miR-138靶向PGC-1α调控牦牛肌内前体脂肪细胞增殖及分化

旨在分析miR-138在牦牛前体脂肪细胞分化过程中的调控作用。本研究设计合成miR-138 mimics和inhibitor以对细胞进行miR-138过表达及抑制表达,并通过油红O染色分析miR-138对牦牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响;利用CCK-8、划痕和流式细胞技术分析miR-138对细胞增殖的影响;通过对bta-miR-138进行生物信息学分析,筛选其在脂质沉积过程中的相关潜在靶基因;利用RT-qPCR测定miR-138潜在靶基因mRNA表达水平,并通过双荧光素酶报告试验确定靶向关系。结果显示,过表达miR-138后,细胞内脂滴沉积水平显著低于对照（NC）组（P<0.01）,而抑制miR-138表达则显著增强脂肪细胞脂质沉积（P<0.01）;RT-qPCR结果表明,过表达miR-138可显著抑制脂肪分化标志基因PPARγ和c/EBPα的表达（P<0.01）,抑制miR-138则上调PPARγ和c/EBPα表达水平（P<0.05）;此外,过表达miR-138后,潜在靶基因PTPN11、CREB1和ADCYAP1R1表达水平显著下调（P<0.05）,而PGC-1α和SNAP25表达极显著下调（P<0.01）;抑制miR-138后MXLIP和SNAP25表达显著上调（P<0.05）,PGC-1α和PTPN11表达极显著上调（P<0.01）;CCK-8和划痕试验结果表明,过表达miR-138后24~36 h,细胞增殖活性显著低于对照组（P<0.05）,而抑制miR-138则表现为细胞增殖活性增强;流式分析结果显示过表达miR-138后,细胞出现G1-S期阻滞,细胞周期相关基因CCND1、CCNB1和增殖标志基因Ki67的mRNA表达显著降低;生物信息学分析预测获得263个miR-138公共靶基因,KEGG富集结果显示靶基因主要参与“轴突导引”、“胰岛素抵抗”、“胰岛素分泌”及“RNA降解”等通路,GO分析主要富集于“RNA聚合酶Ⅱ启动子对转录的正向调控”、“核染色质”、“染色质DNA结合”和“I型肺细胞分化”等功能;双荧光素酶报告试验结果显示,共转染miR-138 mimics和PGC-1α-Wt-PGL3-basic可显著降低细胞荧光强度（P<0.01）。以上结果表明,miR-138可通过靶向结合PGC-1α 3'UTR序列,降低PGC-1α的mRNA表达水平,抑制牦牛肌内前体脂肪细胞分化和脂质沉积,降低细胞增殖活性。本研究为阐明牦牛肉质性状的潜在分子机制提供参考。     

