NLRP3炎症小体激活在急性大鼠乳腺炎中的作用

为探讨炎症小体NLRP3在大肠杆菌诱发的实验性大鼠乳腺炎中的作用,36只SD大鼠随机分为对照组、大肠杆菌组和抑制剂组。其中：大肠杆菌组于大鼠产后72 h经乳头管注入2×10¹² CFU/mL大肠杆菌悬液100μL/侧到第4对乳腺(两侧)内;抑制剂组在注射大肠杆菌悬液前0.5 h腹腔注射500 mg/kg格列本脲;对照组注射等量灭菌生理盐水,注射后12 h收集血清及乳腺组织。结果：大肠杆菌诱发能显著提高乳腺组织NLRP3及衔接蛋白ASC和炎症相关蛋白激酶Caspase-1的表达,促进炎性细胞因子IL-1β的释放,从而引起N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活性及丙二醛(MDA)水平的显著升高。NLRP3的抑制剂格列本脲预处理能抑制NLRP3及ASC和Caspase-1的表达,降低炎性细胞因子IL-1β的释放,下调NAGase的活性和MDA水平。可见NLRP3炎症小体的激活在大肠杆菌诱导的实验性乳腺炎症反应中发挥了重要的作用。     

犬乳腺肿瘤中MUC1的表达及临床意义

为了检测MUC1在乳腺肿瘤的侵袭、转移及病理分级中的作用,本研究通过real-time PCR检测了47例犬乳腺肿瘤组织(20例良性,27例恶性)和3例健康犬乳腺组织中MUC1基因的转录情况,通过IHC检测MUC1在犬乳腺组织中的表达情况,并分析二者与肿瘤恶性程度分级的关系。结果发现:MUC1基因和MUC1在犬乳腺肿瘤组织中高表达,且在不同的恶性分级中差异显著(P0.05)。研究显示MUC1基因和MUC1可作为犬乳腺肿瘤诊断和恶性程度评估的重要指标之一。     

犬流感病毒诱导的Beagle犬NLRP3炎性小体相关基因表达谱

炎症反应是机体对抗异物的一种先天性免疫反应,NLRP3(nod-like receptor family, pyrin domain-containing 3)炎症小体途径是炎症反应的主要途径之一,在机体对抗病原微生物反应中起着重要的作用。为了深入研究犬的NLRP3炎症小体在犬感染H3N2犬流感病毒(CIV)后的变化,对未感染以及感染H3N2 CIV早期(3 d)和后期(7 d)的比格犬心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、气管和淋巴结组织进行病理学检测。结果发现,感染H3N2 CIV的比格犬,在早期没有明显的病理变化,炎症反应不明显,但后期炎症反应明显增强。通过荧光定量PCR检测比格犬感染H3N2 CIV后NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-6、IL-1β、IL-18和TNF-α等炎症相关基因的转录水平,发现宿主在感染CIV早期炎症相关基因转录水平显著降低,而在感染H3N2 CIV后期的炎症相关基因转录水平比早期显著升高。进一步克隆犬NLRP3、ASC和Caspase-1基因并进行原核表达,制备多克隆抗体,通过免疫组织化学方法对未感染以及感染H3N2 CIV早期和后期的比格犬组...     

NLRP3炎症复合体的体外构建

为体外构建NLRP3炎症复合体,利用PCR方法扩增目的基因NLRP3、IL-1β、ASC和Pro-Caspase-1,分别连接到相应的载体中,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA,利用Lipofectamine2000试剂转染到HEK293T细胞后,采用Western blot方法验证各蛋白的表达情况;通过质粒共转染体外构建NLRP3炎症复合体,采用ELISA方法检测IL-1β生成情况。结果显示,3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA重组质粒均被成功构建,各蛋白于HEK293T细胞内均被成功表达;质粒共转染后ELISA检测到高水平的IL-1β生成,表明NLRP3炎症复合体体外构建成功。NLRP3炎症复合体在体外的成功构建,为进一步研究其激活机制奠定了基础。     

