饲料中添加南极磷虾粉对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevi)雄性亲鱼繁殖性能及抗氧化功能的影响

饲料中添加0、10％、20％的南极磷虾粉,配制3组(对照组K-0、K-10、K-20)等氮等脂的实验饲料,在室内流水养殖系统进行为期90 d的养殖实验,探讨南极磷虾粉对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雄鱼繁殖性能和抗氧化能力的影响.结果显示,饲料中添加南极磷虾粉对半滑舌鳎雄鱼肝体比、性体比、精液浓度、睾酮含量均无显著性影响(P＞0.05);K-10组与K-20组精巢中超氧化物歧化酶(SOD)活性无显著性差异(P＞0.05),但均显著高于对照组(P＜0.05),K-10组与K-20组精巢、血清和肝脏中的丙二醛(MDA)含量无显著性差异(P＞0.05),但均显著低于对照组(P＜0.05).在本实验条件下,饲料中添加南极磷虾粉不能显著提高半滑舌鳎雄鱼的繁殖性能(P＞0.05),但能显著提高雄鱼的抗氧化功能(P＜0.05).     

饲料中添加不同水平的维生素E对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)亲鱼繁殖性能及后代质量的影响

在饲料中分别添加0、200、1200 mg/kg的维生素E(DL-α-生育酚乙酸脂形式)配制成Ec、El和Eh三种试验饲料,饲喂3龄半滑舌鳎亲鱼(雌性1.58±0.19 kg/尾、雄性0.20±0.05 kg/尾)70 d,探讨饲料中添加不同水平的维生素E对半滑舌鳎亲鱼繁殖性能的影响。结果显示,饲料中添加1200 mg/kg的维生素E(Eh组)不仅可以促进亲鱼性腺的发育,提高亲鱼产卵量、浮卵率、受精率、孵化率以及初孵仔鱼长度,而且影响仔鱼质量,仔鱼的成活率、12 d仔鱼长度、生存活力等方面均要高于对照组。而饲料中添加200 mg/kg的维生素E(El组)只对亲鱼性腺的发育和初孵仔鱼长度有一定的促进作用,对亲鱼产卵量、浮卵率、受精率、孵化率没有显著影响(P>0.05)。随饲料中维生素E的增加,血清中SOD的活性显著升高(P<0.05),MDA含量则显著下降(P<0.05)。此外,El和Eh试验组卵中干物质、维生素C的含量,以及卵子脂肪酸中PUFA、n-3PUFA、n-3HUFA和n-6PUFA的含量均要高于Ec组,El和Eh试验组之间的没有显著性差异(P>0.05)。结果表明,在半滑舌鳎亲鱼饲料中添加适量维生素E会亲鱼促进性腺的发育,增加产卵量,提高卵子和仔鱼的质量。在本试验中Eh组(1200 mg/kg)亲鱼的繁殖性能要优于Ec组(0 mg/kg)和El组(200 mg/kg)。     

不同脂肪含量的配合饲料对半滑舌鳎苗种生长的影响

通过不同脂肪含量饲料的对比喂养试验,初步了解半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）对饲料中脂肪含量的需求,使用脂肪含量分别为10.9％、14.2％和16.6％的配合饲料对半滑舌鳎进行了60d的喂养试验.结果表明,用脂肪含量为10.9％的配合饲料喂养的半滑舌鳎生长情况优于其他两种更高脂肪含量的配合饲料....     

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)黑色素富集激素基因的克隆和表达

为研究黑色素富集激素基因(MCH)表达调控与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)无眼侧黑化性状的关系,通过分子克隆获得了半滑舌鳎pMCH2,通过NCBI获得了pMCH1 cDNA序列,分析了pMCH mRNA的组织表达特性,探索了脑垂体和皮肤中的pMCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系.结果显示,pMCHl cDNA序列长476 bp,编码134个氨基酸,与鲽形目、鲤形目和鲈形目鱼类的pMCH1氨基酸聚为1个进化分支.pMCH2 cDNA序列全长为626 bp,编码147个氨基酸,与鲽形目和鲍形目鱼类的pMCH2氨基酸聚为1个进化分支.2种MCH mRNA在垂体中表达量最高,同时,MCH1 mRNA在除肌肉外的其他组织中均可检测到表达;MCH2 mRNA在脑、有眼侧皮肤、无眼侧正常皮肤、性腺和鳃组织中也可检测到较高表达.MCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系分析显示,脑垂体和皮肤中MCH1 mRNA表现出相似的表达变化趋势,都是10％黑化组的表达量最高,而后随黑化程度加大显著降低.对于MCH2而言,无眼侧正常鱼和无眼侧50％黑化鱼的脑垂体中都具有较高的MCH2 mRNA表达水平,但在无眼侧10％黑化组和无眼侧80％黑化组,其表达水平显著降低.皮肤中MCH2表现出随黑化程度加大而显著升高的趋势.本研究结果可为认识MCH基因与半滑舌鳎无眼侧黑化性状的表达调控关系提供基础资料.     

