玉米InDel分子标记20重PCR检测体系的建立

为构建玉米多重PCR检测体系,提高分子标记检测效率,利用10份代表性玉米材料对238对InDel引物进行单重PCR评估,共得到192对扩增效率高、稳定性好的引物。根据软件评估结果、扩增质量、产物范围、染色体均匀分布原则从192对引物中优选出30对综合表现较好的引物形成扩增产物范围在80~200 bp和200~400 bp的两组核心引物组合,每套组合中有10对引物分布在不同染色体上。在核心引物组合的基础上综合考虑染色体分布、碱基片段范围、引物荧光颜色,逐一添加引物,最终形成两组玉米20重PCR体系,一组40重荧光标记毛细管电泳。     

玉米InDel标记20重PCR检测体系的建立

为构建玉米多重PCR检测体系,提高分子标记检测效率,利用10份代表性玉米材料对238对InDel引物进行单重PCR评估,共得到192对扩增效率高、稳定性好的引物。根据软件评估结果、扩增质量、产物范围、染色体均匀分布原则从192对引物中优选出30对综合表现较好的引物形成扩增产物范围在80~200 bp和200~400 bp的两组核心引物组合,每套组合中有10对引物分布在不同染色体上。在核心引物组合的基础上综合考虑染色体分布、碱基片段范围、引物荧光颜色,逐一添加引物,最终形成两组玉米20重PCR体系,一组40重荧光标记毛细管电泳。     

吉林省主推玉米品种的SSR分子标记纯度鉴定

针对吉林省主推玉米品种,构建了一套科学高效的纯度鉴定体系。以吉林省主推的50个玉米品种为研究材料,从GB/T 39914-2021公布的40对SSR引物中筛选出9对用于吉林省主推玉米品种的纯度鉴定。筛选出的9对引物杂合度在82%~100%,平均杂合度为91.5%,PIC值在0.44~0.75,平均PIC值为0.63。该组引物多态性高、稳定性强、分辨率高且非特异扩增片段少。将9重扩增体系进行优化,形成吉林省主推玉米品种纯度鉴定体系。用这9对引物对吉林省主推的6个品种进行纯度鉴定,可准确检测出品种的典型株、自交苗和异型株,共检测出10个自交苗和7个异型株,6份样品最高纯度为98%,最低纯度为96%,鉴定结果与田间鉴定结果相关性系数为0.766,相关性较高,结果可靠。     

甘蔗线虫病抗性基因的PCR检测研究

以38份未经线虫病常规鉴定的甘蔗种质资源为供试材料,根据番茄抗根结线虫病基因和甜菜抗胞囊线虫病基因的保守序列区域,分别设计了2条上游引物、2条下游引物,对设计的引物进行组合后,应用PCR特异扩增从中分别筛选出各1对特异引物。用抗根结线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约460 bp大小的特异片段;用抗胞囊线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约690 bp大小的特异片段,进一步进行了PCR-Southern杂交,确认了该2条特异引物的真实性。     

棉花多重 PCR 技术及其对杂交棉纯度鉴定的初步研究

选取在湘杂棉系列品种间表现出多态性稳定的部分SSR引物,基于其扩增片段大小的不同来组合引物,进行棉花多重PCR扩增.结果表明,在与单-PCR扩增相同反应条件下,仅根据扩增片段大小不同的原则,可使80%的两重PCR组合获得正常扩增.利用两重PCR组合正常扩增的引物进行三重、四重PCR反应时,均可获得正常扩增的产物,在此基...     

浙江省10个晚粳稻品种SSR指纹图谱的构建及遗传差异分析

本研究利用均匀分布于水稻12条染色体上的48对SSR引物,采用荧光标记毛细管电泳检测方法,以浙江省主要推广种植的10个常规晚粳稻品种为材料,进行遗传多样性分析并构建其指纹图谱。结果表明,共有27对引物在品种间存在57个多态性片段,每对引物可以扩增出2~3个态性片段,平均每个引物2.1个。10个品种间的遗传相似系数为0.439~0.877,平均为0.642,10个供试材料间遗传基础相对狭窄。选用7对多态性较高的引物构建的核心指纹图谱能区分10个晚粳稻品种。聚类分析结果显示,在遗传相似系数0.580处可将10个品种划分为两类:越光衍生品种如浙粳27和其他类型。研究结果为浙江省常规晚粳稻品种的保护和纯度鉴定,选育和推广提供理论和技术支持。     

毛细管电泳荧光检测中的异常电泳类型及原因分析

采用毛细管电泳荧光检测技术进行玉米SSR标记的片段分析.利用峰型、峰面积和其它荧光干扰峰等方面的特征对特异峰和非特异峰进行甄别.分析了特异峰的具体表现类型及原因:包括N 1峰、稀有峰、连续多峰、三峰和高低峰等.探讨了片段扩增产物大小与异常峰型的关系.为保证玉米品种DNA指纹库构建的标准化,提出了数据统计规范化的解决方案.     