犬乳腺肿瘤组织病理学观察及腱糖蛋白C表达的检测

为了探讨腱糖蛋白C(TNC)表达与犬乳腺肿瘤生物学关系,对23例犬乳腺肿瘤临床病例进行病理学观察及分类,然后采用免疫组化SABC方法检测TNC蛋白在23例犬乳腺肿瘤和2例犬正常乳腺组织中的表达情况。结果显示:23例病例中,良性肿瘤有7例,占30.43%;恶性肿瘤有13例,占56.52%;增生病变有3例,占13.05%。在良性肿瘤中良性混合瘤最多,为3例,其余2例为导管内乳头状腺瘤,1例复杂腺瘤及1例纤维腺瘤。恶性肿瘤中,5例未分化癌,3例癌肉瘤,2例筛状癌,2例固体癌,1例纤维肉瘤,1例混合瘤引起的癌。TNC蛋白主要表达于细胞外基质。犬恶性乳腺肿瘤中,TNC蛋白阳性表达率为46.15%(6/13);良性乳腺肿瘤中,其阳性表达率为42.85%(3/7);乳腺增生病变和正常乳腺组织中,未见其表达。研究结果表明,TNC蛋白可以为犬乳腺肿瘤的鉴别诊断提供参考。     

SRC-3在犬乳腺癌中的表达及分析

犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种母犬肿瘤疾病。类固醇受体辅助活化因子-3(Steroid receptor activation factor 3,SRC-3)与多种肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关,已成为一个潜在的用于癌症诊断的癌基因标记物。本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的68例乳腺肿瘤组织SRC-3的表达情况。结果显示,犬恶性乳腺肿瘤组织中的SRC-3蛋白表达率高于正常与良性乳腺肿瘤组织。结果表明,SRC-3在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的参考指标。     

Ki-67在犬乳腺肿瘤的表达与分析

本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的6个正常乳腺组织和135例乳腺肿瘤组织(良性30例,恶性105例)Ki-67的表达率。结果犬乳腺肿瘤组织中的Ki-67蛋白表达率明显高于正常乳腺组织(P0.05);犬恶性肿瘤组织中的Ki-67蛋白表达率明显高于良性肿瘤(P0.05)。表明Ki-67在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的指标。     

奶牛乳腺炎差异表达lncRNA BCL2对炎症及凋亡相关mRNA表达的影响

本研究旨在探讨长链非编码RNA BCL2(lncRNA BCL2)对奶牛乳腺上皮细胞炎症及凋亡中的调控作用。利用RNAhybrid、Targetscan和miRwalk软件分析lncRNA BCL2海绵吸附的miRNAs及其所靶向的mRNAs,并对这些靶基因进行KEGG通路富集分析；采用qPCR和lncRNA超表达技术研究了lncRNA BCL2在乳腺组织和乳腺上皮细胞炎症中的表达情况及其对乳腺上皮细胞炎症和凋亡相关基因表达的影响。结果发现，与对照组相比，lncRNA BCL2在临床乳腺炎奶牛的乳腺组织和LPS诱导炎症的乳腺上皮细胞中的表达量均显著下调(P<0.05);在lncRNA BCL2超表达的情况下，乳腺上皮细胞内炎症因子IL-1β与IL-8及炎症信号通路关键基因NF-κB(p65/p50)的表达量均显著上调(P<0.05);细胞凋亡相关的CASP3和CASP9基因的表达显著下降(P<0.05),BCL2表达量显著上调(P<0.001),且BCL2与BAX比值大于2。该结果与生物信息学分析结果相符，表明lncRNA BCL2可能通过lncRNA BCL2...     