Effects of Protein and Lipid Levels in Practical Diets on Growth and Body Composition of Tongue Sole,Cynoglossus semilaevis Gunther

A 9‐wk feeding experiment was conducted to estimate the optimal dietary protein and lipid levels for tongue sole, Cynoglossus semilaevis Gunther (initial average weight of 43.8 ± 0.18 g). Six practical test diets were formulated to contain three protein levels (45, 50, and 55%, respectively) at two lipid levels (12 and 16%, respectively) with P/E ratios ranging from 87.1 to 110.5 mg protein/kcal. Each diet was randomly fed to triplicate groups of 20 fish per tank (1000 L). The results showed that fish fed the diet with 55% protein and 12% lipid (P/E ratio of 110.5 mg protein/kcal) had the highest thermal‐unit growth coefficient (TGC), feed efficiency ratio, protein productive value, and energy retention. TGC was significantly increased with increasing dietary protein levels irrespective of dietary lipid levels (P < 0.05). However, fish fed the diet with 16% lipid showed significant lower growth than fish fed the diet with 12% lipid. These results suggest that the diet containing 55% protein and 12% lipid with P/E of 110.5 mg protein/kcal is optimal for tongue sole and the increase of dietary lipid level has no effective protein‐sparing effect.     

不同规格半滑舌鳎的生长比较

将330日龄的大规格[平均体长(24.4±2.1) cm、平均体质量(93±5.3) g]、小规格[平均体长(18.2±1.1) cm、平均体质量(34±2.5) g]半滑舌鳎分别饲养在2个4 m^3水槽中;550日龄后,置于4个4 m^3水槽内培育,密度为15～30尾/m^2;900日龄后置于4个30 m^3水泥池内培育,密度为3～8尾/m^2。每2～3个月测量1次体长和体质量,研究不同规格半滑舌鳎在工厂化养殖条件下的生长。3年的养殖试验表明,随着养殖时间的延长,两个群体的生长差异变大,大、小规格群体的平均体长比值由1.3增至1.6,平均体质量比值由2.7增至5.3,大规格群体(全长51.3～66.4 cm)中95%以上为雌性;半滑舌鳎的快速生长期为698～1081日龄阶段,适宜生长水温为14.6～26.9℃。本试验结果将为半滑舌鳎的工厂化养殖提供参考。     

半滑舌鳎生长相关的微卫星标记及优势基因型

本研究利用SPSS 19.0的GLM模型分析28个微卫星标记与半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis生长性状的相关性,结果获得14个与半滑舌鳎体质量(BWe)、体长(BL)或体宽(BWi)显著相关的微卫星标记。与雄性个体生长性状显著相关的7个标记中,cse56与体质量、体长和体宽3个性状均显著相关(P0.05);csou24、hncyse68、hncyse147和hncyse148与体质量和体宽显著相关(P0.05)。与雌性个体生长性状显著相关的10个标记中,cse151和csou56与3个性状均显著相关(P0.05);csou33、csou39和hncyse108等5个标记与其中2个性状显著相关(P0.05)。csou24、hncyse147和hncyse148在雄、雌群体中均表现出与生长性状的相关性。本研究共筛选出17个对雄性个体生长具有显著正面影响的优势基因型,29个雌性个体的优势基因型。     

吉富品系尼罗罗非鱼的越冬技术

综述了水环境的部分理化因子如温度、盐度、溶氧量、光照、重金属以及放养密度与换水量等对半滑舌鳎生长发育的影响,以期为该鱼的人工繁育和工厂化养殖提供参考。     

Feeding rhythm and growth of the tongue sole, Cynoglossus semilaevis Günther, during its early life stages

The feeding rhythm and growth characteristics of the early life stages of the tongue sole, Cynoglossus semilaevis Günther, were studied. Larvae began to prey on rotifers about 2–3 days after hatching at 23°C. About 12 days after hatching, larvae had grown to 8–9 mm in total length and were able to prey on Artemia larvae. As the larvae grew, they showed an increasing feeding capacity and a distinct feeding rhythm. Feeding intensity for day‐6 larvae was highest at 12:00 and 18:00 hours, about 2–3 h after the maximum feeding incidence. The highest levels of feeding intensity for day‐16 larvae occurred between 09:00 and 18:00 hours. By day 26, when the larvae had metamorphosed, feeding capacity had again increased considerably and, in contrast to the earlier stages, feeding intensity peaked at 18:00 and 24:00 hours concurrently with feeding incidence. Thus, tongue sole were found to have different feeding rhythms in the pre‐ and post‐metamorphosis stages, with the highest feeding activity in the daytime during the larval planktonic stage, and at night during the juvenile benthic stage. The estimated maximum daily feeding rates were 65%, 40% and 11% of body weight on days 6, 16 (larvae) and 26 (juveniles) respectively. Size variation increased markedly with development.     

