琯溪蜜柚黄龙病病原的克隆及序列分析

Guan溪蜜油是中国大陆柚类中的优质品种。近年来，在福建省的产地发现Guan溪蜜油叶片表现斑驳的病树，其叶片斑驳与柑桔黄龙病的叶片病状十分相似。据实验结果证明：该病能通过病梢嫁接传染到柚和柑桔的健苗；在电镜下观察到病株韧皮部寄生着大量BLOs，其形态和构造均与柑桔黄龙病病原（Liberobacter asiaticum)相似，经PCR扩增与Southern Blot分子杂交测定，表明该病原DNA PCR产物与柑桔黄龙病病原PCR产物之间具有很高的同源性。初步认为该病很可能是柑桔黄龙病引起的。为了进一步明确该病与柑桔黄龙病的关系，对病原DNA片段进行扩增、克隆和序列分析，并与柑桔黄龙病病基因相应序列进行比较，结果表明该病原与亚洲柑桔黄龙病病原（Lasiaticum）相应基因序列的同源率达94．2％，而与非洲柑桔黄龙病病原（L.africa num)的同源率仅为75．0％。进一步证明Guan溪蜜油叶片斑驳是柑桔黄龙病引起的，其病原是L.asiaticum中的一个成员。     

柑桔黄龙病PCR检测技术体系优化分析

根据柑桔黄龙病病菌亚洲种16S rDNA基因序列设计特异引物,建立了检测柑桔黄龙病的快速PCR方法,并研究了PCR体系的各主要组分对PCR反应的影响,确立了黄龙病菌的PCR检测优化体系。应用PCR检测方法对大田植株及柑桔脱毒苗进行抽样检测,结果表明:PCR检测优化体系具有快速、灵敏度高、重复性好、检测成本低等优点,适用于柑桔黄龙病的早期诊断及无病毒苗木的大量检测。     

湖南省柑桔良种的脱毒与检测研究

1989～1992年经高温预热处理——微芽茎尖嫁接获得30个柑桔优良单株的79株茎尖嫁接试管苗.有10个单株的18株茎尖苗经指示植物、电镜及双向聚丙烯酰胺凝胶电泳检测证明不带裂皮病、碎叶病、衰退病和黄龙病,确定为无毒茎尖苗.另有10个单株的23株茎尖苗已初步检测不带上述各种病害.电镜检测20个单株母本树中,有10个观察到衰退病毒,4个观察到碎叶病毒,分别为供检单株的50%和20%.在双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测的25个单株母本树中,有8个带有裂皮类病毒,占供检单株的32%.指示植物嫩枝嫁接或边劈可提高检测效率.     

特早熟蜜桔的无病毒苗木引种栽培技术

我国柑桔存在着碎叶病、裂皮病、黄龙病、衰退病等病毒及细菌病害，而我市主要受黄龙病、衰退病的为害，尤其近几年为害日益严重。柑桔是我市的主栽水果，而栽培无病毒苗木是防治柑桔病毒病和黄龙病的有效途径。为了防控柑桔黄龙病。我站于2002年10月从中国农科院柑桔研究所引进宫本、大浦5号、日南一号等柑桔的无病毒接穗，按照无病毒苗木繁育规程嫁接于永安市柑桔无病毒苗木繁育中心网室内。2003年10月定植于展示园，现将连续3年观察结果介绍如下。     

柑桔黄龙病诊断技术研究进展

柑桔黄龙病是一种毁灭性病害,介绍了柑桔黄龙病的诊断发展过程,具体包括柑桔黄龙病的症状诊断法、指示植物诊断法、生化指标鉴定法、电镜观察法、血清学诊断法、DNA探针杂交法以及PCR扩增法等技术。     

玉环柚脱毒苗技术操作规程

随着全球气温上升,柑桔木虱不断从南向北扩展,柑桔黄龙病已经成为柑橘类重大病害,而脱毒苗培育成为各地最有效的防治措施,玉环柚脱毒苗技术作规程研究为同类柑橘黄龙病的防治提供了很好的探索与示范。其技术操作规程主要包括:溴甲烷应用技术操作规程、无病毒砧木苗培育技术操作规程和脱毒嫁接苗培育技术操作规程。     

沙田柚黄龙病病原β-操纵子DNA片段的克隆与序列分析

采集表现斑驳症状的沙田柚叶片,根据柑桔黄龙病特异保守区域β-操纵子序列设计引物,通过对其病叶脉总DNA进行PCR扩增、扩增产物纯化、与pMD18-T Vector连接、转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH 5a菌株、筛选阳性克隆重组子、重组子测序,并将测序结果与柑桔黄龙病病原β-操纵子部分DNA相应序列进行比较.结果表明,引起沙田柚斑驳症状的病原与亚洲柑桔黄龙病原(Liberobacter asiaticum)相应序列的同源率为99%,而与非洲柑桔黄龙病病原的同源率仅为79.9%.因此,从分子水平上证明沙田柚斑驳症状是由黄龙病病原侵染所致,该病原属于亚洲种中的一个成员.     