PTEN 基因在犬乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义

有关酪氨酸磷酸酶基因（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosometen,PTEN）在乳腺肿瘤中的检测在人医早有报道。为了研究PTEN基因在犬乳腺肿瘤组织中的表达情况,笔者运用实时荧光PCR定量检测了38例不同的犬乳腺肿瘤组织（包括15例良性乳腺肿瘤和23例恶性乳腺肿瘤）、4例正常犬乳腺组织。结果发现：PTEN基因在犬恶性乳腺肿瘤组织中表达量明显低于其在良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织中的表达量,两者差异极显著（P〈0.001）;PTEN在良性乳腺肿瘤组织中的表达与正常犬乳腺组织相比,差异不显著（P〉0.05）;发生了淋巴结转移的乳腺癌PTEN基因的表达量与未发生转移的乳腺癌组织的表达量间差异亦不显著（P〉0.05）,且PTEN的表达量与肿瘤组织的大小和发病动物年龄无关。结论：PTEN蛋白表达异常可能与乳腺肿瘤发生、发展相关,可考虑作为判断犬乳腺肿瘤生物学行为和预测的指标。     

实时荧光定量PCR对犬乳腺肿瘤组织TNFR1基因的定量检测

乳腺肿瘤是母犬中最为常见的肿瘤,运用实时荧光定量PCR检测了37例犬乳腺肿瘤病例和37份正常乳腺组织.结果表明:犬乳腺肿瘤组织中肿瘤坏死因子受体(TNFR1)的表达量显著低于正常对照组织(P<0.05).该试验结果说明,犬乳腺肿瘤的发生很可能与TNFR1表达降低有关,为深人研究肿瘤形成的分子机理提供了重要参考.     

蜂胶对细菌脂多糖刺激下奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接蛋白的影响

本试验旨在研究中国蜂胶乙醇提取物（ethanol extract of Chinese propolis，EECP）对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接渗透性的影响。EECP中总酚酸和总黄酮含量测定采用福林酚法和硝酸铝法，并建立LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，MAC-T）炎症模型，采用CCK-8法测定EECP对MAC-T相对增殖率的影响，利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）评估EECP对LPS诱导的MAC-T细胞炎症相关因子（IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β）相对mRNA转录水平；以及对紧密连接蛋白（occludin、ZO-1）相对mRNA转录水平进行检测，并进一步利用免疫荧光技术对紧密连接膜蛋白进行定位，确定EECP对LPS诱导MAC-T细胞炎症紧密连接渗透性的影响。结果显示：EECP中总酚酸含量为106.35 mg没食子酸当量（GAE）·g^-1、总黄酮含量为320.85 mg芦丁当量（RE）·g^-1；CCK-8结果显示EECP的安全浓度为0~15 μg·mL^-1，并可有效提高LPS刺激下MAC-T的活力；LPS刺激显著增加了细胞炎症相关因子IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量（P<0.001）；但2.5~15.0 μg·mL^-1 EECP预处理显著降低了IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量；与此类似，LPS刺激显著抑制了紧密连接蛋白基因（occludin、ZO-1）mRNA的转录量（P<0.01），而EECP预处理后紧密连接蛋白基因（occludin和ZO-1）mRNA的转录量显著增加（P<0.05）；免疫荧光染色试验也证实EECP能通过上调紧密连接蛋白（occludin、ZO-1）的表达，缓解LPS诱导的乳腺上皮细胞屏障功能紊乱。该结果证实，EECP对细菌脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症具有良好的保护作用，这为利用中国蜂胶预防奶牛乳腺炎提供了试验基础。     

Effects of High Copper on Inflammatory Factors and Cell Proliferation in Rat Kidney Cells

The purpose of this research was to investigate the effect of copper poisoning on the expression of inflammatory factors and cell proliferation in renal tissues of rat. In this study, 32 healthy rats aged 20 days were selected and randomly divided into 4 groups, 8 in each group. The rats were fed as follows: The copper concentration in the control group was 15 mg·kg^-1; high-copper group I: 30 mg·kg^-1; high-copper group Ⅱ: 60 mg·kg^-1; high-copper group Ⅲ: 120 mg·kg^-1. After continuously feeding for 6 months, the mRNA and their proteins expression of Ki-67, PCNA, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, NF-κB, TNF-α in renal tissues were detected. The results demonstrated that the relative expressions of Ki-67,PCNA mRNA and proteins in renal tissues were significantly decreased with the increase of copper content in feed (P<0.05). Meanwhile, the mRNA expression levels of inflammatory factors including IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, NF-κB, TNF-α in renal tissues were significantly increased (P<0.05). Besides, the relative expression of IL-1β protein was up-regulated in a dose dependent manner, and the relative expression levels of IL-6 and IL-18 proteins increased first and then decreased. In summary, the finding suggested that high copper stimulation inhibited the cell proliferation of rat kidney tissue, promoted the expression of inflammatory factors, and caused inflammatory damage.     

