床型乳房炎发生情况.结果表明,利福昔明低剂量组保护率与空白对照组保护率相比差异显著(P＜0.05),苄星氯唑西林对照组、利福昔明中剂量组、高剂量组对干奶期奶牛临床型乳房炎的预防效果与空白对照组相比,差异极显著(P＜0.01);利福昔明高、中剂量组与苄星氯唑西林对照组之间的预防效果差异不显著(P＞0.05).结果提示,利福昔明乳房注入剂对临床型奶牛乳房炎有较好的预防效果,可以作为预防类药物用于奶牛生产中,降低奶牛乳房炎的发生率.     

牛奶中利福昔明残留消除规律研究

为研究新型奶牛干乳期乳房注入剂利福昔明在牛奶中的残留消除规律,在常规饲养条件下,选择处于干乳期的12头健康奶牛分为2组(每组6头),在预产期前60天,按推荐剂量(100mg)及2倍推荐剂量(200mg)两种剂量通过乳房注入方式给药,在产犊泌乳后的12、24、36、48、60和72h共6个时间点采集奶样,用超高效液相色谱-串联质谱法检测。液相条件：色谱柱为BEH C18(50?2.1mm,1.7μm),0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。质谱条件：ESI＋离子源,MRM方式采集。结果表明：推荐剂量组12h时6头奶牛有2头检出利福昔明,残留量分别为2.84和4.50μg/kg;24h时已全部检不出药物。2倍推荐剂量组12h时6头奶牛均检出利福昔明,残留量仅在1.56~10.2μg/kg之间,24h时有2头检出,残留量分别为1.41和1.28μg/kg,36h时全部检不出药物。两组检出的残留量均远低于欧盟规定的牛奶中最高残留限量60μg/kg。因此,实验用12头干乳期奶牛使用利福昔明乳房注入剂后在产犊泌乳时牛奶中的休药期均为零。     

利福昔明对奶牛子宫内膜炎常见病原菌的体外抗菌活性评价

旨在测定利福昔明对奶牛子宫内膜炎主要病原菌抗菌活性,为评价防治子宫炎疗效提供体外依据。采用微量肉汤稀释法,测定利福昔明对河南3个牛场60头患子宫内膜炎奶牛子宫液分离的主要病原菌的最小抑菌浓度(MIC),与临床常用的土霉素进行对比。结果,利福昔明对葡萄球菌的MIC在0.015~32μg/m L之间,对链球菌的MIC在0.015~16μg/m L之间,对大肠杆菌的MIC为2~32μg/m L之间,对化脓隐秘杆菌的MIC在0.25~4μg/m L之间,对其他细菌的MIC50和MIC90均为16μg/m L。土霉素对葡萄球菌的MIC在1~64μg/m L之间,对链球菌的MIC为0.5~64μg/m L,对大肠杆菌的MIC为2~8μg/m L;对化脓隐秘杆菌MIC为0.5~8μg/m L,对其他细菌的MIC为4~64μg/m L。结果表明,利福昔明对奶牛子宫内膜炎的主要病原菌有较强抗菌活性,对革兰阳性菌的抗菌作用优于革兰阴性菌,且对大部分病原菌的抗菌活性优于土霉素。     

利福昔明的药理作用及其在奶牛疾病防治中应用的研究进展

利福昔明是一种治疗奶牛疾病的新药,抗菌谱广,抗菌活性强,抗菌机制独特,无致突变、致畸、致癌及生殖毒性等,适合作为局部用药。作者综述了利福昔明的研究现状,并对其理化性质、作用机制、药动学、药理毒理学性质及在临床疾病防治中的应用进行了描述,为利福昔明在动物临床疾病防治应用方面提供理论依据,以便兽医工作者全面了解该药,进而指导其临床应用。     

利福昔明与精油对乳房炎源大肠杆菌抗菌效果评价

旨在研究利福昔明(RIF)与3种精油,即桉叶油(EEO)、薄荷油(MEO)、鱼腥草油(HEO)对奶牛乳房炎源大肠杆菌的抑杀作用和对生物被膜的阻抑效果。自患乳房炎奶牛乳汁中分离47株大肠杆菌,微量肉汤稀释法测定RIF、精油对菌株的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),棋盘法测定RIF与精油的联合抑菌指数(FICI)。结晶紫染色法检测生物被膜形成量,评价菌株形成生物被膜的能力,测定RIF、精油的最小抑膜浓度(MBIC),考察二者抑制被膜形成和消除预制被膜的效果。结果:RIF、EEO、MEO和HEO对大肠杆菌的MIC_(90)分别为32μg/mL、2.5%、0.31%和0.63%。RIF与精油联合对多数菌株表现相加作用,其中RIF+EEO对80%的菌株表现相加作用。RIF、精油对84%以上菌株的MBIC/MIC为1～4,其中EEO对74%以上菌株该比值为1～2。1/2 MIC RIF或1/2 MIC EEO处理可使5株强成膜株的生物被膜形成率最低降至43.8%和5.8%,使其中4株菌的预制被膜留存率最低降至56.6%和44.8%。与RIF、EEO单独处理相比,1/2 MIC RIF+1/4 MIC～1/2 MIC EEO处理后5株强成膜菌被膜形成率和预制被膜留存率均显著降低(P0.05)。RIF和3种精油对乳房炎源大肠杆菌均有较好的抗菌和抗生物被膜作用,二者联合作用更强,且以RIF+EEO的效果最优。     