广东柑桔无病毒繁殖体系的建立与开发利用

柑桔黄龙病作为柑桔生产上的一种毁灭性病害,严重制约广东柑桔产业的发展。阐述了通过广泛选育种和品种提纯复壮、脱毒(热处理法和茎尖嫁接法)及鉴定(指示植物或PCR鉴定)的途径建立柑桔无病毒繁殖体系,最终获得柑桔无病毒种苗,并在产区推广应用。该体系的建立,对遏制广东柑桔黄龙病等病毒病的蔓延,恢复、促进广东柑桔产业的可持续发展起到重要作用。     

柚类果树叶片斑驳病的病原鉴定与检测

柚类是柑桔中的一类重要品种,在我国有广泛的分布、近年来,在福建等产区发现柚类病树日趋２增多、基病状为叶片斑驳、小果、植株矮化、暂称为叶片斑驳病。本有通过组织嫁接从病柚树传染到柚健苗和芦柑健苗。在电下观察,其病原功体的形态和细胞壁构造与柑桔黄龙病的病原十分要似。应用柑桔黄龙病病原ＤＮＡ的特异性引物进行ＰＣＲ试验产生的ＰＣＲ产物,其分子量与柑桔黄龙病病原ＤＮＡＰＣＲ产物的基本相同,为５６３ｂｐ;以及应     

快速检测柑桔黄龙病病原的研究

应用ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原ＤＮＡ进行体外扩增,可建立一套快速,准确,有效的检测该病原的方法,研究结果表明：ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原的检测具有很强的特异性,只有感染了黄龙病病原的样品,ＰＣＲ才呈阳性反应。文章报道了应用ＰＣＲ技术能检测已带病但尚未症状的柑桔黄龙病病株,该检测技术可以对柑桔黄龙病进行早期诊断,及是地控制带病苗木的传播,这对选育无病苗木及病害的综合治理具有很高的应用价值。     

梅州市柑橘黄龙病的调查与综合防控措施

柑橘黄龙病(cirtus Huanglongbing,HLB)是细菌性病害,本文作者通过聚合酶链式反应(PCR)对梅州地区柑橘黄龙病发生情况进行调查,对梅州地区一共761个疑似黄龙病样本进行检测分析,并在此基础上提出梅州市柑橘黄龙病的综合防治策略,为梅州的柑橘产业发展提供参考。     

湘南地区柑橘黄龙病的PCR检测

针对近年湘南部分柑橘产区出现叶片黄化、果实畸形及全株矮化、橘树枯死等柑橘黄龙病疑似症状,应用多聚酶链式反应(PCR)技术对湘南8个柑橘产区的柑橘进行了检测,结果发现6个柑橘产区有柑橘黄龙病为害.同时建立了一套快速、准确的柑橘黄龙病PCR检测技术体系.     

柑橘黄龙病检测技术研究进展

冠以“柑橘（Ｃｉｔｒｕｓ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃｏ．）癌症”之称的黄龙病暂被认为是由韧皮部难养细菌引起的对柑橘产业造成严重威胁的毁灭性病害,它给柑橘产业的健康发展造成了严重的威胁．鉴于柑橘黄龙病检测技术对柑橘黄龙病防治的重要性,文章对柑橘黄龙病及其病原、黄龙病的检测技术进行了综述,并对柑橘黄龙病的检测技术未来发展进行了展望.     

柑橘黄龙病的传播途径及鉴定方法

在生产中,柑橘类果树由于长期无性繁殖,往往感染1种或几种病毒、类病毒病害。柑橘黄龙病是一种毁灭性病害,大多数柑橘品种都易感病,主要发生在亚洲和非洲的40多个国家。全面认识柑橘黄龙病的传播途径及鉴定方法,对柑橘类果树生产具有重要的指导意义。     

