琼扩试验的应用及注意事项

<正> 琼脂扩散试验(Agar diffusion Test,简称AD)。也称免疫扩散试验。它的基本原理是抗原——抗体分子在含有电解质的琼脂中向四周自由扩散,通常是从高浓度向低浓度游动,当抗原——抗体分子相遇时,如出现沉淀线(抗原——抗体的特异结合物)可说明两者对应。因此,本法可以鉴定抗原,也可以鉴     

琼脂扩散试验操作方法及注意事项

琼脂扩散试验（简称“琼扩”）是临床中病原诊断和抗体效价测定的主要方法之一。该方法简洁、快速,在临床中应用广泛,特别适用于大量血清样品的检测和流行病学群体的定性诊断。缺点是需要时间过长,灵敏度不高。琼脂扩散试验是根据沉淀试验的原理,利用可溶性抗原和抗体在半固体凝胶中进行的相向扩散反应,当抗原、抗体的分子相遇并达到适当的比例时,就会相互结合,凝集,形成抗原-抗体的结合物,在抗原、抗体比例较适合并有电解质的存在及一定温度的条件下,形成白色可见的沉淀线,此种沉淀反应,称为琼脂免疫扩散试验,本法可用已知抗原测定未知抗体,也可以用已知抗体测定未知抗原。在传染病的实验室诊断中,常用于鸡马立克氏病抗体检测。也曾有用此法检查鸡法氏囊病、小鹅瘟、猪瘟病和炭疽等疾病的报道。现以检测鸡马立克氏病的抗体为例,将其操作方法介绍如下。     

兔粘液瘤病的血清学诊断

1琼脂（糖）免疫扩散试验 该方法既能检测抗原又能检测抗体。由于粘液瘤病毒的抗原成分比较复杂,与相应抗血清进行琼脂扩散试验时可形成多条沉淀线,所以试验应出现三条沉淀线。如果试验血清中含有抗体,三条线中至少有一条弯曲向抗原滤纸条,否则成直线。如果试验血清中含有抗原,则至少有一条弯向标准血清滤纸条。     

兔粘液瘤病的血清学诊断

<正>1琼脂(糖)免疫扩散试验该方法既能检测抗原又能检测抗体。由于粘液瘤病毒的抗原成分比较复杂,与相应抗血清进行琼脂扩散试验时可形成多条沉淀线,所以试验应出现三条沉淀线。如果试验血清中含有抗体,三条线中至少有一条弯曲向抗原滤纸条,否则成直线。如果试验血清中含有抗原,则至少有一条弯向标准血清滤纸条。样品采集。被检兔的全血或血清,并制备琼脂板。试验方法。将含标准血清和抗原的滤纸条放置于琼脂表面,含被检血清或全血的滤纸条放置于标     

禽流感的检疫检验

在禽流感的检验中,琼脂扩散试验简便、快捷,是化验室检验中常用的方法之一。该试验是应用抗原和抗体在琼脂凝胶中辐射扩散,当两者比例适合时,于两孔之间形成致密的白色沉淀线,可用于检测禽流感病毒的NP或MP抗体。用已知的阳性血清检测未知抗原时,可用于病毒的鉴定;用已知的阳性抗原检测未知血清时,可用于疫病的诊断和血清学调查。但在实际监测中发现母源抗体对试验的影响不容忽视。     

监测和诊断禽流感

常规鉴定禽流感病毒的方法是血凝试验 (HA)，血凝抑制试验 (HI)，琼脂扩散试验 (AGP)以及病毒中和试验 (NT)等。 　　检测采取的病料主要是血液、鸡蛋、肝脏等。 　　琼脂扩散试验可以检测出各种血凝亚型的病毒，但检出率较低，往往检测为阴性的鸡群，并不能保证没有感染禽流感。血凝抑制试验可以用于区别禽流感的血清亚型，且敏感性高，但一种血凝抗原只能检出相应的抗体，而不能查出其他血清亚型抗体。不过一个地区流行的禽流感病毒，其血清亚型在一定时间内是相对稳定的，所以用该地区流行的病毒株抗原做血凝抑制试…     