猪舍细颗粒物促进猪原代肺泡巨噬细胞向M1极化

旨在研究猪舍细颗粒物（PM_2.5）对猪原代肺泡巨噬细胞（PAMs）精氨酸代谢、炎症因子表达和极化标志物表达的影响。利用支气管肺泡灌洗方法,体外分离PAMs,细胞纯化后,利用Diff-quik染色和F4/80标记鉴定PAMs,并测定细胞活力。将纯化培养的PAMs分为对照组和PM_2.5处理组（50 μg·mL^-1）,继续培养4、8和12 h,测定细胞活力,收集细胞上清测定一氧化氮（NO）的含量,裂解PAMs测定精氨酸酶的活性,并采用RT-PCR检测PAMs炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-10以及M1、M2型巨噬细胞标志物CD80和CD206的表达水平。结果显示,通过支气管肺泡灌洗方法成功分离培养了PAMs,并发现PAMs的细胞活力随着培养时间的延长逐渐降低（P<0.05）。PM_2.5处理PAMs,显著提高了细胞上清中NO含量（P<0.05）,显著降低了细胞精氨酸酶的活性（P<0.01）,并显著提高了细胞炎症因子IL-1β和TNF-α mRNA表达水平（P<0.01）,降低了IL-10 mRNA表达水平（P<0.05）。另外,PM_2.5处理PAMs早期,显著提高了CD80 mRNA表达水平（P<0.01）,在后期显著降低CD206 mRNA表达水平（P<0.01）。综上表明,猪舍PM_2.5促进了PAMs向M1表型极化,促进了炎症的发展。     

HMGB1与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性分析

旨在探究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性,本研究将BALB/c小鼠随机分为空白对照组（n＝10）,感染后4周组、6周组和HMGB1抑制剂组（n＝5）,进行血常规及生化检测,观察肝病理学及Masson染色情况、荧光定量PCR检测HMGB1、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、α-SMA、Col1α1、TGF-β1、Smad2和Smad3的转录水平。结果显示：感染后4周,小鼠谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、肝组织HMGB1、α-SMA、TGF-β1、IL-6和 TNF-α的转录水平均显著或极显著升高（P<0.05或P < 0.01）;感染后6周,小鼠WBC、Neu、Mon、Eos、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和ALT极显著升高（P<0.01）,肝组织HMGB1、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、α-SMA、Col1α1、TGF-β1、Smad2和Smad3的转录水平均显著或极显著升高（P<0.05或P<0.01）;感染后6周小鼠肝虫卵聚积处伴有炎性细胞浸润和胶原纤维增生;HMGB1抑制剂可显著降低小鼠血清ALT值和肝组织HMGB1、α-SMA、TGF-β1、IL-6和TNF-α的转录水平（P<0.05）。综上表明,HMGB1与日本血吸虫病肝炎症和纤维化具有一定相关性。     

