犬传染性肝炎病毒的细胞质内发生途径

应用免疫金电子显微镜技术,研究了犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内的形态发生及抗原定位,发现ICHV除了在宿主细胞核内发生外,还有细胞质内发生途径.在细胞质内,病毒核壳体的装配以均质致密包涵体和副晶格包涵体为“基地”,这与细胞核内形态发生方式相似.免疫金标记显示,细胞质包涵体中含有大量的ICHV抗原成分,是核壳体在细胞质内装配的病毒结构蛋白来源.同时,在感染的细胞质内也观察到与细胞核内相同的病毒核心样结构.     

应用电镜原位杂交技术对宿主细胞内犬传染性肝炎病毒DNA定位

应用电镜原位杂交技术，在超微水平上对犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）ＤＮＡ在感染的犬肾传代细胞内的分布进行了定位研究。结果胶体金颗粒不仅特异地标记在细胞核致密型包涵体上，而且在细胞质致密型包涵体上也有胶体金颗粒的特异标记，提示细胞质内含有大量ＩＣＨＶＤＮＡ成分，从而为ＩＣＨＶ的细胞质内装配途径提供了证据。     

应用免疫胶体金标记技术对狂犬病病毒形态发生学的抗原定位研究

利用包埋后免疫胶体金标记技术，通过透射电子显微镜，对感染ＢＨＫ２１细胞的鹿狂犬病病毒进行了形态发生的抗原定位。结果：感染细胞的细胞质内有５种包涵体，其中４种被免疫胶体金特异性标记，这些病毒抗原是多成分的，另一种未被免疫胶体金标记的包涵体可能是病毒核酸；感染细胞的细胞质内大量堆积的病毒前体物质包涵体，其中可能有病毒装配后多余的成分，表明病毒各组分并不是按比例需要而合成的。     

犬传染性肝炎病毒提纯及其部分物理化学特性的分析

用聚乙二醇提纯犬传染性肝炎病毒(ICHV)。对提纯病毒,测定其完整粒子和不完整粒子的浮密度分别为1.336g/ml和130g/ml,沉降系数分别为747S和285S;用PAGE分析病毒蛋白质,含12种多肽,用SDS—PAGE测定其分子量,分别为11.5、7.8、7.0、6.4、5.8、5.4、3.2、2.7、2.4、1.8、1.6和1.3KD;提纯病毒核酸,测定其沉降系数为28S,分子量为18.77×10~6D,解链温度约为82℃,病毒核酸为线状双链DNA,核酸含量为12.5％。     

免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白

本文应用免疫金电镜技术检测犬细小病毒免疫球蛋白（Ｉｇ）。检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ｉｇ对犬细小病毒具有较强的特异性反应。因此认为,第四军医大学动物保健品研制中心所制备的免疫球蛋白对犬细小病毒性肠炎和心肌炎具有良好的治疗和预防作用。     

犬传染性肝炎病毒的血凝抑制抗体和中和抗体的关系

犬传染性肝炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｃａｎｉｎｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＩＣＨＶ）能诱导动物机体产生中和（Ｓｅｒｕｍ　ｎｅｕｔｒｏｌｉｚａｔｉｏｎ，ＳＮ）抗体与血凝抑制（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，ＨＩ）抗体，本研究对８份ＩＣＨＶ免疫的犬血清同时进行了其ＳＮ抗体和ＨＩ抗体的检测，结果表明ＳＮ抗体和ＨＩ抗体具有正比线性关系ＳＮ≈８×ＨＩ，并绘制了标准曲线。由于血凝和ＨＩ试验不需应用活的试验宿主系统，而且可在３　ｈ内获得结果，操作经济简便，因此可通过测定ＨＩ抗体的效价来推算出ＳＮ抗体效价。     

LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用

根据GenBank上公布的犬腺病毒I型（CAV-I）E3基因序列,设计了3对特异性环介导等温扩增（LAMP）引物,以CAV-I DNA为模板,通过条件优化建立了犬传染性肝炎LAMP快速检测方法,该方法能够在63℃恒温下30min内实现目的核酸的大量扩增,在可见光下即可直接观察扩增产物荧光颜色变化来判定结果。特异性和灵敏度试验表明,该LAMP检测方法只对CAV-I有特异性扩增,对其他无关核酸无扩增。与常规PCR检测相比,LAMP的检测灵敏度较好,最低检出限为10-7TCID50,是PCR检测方法的100倍。临床样品检测结果表明, LAMP阳性检出率为36%,与病毒分离鉴定的结果符合率达96.8%,与PCR检测的结果符合率达100%,且快速简便,成本低,适用于基层实验室的快速疾病诊断。     