Extraction Optimization and Characterization of Gelatin from Half-Smooth Tongue Sole (Cynoglossus semilaevis Gunther) Skin

Half-smooth tongue sole is a popular warm-water fish, and its skin may be an available resource for gelatin extraction. Response surface method was used to optimize the extraction of gelatin from the fish skin. The most suitable conditions for maximum gelatin yield (24.2%) were pretreatment with 1.9 g/L NaOH, followed by hot water extraction at 63.54ºC for 4.81 h. The obtained gelatin had a high imino acid content (185 residues/1,000 residues), with a high content of crude protein and low levels of ash, fat, and moisture. The predominant sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis bands revealed that the gelatin contained low-molecular-weight peptides, α-, β-, and γ chains. As compared with bovine gelatin, the fish skin gelatin solution had lower values of strength and clarity and higher levels of L* and viscosity. Additionally, Fourier-transform infrared spectra showed that gel from the gelatin had four amide bands (amide A, amide I, amide II, and amide III) similar to commercial gelatin. The results suggest that half-smooth tongue sole skin could be a promising source of gelatin in view of the comparability between its gelatin and commercial gelatin in physicochemical properties.     

半滑舌鳎甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1基因的克隆及表达分析

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(Mannan-binding lectin associated serine protease 1,MASP1)是补体凝集素途径中起重要作用的激活蛋白。本研究以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,应用RACE技术和实时荧光定量qRT-PCR技术对半滑舌鳎MASP1基因(Cynoglossus semilaevis MASP1,CsMASP1)进行了克隆和表达模式分析。结果显示,CsMASP1基因c DNA序列全长为2507 bp,5′非编码区长82 bp,3′非编码区长142 bp,开放阅读框长2283 bp,共编码760个氨基酸;CsMASP1基因包含13个外显子和12个内含子,与多数已知鱼类的MASP1基因结构一致;SMART分析显示,CsMASP1包含6个结构域,与哺乳动物、鸟类、其他鱼类的结构域一致;同源比对发现,CsMASP1和鱼类的相似度较高,与金目鲈(Latescalcarifer)的相似性最高,为76%。CsMASP1基因在11种健康组织(血液、脑、鳃、性腺、心脏、头肾、肠、肝、皮肤、脾和后肾)中均有表达,其中,在肝、脾和头肾中表达量较高;鳗弧菌(Vibro anguillarum)感染后,CsMASP1基因在6种免疫组织(血液、鳃、头肾、肠、肝和脾)中呈现不同的表达模式,在6种免疫组织中呈现明显的上调表达,肝的表达峰值出现在感染后24 h;脾和鳃的表达峰值出现在感染后6 h;肠、头肾和血液的表达峰值均出现在感染后12h;随着病原菌感染时间增加,基因表达量逐渐降低并恢复至正常水平。研究表明,CsMASP1基因参与了半滑舌鳎的免疫应答过程,本结果为半滑舌鳎的免疫机理研究奠定了基础。     

GnIH多肽对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)下丘脑生殖相关基因表达的影响

本研究首次通过下丘脑离体孵育的方法研究促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)多肽对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)下丘脑中生殖相关基因的表达调控.研究结果显示,tsGnIH-1促进了gnrh2和gnih的表达,对gnrh3和kiss2的表达无影响;tsGnIH-2抑制了gnrh3的表达,对gnrh2、kiss2和gnih的表达无影响.GnIH多肽对生殖相关基因的不同调控表明同一前体蛋白编码的不同GnIH多肽在生殖调控中的作用不尽相同.本研究结果增加了对GnIH参与鱼类生殖调控机制的认识,为深入研究奠定了基础.     

