三种外检植物病毒的灭活处理

番茄环斑病毒（ＴｍＲＳＶ），烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ），南芥菜花叶病毒（ＡｒＭＶ）的病汁液和ＰＥＧ粗提纯液，经适宜温度或甲醛处理，均丧失侵染性而有抗原性。ＴｍＲＳＶＰＥＧ粗提纯液经６０℃（水浴）处理１０分钟或２８℃７天，ＴＲＳＶ粗提纯液置２５℃一个月，Ａｒ－ＭＶ在４０℃７天条件下均可做为阳性对照的灭活处理的最佳方案。可保存抗原性在７～１２月以上。为了防止危险性检疫病毒的侵入，对入境种苗进行检疫，需建立快速、准确、标准化检疫程序，而在血清学快速诊断试验中，提供阳性对照，对提高判断准确率是必要的。因此，为了解决在诊断试剂中提供阳性对照但又不能使其检疫性病毒人为扩散这一重要问题，我们在研究三种外检病毒（ＴｍＲＳＶ，ＴＲＳＶ，ＡｒＭＶ）的检验技术的同时，又进行了一些灭活试验，用化学和物理方法钝化病毒，使其失去侵染性而保持抗原性，并应用于酶联诊断试剂盒中，本文报道了初步试验结果     

A蛋白碱性磷酸酯酶的标记及酶联测试

以戊二醛为交联剂,采用两步法将Ａ蛋白及碱性磷酸酯酶标记,获得的酶标记物可稀释１／２０００,酶联对香石竹斑驳病毒,马铃薯Ｘ病毒、南方菜豆花叶病毒,烟草环斑病毒的提纯制剂及病汁液检测,分别达到２０ｎｇ和稀释１０＾－２￣１０＾－５。而阴性对照维持在较低的水平。     

ELISA检测植物病毒过程中减少非特异反应的有效方法—酶联板处理

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种快速、准确、经济、简便的免疫学检测手段,并具有作大规模检测和灵敏度高的优点。但用于植物病毒粗汁液检测,往往存在着病健样品的吸收值之比(P/N)太低,阴阳性反应难以判别的问题。酶联板的处理能消除或大大减缓此问題。在本实验中,我们用氢氧化钠/乙醇液处理酶联板,效果十分显著。在对不同组10种植物病毒粗汁液的检测中,使用处理板并设未处理板作对照,结果前者无一例外的大大提高了病毒特异性吸收值及P/N值,从而使ELISA检测植物病毒粗汁液的特异性吸收值提高0.8～5倍,灵敏度提高10～1000倍。     

马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒的兔多克隆抗体。用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和羊抗兔抗体质控线,制成免疫层析检测试纸条。马铃薯X病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释10000倍(重量/体积)马铃薯Y病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释1000倍。10min内即可出检测结果。两种试纸条相互测试,未出现交叉反应。用健康和缓冲液对照测试,两种试纸条结果都为阴性。田间采集的马铃薯叶片用试纸条检测的结果和酶联结果相吻合。在密封、干燥、低温的条件下保存,有利于维持试纸条的稳定性。     

用作遗传种质的马铃薯健康检验及其无毒苗的再生

健康种质是马铃薯生产和品质改良的基本要求。在对３个用作转基因种质的马铃薯进行病毒检测时，发现均带ＰＶＸ及ＰＶＹ病毒，经茎尖培养，获得了这３个品种的健康无毒苗，最后，对健康种质检验标准、病毒检测方法及再生无毒苗的方法进行了讨论     

马铃薯病毒病的危害及防治

马铃薯病毒病 (Ｐｏｔａｔｏｖｉｒｕｓ)在我国分布较广 ,为害也较严重 ,感染病毒的马铃薯 ,通过块茎积累 ,使块茎品质变劣 ,产量逐年降低 ,一般减产 2 0 %～ 5 0 % ,严重的达 80 %以上。马铃薯病毒病是一个包括多种病毒病的综合名称 ,主要包括普通花叶病、条斑花叶病、卷叶病、纤块茎病及丛枝病。1　症状与病原1.1　普通花叶病由马铃薯Ｘ病毒 (ＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＸ ,简称ＰＶＸ)引起 ,大多数品种都感染此病毒 ,但有些品种不表现症状。表现的症状有轻花叶、坏死性叶斑、矮化以及植株由下向上枯死 ,块茎变小。该种病毒颗粒体为弯秆状 ,5…     