免疫血清学技术及其在蚕病诊断上的应用(续1988年本刊第二期)

<正> (一)、家蚕抗血清效价的测定什么叫抗血清效价:抗血清效价是抗体与抗原发生凝集或沉淀的最高稀释倍数。在蚕病抗血清方面测定抗血清效价的方法常用的有环状沉淀试验及琼脂双向扩散试验、玻片凝集反应三种:     

三种琼脂扩散沉淀试验诊断成年鸡马立克氏病的比较

关于鸡MD特异性诊断,琼脂扩散沉淀试验具有特异性高、方法简单易行等优点。然而以往的研究多局限于实验感染马立克氏病毒的鸡,而用琼脂扩散试验检查生产鸡群的羽囊抗原和血清抗体的报道较少。为此,     

禽用琼扩抗原主要检测特点及其使用注意事项

免疫琼脂扩散是免疫沉淀反应的一种形式,抗原抗体在琼脂凝胶内扩散,特异性的抗原与抗体相遇后,在凝胶内的电解质参与下发生沉淀,形成可见的沉淀线。此方法在禽病诊断上应用广泛,近年来禽网状内皮增殖病、马立克氏病、传染性法氏囊病等琼扩抗原相继获得了国家新兽药注册证书。     

传染性胃肠炎病毒的甲醇沉淀反应

在PH4,5,6,7和含甲醇15％,25％和30％的条件下作传染性胃肠炎病毒的甲醇沉淀试验。对上清液和沉淀物作可溶性抗原的补体结合试验,琼脂扩散试验和蚀斑形成单位试验以及电子显微镜检查。无可见的琼脂扩散抗原和绝大多数补体结合抗原能够获得病毒。绝大多数的病毒颗粒经过申醇处理之后,病毒无包膜子粒,但保留其感染性。甲醇已被应用于大规模地纯化病毒。例如,纯化口蹄疫病毒,其最初阶段是由20％(V/V)的甲醇沉淀来获得。传染性胃肠炎(简称TGE,下同)病毒的纯化是进行疫苗研究,亚单位分析以及免疫电子显微镜检查所需要的。蔗糖梯度离心可作为纯化TGE病毒方法,但因离心机和离心力的大小关系常使实验室里受到限制。也可用聚乙二醇沉淀方法,但在沉淀物中抽提病毒较为困难,而又必须除去聚乙二醇来恢复蚀斑的形成活性。Garwes和Pocock试图用甲醇沉淀TGE病毒,但又不能改进病毒作为抗原的效能。本报告的目的在于获得最适宜的PH值和甲醇的浓度,并对甲醇沉淀法在研究工作中的功用作一个估价。甲醇沉淀物和上清液作病毒滴度试验,琼脂扩散试验,抗原补体结合试验和作电子显微镜检查。     

禽用琼扩抗原主兽检测特点及其使用注意事项

免疫琼脂扩散是免疫沉淀反应的一种形式,抗原抗体在琼脂凝胶内扩散,特异性的抗原与抗体相遇后,在凝胶内的电解质参与下发生沉淀,形成可见的沉淀线.此方法在禽病诊断上应用广泛,近年来禽网状内皮增殖病、马立克氏病、传染性法氏囊病等琼扩抗原相继获得了国家新兽药注册证书.     

琼脂扩散法检测卵黄抗体效价影响因素的分析

抗体琼脂扩散试验是当前卵黄抗体效价测定的主要方法之一,该方法简洁、快速非常适合于临床中应用,但是该方法容易受到多种因素的影响而导致试验结果判断的不准确。本文就琼脂扩散试验中抗原抗体本身性质、反应特点、最适比例、可逆性、总量以及琼脂、水     

琼脂扩散试验结果影响因素的分析

琼脂扩散试验是临床中病原诊断和抗体效价测定的主要方法之一,该方法简洁、快速,在临床中应用广泛。但是该试验容易受到多种因素的影响而导致试验特异性、敏感性、精确性以及结果判断的不准确。本文就抗原、抗体性质、琼脂板以及反应条件等影响因素对琼脂扩散试验的影响进行了逐一分析。     