基于AMPK通路研究葛根素对猪前体脂肪细胞成脂分化的影响

【目的】 探究葛根素是否通过AMPK通路促进松辽黑猪前体脂肪细胞分化,以期为在饲粮中添加葛根素改善猪肉肉质提供参考。【方法】 待松辽黑猪前体脂肪细胞汇合度达90%时进行为期4 d的诱导分化。诱导分化时,将细胞分为对照组（Con）、葛根素组（Pue）、葛根素+AMPK激活剂AICAR组（AICAR）及葛根素+AMPK抑制剂CompoundC组（CompoundC）,对照组诱导液中不添加葛根素,Pue组添加40 μmol/L葛根素,AICAR组添加40 μmol/L葛根素+500 μmol/L AICAR,CompoundC组添加40 μmol/L葛根素+20 μmol/L CompoundC。诱导分化结束,收集各组细胞,用甘油三酯（TG）酶法检测细胞中甘油三酯浓度;实时荧光定量PCR检测AMPK各亚基以及成脂分化相关基因的表达水平;用Western blotting检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）、p-AMPK （Thr-172）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的蛋白表达水平;通过Autodock Vina 1.20对葛根素、AMPKα亚基做分子对接预测。【结果】 甘油三酯测定结果显示,与Con组相比,Pue组甘油三酯浓度显著增加（P<0.05）;与Pue组相比,AICAR组甘油三酯浓度显著降低（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,与Con组相比,Pue组PPKAG2、PPKAB1、PPKAB2、PPKAA1、PGC-1α表达量均显著降低（P<0.05）,Pue组C/EBPα、PPARγ、ACC表达量均显著增加（P<0.05）;与Pue组相比,AICAR组PPKAG1、PPKAG2、PPKAB1、PPKAB2、PPKAA1表达量显著增加（P<0.05）,AICAR组C/EBPα、PPARγ、ACC表达量均显著降低（P<0.05）,CompoundC组PPKAG1、PPKAG2、PPKAB2表达量均显著降低（P<0.05）,CompoundC组C/EBPα、ACC表达量均显著增加（P<0.05）。Western blotting结果显示,与Con组相比,Pue组PPARγ、ACC蛋白表达量显著增加（P<0.05）,AMPK、p-AMPK蛋白表达量显著下降（P<0.05）,且p-AMPK/AMPK显著下降（P<0.05）;与Pue组相比,AICAR组PPARγ、ACC蛋白表达量显著下降（P<0.05）,AMPK、p-AMPK蛋白表达量显著增加（P<0.05）,CompoundC组PPARγ、ACC蛋白表达量显著增加（P<0.05）,AMPK、p-AMPK蛋白表达量及p-AMPK/AMPK显著下降（P<0.05）。【结论】 40 μmol/L葛根素能够显著增加脂肪细胞中甘油三酯含量,显著上调成脂分化基因PPARγ、C/EBPα、ACC的表达量,显著下调AMPK各亚基的表达量,AMPK激活剂AIRCR可显著抑制葛根素的作用,说明葛根素可通过抑制AMPK通路调节松辽黑猪前体脂肪细胞成脂分化。     

金属硫蛋白对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响

为探讨金属硫蛋白(MT)对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响及其机理,选取25头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为A、B、C、D、E 5组,分别按每头0(对照),16.0,24.0,32.0和40.0 mg颈静脉注射Zn-MT,于试验第1(注射Zn-MT之前),7和14天逐头采取血样,测定不同剂量的外源性MT对热应激奶牛血淋巴细胞HSP70、Bcl-2、Bax和p53基因表达水平的影响。结果表明,补给外源性MT后,4个试验组奶牛的产奶性能都有不同程度提高,其中B组奶牛的产奶量比A、C、D和E组分别高出20.94%(P＜0.05),15.83%(P＞0.05),10.94%(P＞0.05)和8.85%(P＞0.05);各试验组HSP70基因的表达水平都有所上升,其中D组比对照组高出130.00%,达到显著(P＜0.05)水平;各试验组Bcl-2基因的表达水平均高于对照组,其中C组达到显著(P＜0.05)水平;B、D组Bax基因的表达水平和C、E组p53基因的表达水平较对照组分别降低了22.00%,13.00%和22.00%,34.00%,但均未达到显著(P＞0.05)水平。说明外源性MT能改善热应激奶牛的产奶性能并有效调控奶牛血淋巴细胞HSP70、Bcl-2、Bax和p53基因的表达水平,且表现出较为明显的剂量效应。     

HMGB1与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性分析

旨在探究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性,本研究将BALB/c小鼠随机分为空白对照组（n＝10）,感染后4周组、6周组和HMGB1抑制剂组（n＝5）,进行血常规及生化检测,观察肝病理学及Masson染色情况、荧光定量PCR检测HMGB1、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、α-SMA、Col1α1、TGF-β1、Smad2和Smad3的转录水平。结果显示：感染后4周,小鼠谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、肝组织HMGB1、α-SMA、TGF-β1、IL-6和 TNF-α的转录水平均显著或极显著升高（P<0.05或P < 0.01）;感染后6周,小鼠WBC、Neu、Mon、Eos、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和ALT极显著升高（P<0.01）,肝组织HMGB1、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、α-SMA、Col1α1、TGF-β1、Smad2和Smad3的转录水平均显著或极显著升高（P<0.05或P<0.01）;感染后6周小鼠肝虫卵聚积处伴有炎性细胞浸润和胶原纤维增生;HMGB1抑制剂可显著降低小鼠血清ALT值和肝组织HMGB1、α-SMA、TGF-β1、IL-6和TNF-α的转录水平（P<0.05）。综上表明,HMGB1与日本血吸虫病肝炎症和纤维化具有一定相关性。     