促性腺激素调控半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵母细胞孕酮受体膜组分1的表达特征

采用qRT-PCR方法分析性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)不同发育时期卵巢卵母细胞的孕酮受体膜组分1 (PGRMC1)mRNA的表达,研究发现,在发育Ⅳ期的卵巢,处于第Ⅳ时相的卵母细胞PGRMC1 mRNA表达量最高(P＜0.05);在发育Ⅴ期的卵巢,成熟期卵母细胞的PGRMC1mRNA表达量最高(P＜0.05).采用不同浓度促性腺激素(HCG)处理卵巢发育Ⅴ期半滑舌鳎不同时相的卵母细胞,并通过qRT-PCR和Western blotting技术对其表达量变化进行检测.结果显示,20IU/mlHCG对PGRMC1 mRNA和蛋白表达的调控作用比10 IU/ml HCG作用更明显,表明PGRMC1 mRNA和蛋白表达对HCG调控作用存在剂量依存关系.HCG对半滑舌鳎不同时相的卵母细胞的调控作用效果不同,对第Ⅴ时相卵母细胞作用最明显(P＜0.05),表明PGRMC1主要在卵母细胞成熟阶段发挥作用.PGRMC1对HCG调控作用的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控,为进一步探讨PGRMC1在半滑舌鳎繁殖过程的功能提供重要基础资料.     

半滑舌鳎的生物学特性及养殖技术

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gtinther)属碟形目,舌鳎科,舌鳎属,三线舌鳎亚属,俗称牛舌头、鳎目、鳎米等。半滑舌鳎分布于朝鲜、中国、日本的近海。我国沿海均产,栖息于泥沙质海底,食性广,抗逆性强,生长速度快,主要摄食底栖无脊椎动物,体长一般为200～500mm,最大体长可达800mm,适合于我国沿海养殖。该鱼肉质细腻,味道鲜美,营养丰富。     

引起半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)鱼苗大规模死亡的神经坏死病毒病

2012和2013年,山东某育苗场15–20日龄的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)鱼苗出现暴发性大规模死亡,7 d内死亡率高达90%–100%。本研究调查了疾病的发生情况和临床特征,采集病鱼样品进行了组织病理学检查,并运用RT-PCR方法进行了病原的检测和基因序列分析。结果发现,半滑舌鳎鱼苗一般在7月和8月发病,发病时养殖水温为22–24℃。病鱼游泳行为异常,表现为上下翻游、螺旋性游动、全身大幅度波浪状浮动症状,但病鱼体表无出血和溃疡症状。组织病理检查发现,病鱼脑和视网膜组织出现严重的空泡化及坏死。病鱼样品的RT-PCR检测结果全部呈鱼类神经坏死病毒阳性。对得到的RT-PCR产物测序,进行BLAST比对,发现该病毒与鱼类神经坏死病毒的赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV)基因型的相似性达98%以上,而与鱼类神经坏死病毒的其他3个基因型：黄带拟鲹神经坏死病毒(Striped jack nervous necrosis virus,SJNNV)、红鳍东方鲀神经坏死病毒(Tiger puffer nervous necrosis virus, TPNNV)和条斑星鲽神经坏死病毒(Barfin flounder nervous necrosis virus,BFNNV)的相似性仅为71%–78%。由此可以判定,本研究发现的引起半滑舌鳎鱼苗大规模死亡的神经坏死病毒为RGNNV基因型,半滑舌鳎也是鱼类神经坏死病毒的天然宿主。该发现在半滑舌鳎疾病防治和鱼类神经坏死病毒的流行机制研究方面都具有重要意义。     

半滑舌鳎多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆和表达分析

本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。     

野生半滑舌鳎的驯养技术

摘要野生半滑舌鳎必须经过驯养后才能做为人工养殖亲鱼使用。试验结果表明，定置网捕获的半滑舌鳎比拖网捕获的成活率高，专门驯养比虾池粗养成活率高。获取野生鱼时的水温与驯养成活率关系密切，5、6、7月份，水温12～22℃时．驯养成活率为50％；8、9月份，水温高于22℃时，驯养成活率为0；11月份水温17．2～12．4℃时，成活率62．9％；12．4～7℃时，成活率36．8％。2003年5月22日～12月5日，共获取野生鱼165尾，驯养成活68尾，成活率41．2％。野生雌鱼随性腺发育程度的增加其驯养难度加大。野生鱼开口摄食是驯养成功的关键因素之一，活沙蚕是好的开口饵料。营造好的驯养环境和及时药物处理能缩短驯养时间和提高成活率。驯养雌、雄性比以1：3～4为宜。借助生殖调控措施，春、夏季获取的野生鱼秋季就可产卵，好卵占23．4％。     

半滑舌鳎室内水泥池和池塘养殖技术的初步研究

利用现有的工厂化养殖设施养成半滑舌鳎,以不投喂人工饲料的室外池塘养殖作为对照,评估一种自制沉性配合饲料的养殖效果。结果表明,在9个月的养殖期内,初始平均体重为37.2g的半滑舌鳎在投喂配合饲料的工厂化养殖条件下,平均体重达到566.4g,成活率95.5%,而室外池塘中不投饵的自然条件下养殖,平均体重仅为464.6g。