马传贫琼扩试验方法的一点改进

在临床检验中,对马传染性贫血病琼脂扩散沉淀反应的试验方法做了一点改进,使标准阳性血清既能监测抗原和揭发弱阳性被检血清,又有监视琼脂扳,识别假阳性反应的作用。现行马传贫琼扩反应方法在临床检验中有时发现检出的弱阳性(接近被检血清孔的沉淀线向抗原侧弯转)血清不能重复而成为假阳性。为此,每次检出的弱阳性血清都要经过复试后才能确定。分析和验证出现假阳性反应的原因有三种:补底不确实;滴加抗原和血清时不小     

旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物(ES)抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS-PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45 ku、49 ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

禽流感琼脂扩散试验抗原制备方法的研究

禽流感琼脂扩散试验(AGP)是用禽流感病毒的内部抗原(RNP)检查相应的抗体,是特异性血清学诊断方法,它较鉴定亚型特性的血凝抑制试验(HI)方法具有较广泛的应用价值。目前普遍应用它检查禽流感。一些国家制作禽流感的琼扩试验抗原主要是用人工接种鸡胚的尿囊膜,将其制成乳剂,经反复冻融后作为抗原,其中混有尿膜组织及血液成分,因此,在一定程度上干扰试验结果。我们在试验中,用接种的鸡胚尿液制造抗原,获得了良好的结果,现报告如下。     

用对流免疫电泳诊断猪瘟的试验

对流免疫电泳技术是 Graber 氏等(1953)将琼脂扩散和免疫电泳结合进行抗原抗体的检测。它具有方法简便,特异性强和出现结果快速等优点。其原理是溶液中的带电质点,在电场的作用下向着相反的电极移动称为电泳。由于抗原在偏碱的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动;而抗体球蛋白由于接近等电点,借内渗流的作用与抗原相反缓慢的移向负极。通过将抗原抗体孔作以适     

影响琼脂扩散检测禽流感的若干因素

在诊断禽流感的工作中，一些技术条件对免疫扩散反应有一定的影响。首先遇到的问题，就是抗原和阳性对照血清反应结果不发生肉眼可见的致密沉淀线。我们知道，沉淀是蛋白质性沉淀原在含有抗体（沉淀素）的免疫血清影响下自溶液中发生沉淀的现象，沉淀作用的条件之一要有特异性的沉淀血清。当遇到抗原与抗体不发生作用或者是模糊不清的沉淀线，除抗原和阳性血清自身问题外，另一方面是技术条件的影响。如琼脂深度、酸碱度、抗原与抗体的比例、反应孔的排列和距离、琼脂板孔内表面干燥及琼脂板与平皿底部部分脱离等，使特异性的抗原和抗体（阳…     

鸡A型流感病毒的分离及初步鉴定

从发病率56％而死亡率15％的罗曼父母代蛋种鸡群中,分离到4株A型流感病毒。这些分离毒株可在鸡胚中传代,经尿囊腔途径接种10日龄鸡胚,可80～100％致死鸡胚,能凝集鸡的红细胞,且不被新城疫阳性血清所抑制。用这些分离毒株制备成的琼脂扩散抗原与禽流感阳性血清在琼脂扩散试验中出现明显的白色沉淀线。发病鸡康复后采血制备的血清能与禽流感琼扩抗原在琼脂扩散试验中出现明显的白色沉淀线。分离毒SX_(9401)株具有良好的免疫原性。根据以上实验,所分离到的病毒为鸡A型流感病毒,其血清亚型有待于进一步鉴定。本研究从病原学角度证实禽流感在四川省的存在。     

酸性红73人工抗原的合成与鉴定

为进一步制备酸性红73新型人工抗原,试验采用N,N-羰基二咪唑(CDI)法合成酸性红73的免疫原和包被原,经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定偶联成功,酸性红73与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)的偶联比分别为9∶1和5∶1。免疫后所得兔源多克隆抗体,采取双向琼脂扩散实验和方阵滴定法确定包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为1∶4000、1∶8000。