虹鳟酪氨酸酶基因的生物信息学分析及其在不同发育阶段和组织中的表达分析

酪氨酸酶（tyrosinase,Tyr）基因在调控动物色素合成的过程中发挥关键作用。为了解tyr基因与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）体色变异的关系,本研究对虹鳟tyr-1和tyr-2基因进行了蛋白序列分析,并利用实时荧光定量PCR检测两种基因在野生型虹鳟（虹鳟）和黄色突变型虹鳟（金鳟）体色发生的19个不同时期和成鱼13种不同组织中的表达差异。蛋白序列分析结果表明,Tyr-1和Tyr-2都是亲水性蛋白,且蛋白结构主要是无规则卷曲和α-螺旋;实时荧光定量PCR结果显示,tyr-1基因在胚胎各时期均有表达,tyr-1基因表达量在虹鳟受精期最高,桑椹期次之,且显著高于其他时期（P<0.05）;tyr-1基因表达量在金鳟16-细胞期最高,且显著高于其他时期（P<0.05）;tyr-2基因分别从虹鳟囊胚期和金鳟原肠期开始表达,表达量均在心跳期达到最高且显著高于其他时期（P<0.05）。出膜后,tyr-1、tyr-2基因分别在虹鳟5日龄和金鳟3月龄表达量最高。在胚胎各时期中,tyr-1、tyr-2基因在虹鳟中表达量普遍高于金鳟,出膜后普遍低于金鳟。在各组织中,tyr-1基因在皮肤、眼睛、肾脏、肝脏等组织中有较高表达,tyr-2基因主要在皮肤、眼睛中有较高表达,在其他组织中表达量较低。以上结果表明,tyr-1和tyr-2基因与虹鳟体色变异具有一定的相关性,为深入阐明虹鳟体色变异机制和体色遗传改良奠定了理论基础。     

民猪脂肪细胞分化过程中抗寒相关基因表达规律研究

旨在探究民猪脂肪细胞分化过程中产热基因和米色脂肪标记基因的表达变化规律，为进一步研究民猪脂肪细胞向米色脂肪细胞分化的分子机制提供依据。本研究采集1月龄民猪的背部脂肪组织，分离前体脂肪细胞进行培养及成脂诱导，观察分化过程中细胞形态并进行油红O染色鉴定；检测产热基因UCP3、PGC-1α、PPARα和米色脂肪标记基因EBF2、CD81、PDGFRα在诱导分化第0、2、4、6、8天的表达量。结果表明，随着诱导分化的时间增加，细胞中的脂滴逐渐增多，在分化第8天时进行油红O染色，多数细胞达到成熟脂肪细胞阶段。以第0天为对照，PGC-1α、EBF2、PDGFRα在第2天时表达量极显著升高（P<0.01），且达到最高，第4、6、8天呈下降趋势。UCP3在第4、6、8天表达量极显著升高（P<0.01），第8天有所下降。PPARα和CD81在第2天时表达量极显著升高（P<0.01），且在第4和6天表达量与第2天相比变化不大。综上表明，本研究成功进行了民猪前体脂肪细胞的成脂诱导分化，揭示了分化过程中产热和米色脂肪标记基因的表达规律，为进一步研究民猪前体脂肪细胞向米色脂肪细胞分化的分子机制和民猪抗寒能力奠定基础。     