犬传染性肝炎病毒在犬肾传代细胞中增殖过程的观察研究

用免疫荧光技术对犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）在感染犬肾传代细胞中的增殖过程进行了观察。结果：ＩＣＨＶ感染犬肾传代细胞吸附时间为１ｈ，在感染过程中出现二次“隐蔽期”和二次“繁殖高峰”。结果表明，ＩＣＨＶ感染犬肾传代细胞４８ｈ收毒较为合适。     

玉树地区流浪犬传染性肝炎血清学调查

采用血凝/血凝抑制试验对青海玉树地区的30份流浪犬血清样品进行了犬传染性肝炎病毒抗体检测,结果检出阳性犬2只,阳性率为6.67%。表明玉树地区流浪犬存在传染性肝炎病毒的感染,应引起相关部门的重视,加大该地区犬传染性肝炎防控力度,控制该病的发生和流行。     

免疫器官中肾型鸡传染性支气管炎病毒的定位和动态分布

以鼠抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（肾型IBV）的高免血清为一抗，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测石蜡切片肾型IBV抗原的间接酶标抗体染色技术。应用该技术对人工感染肾型IBV C9001株鸡免疫器官中的病毒进行了检测，结果胸腺和法氏囊是病毒主要侵害的免疫器官，脾脏，盲肠扁桃体仅呈一过性感染，哈氏腺未检测到，法氏囊从感染后2－12天，胸腺从感染后3－8天均检测到病毒抗原，阳性染色主要集中于法氏囊淋巴滤泡髓质区和胸腺小叶髓质区淋巴细胞和网状细胞胞浆内。     

实验性犬传染性肝炎肝胆的扫描电镜和透射电镜观察

透射电镜下,犬传染性肝炎急性坏死型病例肝细胞线粒体高度肿胀,嵴断裂。病变严重的,肝细胞胞浆固有结构崩解、碎裂。核内包涵体由基质和ICHV粒子构成;在不含包涵体的核内也见到ICHV粒子。核内的ICHV粒子通过溶解的核膜或由于核崩解而释入胞浆;当细胞膜局部破裂或整个细胞崩解时,细胞内的ICHV粒子释放于细胞外。在嗜酸性小体的胞浆内观察到ICHV粒子。窦状隙内皮细胞和星状细胞呈现与肝细胞类似的变化。扫描电镜下,组织学呈凝固性坏死的胆囊粘膜袁面平坦无结构;亦见胆囊粘膜有局部灶坏死,与周围界限明显,坏死灶外围的上皮细胞结结构不整,上皮顶部凸出的颗粒大小不一或脱落。透射电镜下,呈坏死的胆囊粘膜上皮细胞固有结构消失,呈均质状;其余部位的上皮细胞微绒毛断裂、脱落;线粒体肿胀,嵴溶解,上皮顶部堆集大量的致密小体,细胞间连接复合体结构消失;亦见血管均质坏死,血管内皮的坏死与粘膜上皮的坏死同步或先于其发生。     

鸭病毒性肝炎病毒抗原检测的研究

将病鸭的肝脏匀浆冻融后点于硝酸纤维素膜,建立了检测鸭肝炎病毒抗原的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法,对采集的５２份肝脏检测表明,鸭肝炎病毒的检测率为７３％（３８／５２）。同时对肝脏进行微生物学检查,鸭疫里氏杆菌的检测率为５２％（２７／５２）。两种病原的混合感染率为２７％（１４／５２）。     

Expression,Identification and Subcellular Localization of V Protein of Canine Distemper Virus

In order to study the function of canine distemper virus (CDV) V protein,V gene fragment was inserted into the pGEX-6p-1 vector,and then pGEX-6p-1-CDV-V recombinant expression plasmid was obtained.Purified V protein immunized BALB/c mice to prepare the positive serum.Meanwhile,to confirm the distribution of V protein and subcellular localization with confocal laser technology,a eukaryotic expression recombinant plasmid pcDNA3.1-CDV-V was built,then transfected into Vero cells.The results showed that V protein was successfully expressed and the positive serum was prepared.The recombinant plasmid pcDNA3.1-CDV-V was expressed in Vero cells and mainly expressed in cytoplasm.The results laid a function for functional studies of CDV V protein.