奶牛乳腺炎模型的建立及炎症相关因子基因mRNA转录水平的分析

旨在探讨金黄色葡萄球菌（S.aureus）型和大肠杆菌（E.coli）型乳腺炎奶牛乳腺组织的炎症相关因子基因的mRNA转录水平。将10⁵ CFU·mL^-1的S.aureus和E.coli经乳导管分别注入奶牛乳房,在感染第7天采用活体无菌手术法采集乳腺组织,并采用组织HE染色和免疫荧光法进行乳腺炎模型的鉴定;利用qPCR分别检测了2个诱导组和对照组奶牛乳腺组织的趋化因子家族（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2和CXCL13）、补体因子（CFI和CFB）、自噬调节因子DEPP1和白细胞介素受体IL21R共9个基因的mRNA转录水平。结果显示：与对照组相比,TLR4/NF-κB炎症相关信号通路中的关键分子（TLR4、NF-κB和TNFα）在2个诱导组乳腺组织中的蛋白表达水平均极显著上调（P<0.01）;结合HE染色结果,表明本试验成功构建了2种类型的奶牛乳腺炎活体模型。mRNA转录水平的检测结果表明,与对照组相比,7个基因（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2、CFI、CFB和IL21R）在2个诱导组乳腺组织中的mRNA转录水平均极显著上调（P<0.001）,CXCL13的mRNA转录水平仅在S.aurues诱导组乳腺组织中极显著上调（P<0.01）;DEPP1的mRNA转录水平在2个诱导组中均极显著下调（P<0.01）。此外,CCL2、CCL8、CXCR1、CFI和IL21R共5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平均极显著高于S.aureus组（P<0.01）。S.aureus和E.coli感染均可导致奶牛产生严重的临床乳腺炎症状,并促使上述炎症相关基因的mRNA转录水平在乳腺组织中发生变化,以应对乳腺炎症的发生与发展过程;趋化因子CCL2等5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平显著高于S.aureus诱导组,解释了E.coli常常能引起急性乳腺炎,而S.aureus可引起慢性乳腺炎的原因。上述结果可为深入研究不同类型乳腺炎的分子调控机制提供参考。     

高铜对大鼠肾细胞炎性因子和细胞增殖的影响

旨在探讨铜中毒对大鼠肾组织炎性因子的表达和细胞增殖功能的影响。本研究选用32只20日龄健康大鼠随机分为4组,每组8只,其中,对照组日粮的铜（Cu）浓度为15 mg·kg^-1;高铜Ⅰ组日粮Cu浓度为30 mg·kg^-1;高铜Ⅱ组日粮Cu浓度为60 mg·kg^-1;高铜Ⅲ组日粮Cu浓度为120 mg· kg^-1。连续饲喂6个月,检测肾组织Ki-67、PCNA、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α的mRNA及其蛋白的表达。随着日粮中铜含量增高,肾组织中Ki-67、PCNA mRNA及其蛋白表达量显著降低（P<0.05）。炎性因子IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）,IL-1β蛋白的表达水平呈剂量依赖性上升,IL-6和IL-18蛋白表达水平先上升,后下降。结果表明,日粮铜含量高于30 mg·kg^-1时,将不同程度地抑制大鼠肾组织的细胞增殖,促进炎性因子的表达,造成炎性损伤。     

鸡软骨细胞体外分离培养鉴定以及过表达miR-15a对软骨细胞的影响

为分析miR-15a在肉鸡不同组织中的表达情况,并探究过表达miR-15a对体外培养鸡软骨细胞的影响。本研究首先通过倒置显微镜观察、PCR、凝胶电泳和甲苯胺蓝染色对体外分离培养的软骨细胞进行鉴定。通过实时荧光定量PCR检测miR-15a在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity, VVD)组和健康组肉鸡中(各3只)各组织的表达量。之后通过CCK8和EDU方法分析软骨细胞过表达miR-15a后细胞增殖情况。软骨细胞转染miR-15a mimics后,通过qPCR检测软骨细胞的标志基因Collagen-2、Aggrecan、Collagen-10,成熟分化基因Runx2、Sox9、VEGF、MMP9,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β3以及凋亡基因Fas、FasL、Bcl-2的表达量。并构建FKBP5 3'UTR的野生型载体和突变型载体,通过双荧光素酶检测报告检测miR-15a与FKBP5的靶向关系。结果表明,本研究所用的胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法成功分离得到状态良好的软骨细胞。荧光定量结果显示,miR-15a在各组织中均有表达,与健康组相比,miR-15a在VVD组的肝(P < 0.01)、脾(P < 0.05)、胸腺(P < 0.01)中的表达量显著升高,在心和胸肌组织中的表达量显著降低(P < 0.01)。CCK8与EDU分析结果显示,与NC组相比,过表达miR-15a组软骨细胞增殖速度显著降低(P < 0.01),增殖细胞数量显著减少(P < 0.01)。qPCR结果显示,与mimics NC组相比,miR-15a mimics组的软骨细胞标志基因Aggrecan、成熟分化基因Sox9、Runx2表达量显著降低(P < 0.05),Fas基因表达量极显著上升(P < 0.01),FasL基因和抗凋亡基因Bcl-2极显著下降(P < 0.01)。成功构建了FKBP5 3'UTR野生型和突变型载体,双荧光素酶检测报告结果显示预测的靶基因FKBP5与miR-15a没有靶向关系。本研究成功分离并鉴定了鸡软骨细胞,过表达miR-15a抑制鸡软骨细胞增殖、成熟和分化并促进细胞凋亡。     