转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化

转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法。根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5’端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列, 3’端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240bp的玉米基因组序列。针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3’端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法, PCR产物片段大小为166 bp。经过测试,该方法的检出限为0.1%,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段。国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用。ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑。     

甘蓝型双低油菜杂交种丰油10号纯度的SSR鉴定

品种纯度影响品种的一致性和稳定性,是品种鉴定的一项重要指标。为建立甘蓝型油菜杂交种丰油10号的SSR标记纯度鉴定方法,以丰油10号及其亲本为材料,利用SSR荧光标记与毛细管电泳相结合的方法,在128对SSR引物中筛选出2对可用于丰油10号纯度鉴定的引物。2对SSR引物对丰油10号的纯度鉴定结果为85.64%,与田间表型纯度鉴定的结果87.18%相比,纯度值非常接近,说明筛选的SSR标记可用于丰油10号杂交种纯度鉴定。     

盐溶蛋白鉴定玉米纯度的图谱分析

玉米种子纯度盐溶蛋白电泳是根据品种间蛋白质组成的差异来鉴定种子纯度。品种间差异在电泳结果上就是蛋白质图谱的差异。熟练、准确掌握图谱分析技术,对于快速、准确鉴定种子纯度有重要意义。我们经过几年的大量实验总结,积累了一些经验,供同行借鉴。1玉米盐溶蛋白电泳谱带区域的划分玉米盐溶蛋白电泳谱带可根据分子量大小划分为三个区域:α区、β区、γ区。α区为小分子量蛋白质所组成;β区为中分子量蛋白质所组成;γ区为高分子量蛋白质所组成,β区为主要谱带区域,在该区域中蛋白质谱带数量多,染色深,品种间差异大,为纯度鉴定中主要应用区…     

萝卜-甘蓝型油菜中萝卜基因组的RAPD与dpRAPD分析效率研究

应用RAPD与dpRAPD方法鉴定萝卜-甘蓝型油莱中萝卜基因组,筛选了140条随机引物。结果表明,平均每条引物(组合)能产生的萝b基因组特异标记数dpRAPD高于RAPD,分别为1．69和1．33;在dpRAPD扩增产物中有77．6％谱带清晰易辨,略高于RAPD(75．4％)。两者所检测到的萝卜基因组标记大部分为各自特异的扩增产物。由于结合了荧光标记引物,dpRAPD反应产物可在Genetic Analyzer上分离检测,因此能检测到100bp以下的小片段DNA。     

利用SSR标记鉴定南校969杂交一代种子纯度

为了建立一套便捷、准确、稳定的玉米种子纯度鉴定方法,本研究以南校969玉米杂种一代及其亲本为材料,对20对均匀分布于玉米染色体上的SSR引物进行筛选,SSR引物phi085适合该品种纯度鉴定。对利用幼嫩胚芽和干种子为材料提取DNA的实验效果进行比较,建立了一套利用SSR标记技术简便高效进行玉米杂种一代纯度鉴定的技术体系。研究结果证明,利用玉米幼嫩胚芽和干种子胚提取DNA,通过一对SSR引物扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以方便地进行玉米杂交种纯度鉴定。     

应用SSR标记技术鉴定玉米杂交种纯度

以张玉1号、纪元1号、蠡玉6号、万佳11杂交种及其各自亲本为实验材料．利用16对玉米SSR引物进行SSR扩增,筛选出了适合该杂交种纯度鉴定的SSR引物．建立了一套利用SSR标记技术快速、准确、简便易行地进行玉米杂交种纯度鉴定的技术。     

快速多重SSR法在玉米种子纯度鉴定中的分析

近几年,随着中国玉米品种数量的激增,对制种基地玉米种子纯度质量检测提出了新的挑战。为更快、更准确地鉴定玉米种子纯度中的自交苗和异型株,本研究采用9对优异SSR引物,建立了快速PCR程序,可在28 min内完成PCR扩增。采用TaKaRa Multiplex PCR assay kit体系,基于快速PCR和多重PCR,建立了快速9重PCR体系,结合碱裂解DNA提取法和荧光毛细管电泳,1 h 30 min内可完成SSR纯度鉴定基因分型全流程。采用快速9重PCR体系对一份96粒‘郑单958’检测样品进行纯度鉴定,共检测出93个正常个体,2个自交个体,1个异型株,鉴定结果与常规PCR结果完全一致。该快速PCR体系扩增结果稳定、重复性强、节约成本、峰型易判断,能大大提高检测工作效率,对种子纯度鉴定、品种真实性检测以及SSR基因型检测有较高应用价值及前景。     