风柜斗草提取物通过调控脂质代谢改善小鼠肝脂质沉积症

旨在探究风柜斗草提取物(Sarcopyramis napalensis Wall extract,SNE)对蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的肝脏脂质沉积的作用与机制。本研究将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只,设置MCS组(MCD饲料的对照饲料组)、MCS+风柜斗草提取物组(400 mg·(kg·bw)^-1)、MCD组、MCD+风柜斗草提取物低、中、高剂量组(100、200、400 mg·(kg·bw)^-1),造模及药物干预6周。进行肝组织切片HE染色、天狼猩红染色,检测血清碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活力水平及丙二醛(MDA)含量以评估肝脂质沉积、肝纤维化以及肝抗氧化情况。使用Western blot技术检测腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白的激活情况,使用qRT-PCR技术检测固醇调节元件结合蛋白-1C (SREBP-1c)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、脂肪酸转运蛋白-3(FATP-3)、脂肪酸转运蛋白-4(FATP-4)、细胞间黏附分子-l (ICAM-1)、血管细胞黏附分子-l (VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2) mRNA表达水平,同时采用LC-MS/MS技术进行肝组织非靶向脂质组学分析。结果表明,给予200、400 mg·(kg·bw)^-1剂量的风柜斗草提取物时均可显著改善MCD饲料饲喂的小鼠肝脂肪变性,减少炎症簇以及肝纤维化程度。给予风柜斗草提取物100、200、400 mg·(kg·bw)^-1时均可显著降低MCD饲料饲喂的小鼠血清中ALT和AKP的活力以及肝组织中MDA的含量,显著提高小鼠肝中GSH-Px的活力。Western blot及qRT-PCR检测结果显示,风柜斗草提取物显著激活MCD饲料饲喂的小鼠肝组织AMPK;显著抑制MCD饲料饲喂的小鼠肝组织SREBP-1c、L-FABP、FATP-3、FATP-4、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、TIMP-2的mRNA表达水平。肝脂质组学检测结果显示,风柜斗草提取物显著降低MCD饲料饲喂的小鼠肝中甘油三酯(TG)、磷脂酰甘油(PG)以及神经酰胺(Cer)的相对含量;显著提高鞘磷脂(SM)以及辅酶Q9相对含量。结果提示,风柜斗草提取物可通过AMPK/SREBP-1c途径抑制TG合成,以及通过抑制FATP与L-FABP表达来减少肝对脂肪酸的摄取,从而改善MCD饲料饲喂的小鼠肝脂肪变性;通过提高MCD饲料饲喂的小鼠肝组织中SM和辅酶Q9相对含量以及降低Cer相对含量,改善肝细胞氧化应激损伤情况,进而改善MCD饮食诱导的小鼠肝炎症和纤维化,最终达到改善肝脂质沉积症的作用。     