我国获得世界首例转多基因抗病番茄

我国获得世界首例转多基因抗病番茄唐绂忱（吉林省公主岭市寒地果树研究所，１３６１１８）国家生物工程中心利用现代生物技术，率先地获得了世界首例转多基因高抗烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）和抗青枯病、晚疫病的番茄植株。...     

烟草环斑病毒、马铃薯X病毒碱性磷酸酶酶联诊断试剂盒的研制简报

利用血清学技术开发的酶联诊断试剂盒 ,由于快速灵敏 ,操作简便 ,可进行大量样品的检测 ,比较好地满足了生产上需要 ,具有广阔的应用前景。由于国内尚没有成熟的植物病毒诊断试剂盒供应者 ,缺乏可靠的产品 ,因而限制了植物病毒诊断在国内的应用和发展。一旦需要时 ,主要是依赖国外进口 ,由于价格昂贵 ,采购不便 ,不能及时供应 ,在国内推广尚有一定的困难。另外 ,国外有些试剂盒在技术上有一定的缺陷 ,造成一些假阳性反应的出现 ,其中在阳性对照和阴性对照处理上不很成熟 ,对于危险性病毒的阳性对照处理不当 ,还易造成危险性病毒的扩散 ,而阴…     

一种快速简便检测马铃薯病毒的方法——病毒细菌协同凝集法(VBA)的研究

 在国内、外首次选用金黄色葡萄球菌(Staphylococc aureus)的No.180菌株用于病毒细菌协同凝集试验(Virobacterial agglutination test简称VBA)检测了来自马铃薯的4种不同形态粒子的病毒:马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯丫病毒(PVY)、烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯卷叶病毒(PLRV),其灵敏度达2.7~6.1ng/ml,检出病汁液的最大稀释度达10⁴~10⁵(PLRV1:500),较国内、外采用的Cown I菌株的灵敏度提高5~10倍。与血清学方法相比,VBA在2~3分种内就可获得结果,无假阳性反应,其灵敏度显著高于间接酶联法和免疫电镜,而接近于A蛋白酶联法。经抗血清致敏的菌体在4℃下保存4个月,对VBA检测的灵敏度没有影响。用VBA对采自田间的93个马铃薯病样进行检测,它们大多受2~3种病毒(PVX、PVY及PLRV)的复合侵染;和用间接酶联法及鉴别寄主检测的结果趋向一致。室内和田间试验均表明VBA灵敏度高、特异性强、快速简便和经济,尤其适合在基层单位中推广应用。     

一种快速简便检测马铃薯病毒的方法——病毒细菌协同凝集法(VBA)的研究

在国内、外首次选用金黄色葡萄球菌(Staphylococc aureus)的No.180菌株用于病毒细菌协同凝集试验(Virobacterial agglutination test简称VBA)检测了来自马铃薯的4种不同形态粒子的病毒:马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯丫病毒(PVY)、烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯卷叶病毒(PLRV),其灵敏度达2.7～6.1ng/ml,检出病汁液的最大稀释度达10~4～10~5(PLRV1:500),较国内、外采用的Cown I菌株的灵敏度提高5～10倍。与血清学方法相比,VBA在2～3分种内就可获得结果,无假阳性反应,其灵敏度显著高于间接酶联法和免疫电镜,而接近于A蛋白酶联法。经抗血清致敏的菌体在4℃下保存4个月,对VBA检测的灵敏度没有影响。用VBA对采自田间的93个马铃薯病样进行检测,它们大多受2～3种病毒(PVX、PVY及PLRV)的复合侵染;和用间接酶联法及鉴别寄主检测的结果趋向一致。室内和田间试验均表明VBA灵敏度高、特异性强、快速简便和经济,尤其适合在基层单位中推广应用。