利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌的体外抗菌活性试验

旨在测定利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌的体外抗菌活性。采用琼脂二倍稀释法测定利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果显示,利福昔明对19株大肠杆菌的MIC值为8~16μg/m L,对25株葡萄球菌的MIC值为0.002~0.06μg/m L,对18株链球菌的MIC值为0.06~2μg/m L。大部分临床分离菌的MIC值与标准菌的相近,表明分离菌株对利福昔明较为敏感,提示利福昔明对奶牛乳房炎常见病原菌具有较强的体外抗菌活性。     

口服利福昔明片对 AA 肉仔鸡肠道正常菌群的影响

考察利福昔明片对AA肉仔鸡肠道正常菌群的影响,为其在兽医临床上推广应用提供科学依据。选用10日龄健康 AA 肉鸡,分别以25、50、100 mg／kg 经口灌服利福昔明片,连续用药3 d,并于首次用药后第4、7、10天处死仔鸡,取盲肠和回肠内容物进行乳酸杆菌和大肠埃希菌的选择性培养并计数,以此评价利福昔明片对肉仔鸡肠道菌群数量的影响。结果显示,利福昔明片高、中、低剂量组对回肠和盲肠的大肠埃希菌菌群数目与空白对照组相比数量减少,其中100 mg／kg 剂量组在首次用药后第4 天对盲肠大肠埃希菌影响差异显著,其他各剂量组无显著差异。利福昔明片高、中、低剂量组对回肠和盲肠的乳酸杆菌与空白对照组相比数量增加,但差异不显著。结果表明,利福昔明片对肠道内乳酸杆菌等益生菌没有影响,但能降低肠道内大肠埃希菌的数量。     

利福昔明和精油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的抑制作用

为了探究利福昔明、精油单独和联合应用对乳房炎源金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其生物被膜形成的抑制作用,测定利福昔明、精油对9株金葡菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)和最低抑膜浓度(MBIC),棋盘法测定二者对金葡菌菌株S.a-2的联合抑菌指数(FICI),研究其对金葡菌菌株S.a-2生物被膜形成的作用。结果显示:利福昔明对金葡菌的MIC为0.016～4.00μg·mL~(-1),3种精油中,薄荷油的抑菌作用最强,MIC为0.16%～2.50%,且与利福昔明联合表现相加作用;利福昔明联合1/2 MIC、1/8 MIC薄荷油对金葡菌菌株S.a-2生物被膜形成的抑制率为90%和51%,极显著高于1/2 MIC、1/8 MIC薄荷油单独组(61%和37%)及利福昔明组(40%)(P0.01);利福昔明联合1/4 MIC薄荷油的抑制率为62%,极显著高于利福昔明组(P0.01),显著高于1/4 MIC薄荷油组(53%)(P0.05);利福昔明联合1/16 MIC的薄荷油的抑制率为44%,与1/16 MIC薄荷油组(41%)及利福昔明组差异不显著(P0.05)。结果表明:利福昔明、薄荷油单独作用对金葡菌菌株S.a-2生物被膜的形成有明显抑制,一定浓度的薄荷油与利福昔明联合应用对其有更强抑制作用。     

利福昔明悬乳剂在奶牛牛乳和血液中的药代动力学研究

为探讨利福昔明悬乳剂灌注泌乳期奶牛乳房后在奶牛乳区的分布情况,进行了奶牛牛乳和血液中药物的药代动力学研究。试验选取6头荷斯坦奶牛,每头奶牛随机选择2个乳区,以每个乳区200 mg的剂量进行单次乳房灌注利福昔明悬乳剂,利用高效液相色谱法检测牛乳与血液中利福昔明的含量。结果表明:利福昔明悬乳剂采用单次乳房灌注给药后,给药乳区36 h内乳头中利福昔明的浓度都在2μg/mL以上,且血液中未检出利福昔明。说明药物主要集中在给药乳区,进入体循环的量极少,并且能在较长时间内具有抑菌作用。     

硫酸头孢喹肟子宫注入剂对泌乳期奶牛的安全性研究

为研究硫酸头孢喹肟子宫注入剂对泌乳期奶牛的安全性,试验选用24头泌乳期的健康中国荷斯坦奶牛,随机分为4组(每组6头),其中3个受试药物组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组)分别给奶牛子宫内注入不同剂量的硫酸头孢喹肟子宫注入剂,1个空白对照组(Ⅳ组),给奶牛子宫内注入一定剂量的灭菌生理盐水。给药2次,间隔72h。在给药第0天、末次给药日及停药第7天,观察记录试验奶牛的各项指标,包括体温(直肠温度)、脉搏、呼吸频率、血液生理和生化指标、精神状态等临床表现及日产奶量和乳汁体细胞数(SCC)等,并对其进行考查。结果表明,泌乳期奶牛按推荐方法使用受试药物硫酸头孢喹肟子宫注入剂较安全,临床可用于治疗泌乳期奶牛的子宫内膜炎。