铜水平对冬毛期乌苏里貉毛皮品质、血清生化指标及肝相关基因表达的影响

本试验旨在研究日粮中添加铜对冬毛期雄性乌苏里貉毛皮品质、脏器指数、血清生化指标及相关基因表达的影响。随机选取体重相近的雄性乌苏里貉105只,采用单因子试验设计,随机分为7组,每组15个重复,每个重复1只。分别饲喂添加蛋氨酸铜为0（对照组）、30（Ⅰ组）、45（Ⅱ组）、60（Ⅲ组）、75（Ⅳ组）、90（Ⅴ组）和200 mg·kg^-1（Ⅵ组）的试验日粮,预饲期7 d,正式期60 d。试验结束后每组选择8只乌苏里貉采血、屠宰,检测毛皮长、铜蓝蛋白酶活性、超氧化物酶活性及肝中相关基因表达的测定。结果表明：1）铜添加水平对貉的体长、鲜皮长、针毛长与针毛细度有显著影响（P<0.05）,对鲜皮重、绒毛长与绒毛细度没有显著影响。2）日粮铜添加水平对乌苏里貉的心脏指数、肝脏指数、肾脏指数与脾脏指数没有显著影响。3）随着铜水平的升高,血清葡萄糖（glucose,GLU）含量也随之升高（P<0.05）,不同铜添加剂量对血清中乳糖脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）、天门冬酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）与丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）活性有显著影响（P<0.05）,使血清铜蓝蛋白（ceruloplasmin,CER）、总超氧化物歧化酶（Total superoxide dismutase,T-SOD）与铜锌超氧化物歧化酶（copper and zinc superoxide dismutase,Cu-Zn SOD）的活性先升高后趋于稳定（P<0.05）。4）日粮不同铜添加水平对肝的CER、Cu-Zn SOD、生长激素受体（Growth hormone receptor,GHR）与胰岛素生长因子I （insulin-like growth factor 1,IGF-1）基因表达有显著影响,90与200 mg·kg^-1组的肝CER和Cu-Zn SOD基因表达水平显著高于30 mg·kg^-1组,30 mg·kg^-1组肝CER和Cu-Zn SOD基因表达水平显著高于未添加组（P<0.05）。90 mg·kg^-1的肝GHR和IGF-1基因表达水平显著高于未添加组（P<0.05）。饲粮中铜添加水平为60~75 mg·kg^-1时,貉的毛皮品质最佳;血清中CER和Cu-Zn SOD的酶活不会随着铜水平的变化而显著变化;血清中AST、ALT和LDH的酶活没有显著变化;此外,还提高了肝内GHR和IGF-1基因的表达量,促进貉生长。结合以上测定指标,建议貉的饲粮中铜添加含量为60~75 mg·kg^-1。     

体外成熟液中添加PAF对牦牛卵母细胞发育能力及基因表达的影响

旨在探讨体外成熟（IVM）液中添加血小板活化因子（PAF）对牦牛卵母细胞发育能力及基因表达影响。本试验将牦牛1 025个卵丘-卵母细胞复合体（COCs）分为4组,分别在含不同浓度PAF（0、10^-8、10^-7和10^-6mol·L^-1）的IVM液中成熟后,与奶牛精子体外受精（IVF）和体外培养（IVC）,比较分析各组卵母细胞成熟率、卵裂率和囊胚率以及COCs和胚胎中抗凋亡（BCL-2）、促凋亡（BAX）、表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）、转录因子（OCT-4和NANOG）和c-fos等基因的表达量差异。结果表明,IVM液中PAF浓度为10^-7mol·L^-1组的卵母细胞成熟率（（92.16±0.19）%）、卵裂率（（77.20±0.85）%）和囊胚率（（46.71±0.68）%）显著高于其他组（P<0.05）。qPCR结果显示,在该组成熟的COCs中BCL-2、EGF、EGFR、c-fos表达量显著上调（P<0.05）,而促凋亡基因BAX表达量显著下调（P<0.05）,囊胚中EGF、EGFR、OCT-4基因表达量显著上调（P<0.05）。各组间2-、4-、8-细胞、桑椹胚和囊胚中BCL-2、BAX和NANOG表达量差异不显著,但桑椹胚和囊胚中BCL-2表达量均明显下调,而BAX表达量均明显上调。综上所述,IVM液中适宜浓度PAF（10^-7mol·L^-1）可以促进牦牛卵母细胞成熟和胚胎发育,调控细胞凋亡和增殖相关基因的表达。     