核桃RAPD引物筛选及品种间亲缘关系研究

本研究以30个核桃品种为实验材料,首次建立了11nt引物长度的优化核桃RAPD技术体系。从40个11bp碱基中共筛选出适用于核桃遗传多样性分析18个11nt引物。这些引物在30个核桃品种中共扩增出111个DNA片段,片段大小在500～3050之间,其中77个DNA片段表现出多态性,占总扩增片段的69.4%。根据RAPD指纹信息对核桃品种资源的遗传距离进行了分析,并据此构建了聚类树状图。从聚类结果看,30个核桃品种可以划分成遗传差异较明显的10组。     

红花大金元特异性SCAR引物筛选

建立快速准确的特色烤烟品种红花大金元的分子标记鉴定方法。通过引物设计软件Primer Premier 5设计出SCAR引物,通过SCAR-PCR及凝胶电泳结果筛选出对红花大金元具有特异性的引物。结果表明,设计出的12对SCAR引物分别对红花大金元、云烟85、云烟87和K326基因组DNA进行扩增,其中引物H1、H2和H4只有以红花大金元DNA为模板进行扩增时能获得约220 bp的片段,而非红花大金元则未扩增出该片段。     

转基因玉米MON88017旁侧序列分析及定性PCR检测

采用基因组步移法和巢式PCR方法研究转基因玉米MON88017外源基因插入位点旁侧序列特征,获得了外源基因插入位点的左边界旁侧序列504bp,包括336bp的插入载体序列和168bp的玉米基因组序列。根据此旁侧序列,设计MON88017转化事件特异性引物并进行定性PCR扩增,扩增片段为446bp,建立了转基因玉米MON88017转化体特异性检测方法。该方法特异性强、灵敏度高(0.1%),为转基因玉米品种MON88017进出口检测和标识检测提供了技术基础。     

玉米种子DNA快速提取及杂交种纯度的快速鉴定

本研究用玉米杂交种渝单8号及其双亲的干种子作为材料,使用NaOH溶液研磨玉米种子胚,提取基因组DNA,并利用多重PCR扩增进行玉米杂交种子的纯度鉴定.结果表明,利用玉米种子快速提取方法获得的DNA可进行正常的SSR扩增,并且从20对玉米核心引物中筛选出了8对扩增谱带呈双亲互补型的引物,将其中3对引物YISSR、phi072和phi299852组合起来扩增,扩增谱带清晰可辨,对渝单8号杂交种子的纯度进行准确鉴定.初步表明利用多重PCR技术鉴定玉米种子纯度是可行的,不仅简便快速,而且降低了检测成本.     

3个玉米杂交种和亲本SSR指纹图谱的构建

以3个云南省大面积推广的玉米杂交种及其亲本为试材,从96对SSR引物中筛选出24对引物,这些引物分布在玉米基因组的10条染色体上,每对引物可以检测到1～6个数目不等的多态性片段(allele),共97个多态性片段,平均为4.04个,片段大小介于85～300 bp之间.在比较分析各试材图谱的基础上,探讨了构建品种指纹图谱的统计学方法,建立了适     

玉米杂交种纯度鉴定SNP 核心引物的确定及高通量检测方案的建立

纯度是玉米种子质量的重要指标之一,尤其杂交种自交株是影响田间产量的关键因素。KASP(kompetitive allele specific PCR)技术具有高通量、低成本的优点,适用于种子纯度检测。本研究基于12套杂交种及其父母本的三联体样本及335份玉米杂交种国家审定标准样品SNP指纹,从384个SNP基础位点筛选获得60个候选位点,位点转化为KASP引物的成功率为95%。综合考虑引物双亲互补率、多态性、稳定性和分型效果等多项指标,最终确定20个引物作为玉米杂交种纯度鉴定的核心引物,能够有效鉴定99.7%供试样品纯度。对于待测样品京科968通过SNP-DNA指纹数据库查询,并选择双亲互补型引物进行纯度鉴定。在检测的110个个体中,共检出1个自交苗和2个异型株,纯度为97.3%。同时,基于纯度核心引物对批量样品检测建立高通量纯度检测方案,具有快捷、准确、高通量和低成本的特点,为政府监管和企业提供了更多纯度鉴定方案的选择。