加味葛根芩连汤对湿热泄泻仔猪肠道炎症和损伤修复的作用

通过用加味葛根芩连汤治疗仔猪的湿热泄泻,探讨其对湿热泄泻仔猪肠道的修复作用。选取8~15日龄未断奶仔猪（大白×长白）30头,其中健康仔猪6头,为对照组;有粪色黄褐而臭、小便短赤、舌质红等症状的泄泻仔猪24头,分为湿热泄泻组、加味葛根芩连汤低剂量组、加味葛根芩连汤中剂量组和加味葛根芩连汤高剂量组,每组6头。对照组和湿热泄泻组仔猪灌服生理盐水,药物组仔猪灌服加味葛根芩连汤（按生药量,低、中、高剂量组药物添加量分别为2.5、5.0和10.0 g·d^-1）,连续5 d。在服药的第0、3、5天记录各组仔猪的粪便评分。取对照组、湿热泄泻组、加味葛根芩连汤中剂量组仔猪十二指肠、空肠、回肠和结肠进行组织切片和H.E.染色,取十二指肠进行增殖性细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色;用荧光定量PCR检测对照组、湿热泄泻组、加味葛根芩连汤中剂量组仔猪空肠TLR4、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达量变化。湿热泄泻严重破坏了仔猪的十二指肠、空肠、回肠和结肠结构,尤其是十二指肠和空肠,十二指肠隐窝处PCNA表达量显著升高（P<0.05）。与对照组相比,湿热泄泻组仔猪空肠TLR4（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-6（P<0.05）mRNA表达量显著升高。相比于湿热泄泻组,加味葛根芩连汤显著降低了仔猪的粪便评分（P<0.05）。中剂量加味葛根芩连汤组仔猪的小肠和结肠的组织结构得到显著改善,十二指肠的肠腔中有不断脱落的绒毛团,绒毛中的PCNA表达量极显著升高（P<0.01）。与湿热泄泻组相比,加味葛根芩连汤中剂量组空肠TLR4（P<0.05）、TNF-α（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-6（P<0.05）mRNA表达量显著降低。综上表明,加味葛根芩连汤可通过促进隐窝干细胞的增殖和降低炎症反应对湿热泄泻造成的仔猪肠道损伤进行修复。     

地锦草水提物在IPEC-J2细胞中的抗炎与抗氧化作用

【目的】为了揭示地锦草(EH)在猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物(0、5、10、50、125、200μg/mL)处理IPEC-J2细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力,确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组(CT)、脂多糖(LPS)组(LPS)、EH+LPS组(ELP),每组3个重复。CT组细胞正常培养不做任何处理,LPS组细胞用5μg/mL LPS处理,ELP组细胞用5μg/mL LPS和最佳浓度EH共处理,各组细胞均处理12 h后,收集细胞和上清。利用实时荧光定量PCR方法检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达;ELISA法检测上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,化学荧光法检测上清液中活性氧(ROS)水平。【结果】与0μg/mL EH组相比,5、50μg/mL EH组IPEC-J2细胞...