高铜对大鼠肾细胞炎性因子和细胞增殖的影响

旨在探讨铜中毒对大鼠肾组织炎性因子的表达和细胞增殖功能的影响。本研究选用32只20日龄健康大鼠随机分为4组,每组8只,其中,对照组日粮的铜（Cu）浓度为15 mg·kg^-1;高铜Ⅰ组日粮Cu浓度为30 mg·kg^-1;高铜Ⅱ组日粮Cu浓度为60 mg·kg^-1;高铜Ⅲ组日粮Cu浓度为120 mg· kg^-1。连续饲喂6个月,检测肾组织Ki-67、PCNA、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α的mRNA及其蛋白的表达。随着日粮中铜含量增高,肾组织中Ki-67、PCNA mRNA及其蛋白表达量显著降低（P<0.05）。炎性因子IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18、NF-κB、TNF-α mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）,IL-1β蛋白的表达水平呈剂量依赖性上升,IL-6和IL-18蛋白表达水平先上升,后下降。结果表明,日粮铜含量高于30 mg·kg^-1时,将不同程度地抑制大鼠肾组织的细胞增殖,促进炎性因子的表达,造成炎性损伤。     

延边牛PPARγ基因的克隆及生物信息学分析

研究旨在克隆和分析延边牛过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因,并探讨其在延边牛不同组织中的表达规律。参考GenBank数据库中牛PPARγ的序列（登录号：NM_181024.2）设计引物,以18月龄延边牛为试验对象,利用RT-PCR克隆得到延边牛PPARγ基因,利用NCBI中的BLAST程序与其他物种进行相似性分析并构建系统进化树;用生物信息学软件分析其核苷酸序列及其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构等;用实时荧光定量PCR检测延边牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、皮下脂肪、肌肉8个组织中PPARγ基因的相对表达水平。结果显示,延边牛PPARγ基因CDS区序列为1 620 bp,相似性比对和系统进化树结果显示,与黄牛的亲缘关系最近,相似性为99.9%,与鸡的亲缘关系最远,相似性为82.1%;该基因编码505个氨基酸,无信号肽和跨膜结构域,为亲水性蛋白,主要分布在细胞核和细胞质中;延边牛PPARγ蛋白二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,存在53个潜在的磷酸化位点,24个O-糖基化位点;实时荧光定量PCR结果显示,延边牛PPARγ基因在脾脏、皮下脂肪、肝脏中表达量显著高于心脏（P<0.05）,肺脏、肾脏、肌肉和小肠中表达量显著低于心脏（P<0.05）。以上试验结果可为进一步研究PPARγ基因的功能提供借鉴。     

营养限饲与补偿对蒙古羔羊体重、血清生化指标及胸脂脂肪因子基因表达的影响

试验旨在研究早期营养限饲与后期快速补偿对蒙古羔羊体重、血清生化指标及胸脂脂肪因子基因表达的影响。选用30只4月龄健康蒙古公羔羊,随机分为对照组(20.26 kg±3.63 kg)与限制组(21.29 kg±3.00 kg)。对照组羔羊自由采食,限制组羔羊维持水平饲养,限制期60 d,限制饲养结束后立刻进入60 d补偿期,补偿期两组饲喂相同日粮。于试验第30、60、90和120天从各组试验羊颈静脉采血,用试剂盒检测血清中甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸(NEFA)、总胆固醇(TC)浓度;并在限制和补偿末期屠宰羔羊,采集胸部脂肪组织,实时荧光定量PCR检测脂联素(Adiponectin)、内脂素(Visfatin)、过氧化物酶增殖物激活受体γ (PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)基因表达量。结果表明:①限制期,限制组羔羊体重保持维持水平而对照组羔羊体重呈升高趋势;补偿期,限制组羔羊平均日增重显著高于对照组(P< 0.05)。②限制期,限制组羔羊血清中TG浓度在第30和60天时显著低于对照组(P< 0.05),而NEFA在第30天时显著高于对照组(P< 0.05);补偿期,限制组TC浓度在第90天时显著低于对照组(P< 0.05),而TG与NEFA两组间均无显著差异(P >0.05)。③限制期,限制组羔羊胸脂PPAR-γ和ACC基因表达量显著低于对照组(P< 0.05),补偿期两组间无显著差异(P >0.05)。限制期和补偿期两组羔羊胸脂Adiponectin和Visfatin基因表达均无显著变化(P >0.05)。由此可知,营养限制时胸脂脂肪合成与脂肪细胞分化能力减弱,脂肪组织水解动员参与机体能量代谢,补偿时总胆固醇参与机体恢复生长。补偿期限制组羔羊快速增重,但ACC与PPAR-γ基因显著低于对照组。早期的生长限制与后期的补偿生长对羔羊胸脂Adiponectin与Visfatin无显著影响。     