柑橘黄龙病菌PCR阳性病株空间分布格局与参数特征应用研究

为了揭示浙江柑橘黄龙病菌PCR阳性病株空间分布信息和染病特征,2017—2018年对7个柑橘黄龙病发生样地2 900株橘树进行黄龙病菌PCR检测,按10株1样方取得290组样本资料,应用聚集度指标法对其空间分布型进行数据测定,结果达到C>1、I>0、K>0、C_A>0、M^*/$\bar{x}为了揭示浙江柑橘黄龙病菌PCR阳性病株空间分布信息和染病特征,2017—2018年对7个柑橘黄龙病发生样地2 900株橘树进行黄龙病菌PCR检测,按10株1样方取得290组样本资料,应用聚集度指标法对其空间分布型进行数据测定,结果达到C1、I0、K0、C_A0、■,均为聚集分布格局,表明柑橘黄龙病菌PCR阳性病株田间分布趋向聚集分布。经Iwao的M~*-线性模型回归检验表明,柑橘黄龙病菌PCR阳性病株空间分布的基本成分是个体群,病株间相互吸引,表现有明显的发病中心;经Taylor的■幂法则模型检验分析表明,黄龙病菌阳性病株的空间分布具有密度依赖性,阳性病株密度越高越趋向聚集分布,即聚集强度随阳性率上升而增强。其理论抽样数模型为■及序贯抽样公式为T_n=1.6976/[D■+0.9296/n]。应用这些参数特征对提高田间柑橘黄龙病早期预警效率和决策防控具有良好的指导意义。     

正常管理果园柑桔木虱种群数量年消长规律调查及与次年黄龙病发生率的相关性分析

柑桔木虱没有得到有效控制是正常管理柑桔园黄龙病发生严重的最重要原因,弄清这些果园柑桔木虱种群的年发生规律是有效防治柑桔木虱和柑桔黄龙病的基础.6年的系统调查结果表明,10～12月份是木虱种群数量最多的时期,其次分别是9月、1月和5月.9～12月的柑桔木虱数量与次年的柑桔黄龙病发生率呈显著正相关.     

柑橘黄龙病病原培养及分子检测技术研究进展

柑橘黄龙病（Huanglongbing）由韧皮部杆菌属细菌（Candidatus Liberobacter sp.）侵染引起,是柑橘生产上的毁灭性病害,当前正在世界柑橘产区迅速蔓延,已成为制约柑橘产业健康发展的关键因素之一。介绍了柑橘黄龙病的症状以及病原的分离培养研究进展,阐述了病原的分子检测技术,包括PCR、双重PCR、实时荧光定量PCR和LAMP快速检测技术,并对病害的防控进行展望。     

柑桔黄龙病防控技术研究与应用

根据柑桔黄龙病病原PCR检测结果,分析其病原检出率不高与检测方法、检测部位等相关,提供了"红鼻果"作为芦柑黄龙病田间诊断的依据。通过田间调查,分析总结了至2000年前永春县柑桔黄龙病长期未蔓延危害的原因在于果园管理均衡,施药次数较多,柑桔木虱没有大量生存繁衍的空间;而近年柑桔黄龙病蔓延危害的主要原因是"三农"状况发生变化,劳力转移,失管果园多,病源多、柑桔木虱大量危害,病害迅速传播。论述了近年永春县柑桔黄龙病防控技术的实践应用与取得的成效;指出柑桔规模化连片种植,分散管理,难以统一落实防控措施是黄龙病防控工作的难点。探讨了黄龙病产区发展柑桔生产的措施。     

基于Mixup算法和卷积神经网络的柑橘黄龙病果实识别研究

目的 解决传统柑橘黄龙病果实图像识别方法依赖人工设计特征、费时费力、网络模型参数量大、识别准确率低等问题。方法 首先,采集柑橘黄龙病的果实图像,并对其进行翻转、旋转、仿射、高斯扰动等数据扩增;采用Mixup算法建立样本之间的线性关系,增强模型识别数据样本的鲁棒性;然后,迁移Xception网络在ImageNet数据集上的先验知识,提出一种基于Mixup算法和卷积神经网络的柑橘黄龙病果实识别模型-X-ResNeXt模型;最后,采用动量梯度下降优化方法,有效地减缓震荡影响,并且有效地加速模型向局部最优点收敛。结果 采用数据扩增数据集训练的X-ResNeXt模型准确率可以达到91.38%;在进行迁移学习优化后,训练时间减少了432 s,准确率提升为91.97%;结合Mixup混类数据增强进一步训练,模型准确率提升为93.74%;最后,利用动量梯度下降方法进行模型收敛优化,最终模型的准确率达到94.29%,比Inception-V3和Xception网络分别提高了3.98%和1.51%。结论 在数据量较少情况下,降低模型复杂度并迁移已有先验知识,有助于模型性能提升;Mixup混类数据增强方法有利于提高模型识别柑橘黄龙病果实图像样本的适应性,提升柑橘黄龙病果实识别模型性能;X-ResNeXt模型在准确率与召回率指标上优于经典识别模型,可为柑橘黄龙病的高精度、快速无损识别提供参考。