Effect of Nutrient Restriction and Compensation on Weight,Serum Indexes and Gene Expression of Chest Fat Adipokines in Mongolian Lamb

To study the effect of nutrient restriction and compensation on weight,serum indexes and gene expression of chest fat adipokine in Mongolian lamb,thirty male lambs were randomly divided into control group (20.26 kg± 3.63 kg) and feed restricted group (21.29 kg±3.00 kg).The experiment lasted for 120 days,including 60 days for feed restriction and 60 days for compensatory feed.At the end of each stage,five lambs from each group were slaughtered and chest fat was collected.Serum concentration of triglycerides,non-esterified fatty acids (NEFA),total cholesterol were measured.Quantitative Real-time PCR were used to determine Adiponectin,Visfatin,PPAR-γ and ACC genes expression.The results showed that:①The lamb body weight of restricted group kept maintain level and that of control group showed a increase tendency.During the compensatory period,the average daily gain (ADG) of restricted group was significantly higher than control group (P< 0.05).②During the restriction period,serum triglycerides concentration of lambs in restricted group was significantly decreased at day 30 and 60 (P< 0.05),and NEFA concentration was significantly increased at day 30 (P< 0.05).After 60 days of nutritional compensation,all serum parameters we tested were not significantly different between restrict group and control group (P >0.05).③During the restriction period,PPAR-γ and ACC gene expression in restricted group were significantly lower than that of control group (P< 0.05),while no significant differences were found during the compensation period (P>0.05).Adiponectin and Visfatin genes expression in chest fat was not significantly changed throughout the experiment (P >0.05).We could know that nutritional restriction reduced fatty acid synthesis and adipocyte differentiation ability,adipose tissue was mobilized energy metabolism,and total cholesterol was recoveried growth on the compensation.However,the ACC and PPAR-γ genes in restricted group were significantly decreased with the body weight increased rapidly during the compensatory stage.Adiponectin and Visfatin were not significantly different between restricted and compensatory stages.     

不同营养水平小尾寒羊体内AMPK表达调控的研究

本研究旨在通过免疫组织化学及Realtime PCR来研究不同营养水平条件下磷酸蛋白激酶AMPK和P-AMPK在小尾寒羊体内的分布情况及AMPKa亚基表达量的变化。研究结果表明,AMPKα亚基在下丘脑、肝、心、肾、脾、骨骼肌、十二指肠中分布,而P-AMPK在下丘脑、肝、心、肾、骨骼肌、十二指肠等组织中分布;低营养组AMPKαlmRNA相对表达量上调的组织有下丘脑、肝、心、骨骼肌、脂肪,禁食组AMPKαltaRNA相对表达量上调的组织有骨骼肌、脂肪。低营养组AMPKa2mRNA相对表达量上调的组织有下丘脑、心、骨骼肌、脂肪,禁食组AMPKa2mRNA相对表达量上调的组织有骨骼肌、脂肪、心、下丘脑。说明能量摄入水平对小尾寒羊体内AMPKαmRNA表达丰度有影响,并且AMPK对能量摄入水平的调节具有组织特畀性。     

Effects of High Copper on Inflammatory Factors and Cell Proliferation in Rat Kidney Cells

The purpose of this research was to investigate the effect of copper poisoning on the expression of inflammatory factors and cell proliferation in renal tissues of rat. In this study, 32 healthy rats aged 20 days were selected and randomly divided into 4 groups, 8 in each group. The rats were fed as follows: The copper concentration in the control group was 15 mg·kg^-1; high-copper group I: 30 mg·kg^-1; high-copper group Ⅱ: 60 mg·kg^-1; high-copper group Ⅲ: 120 mg·kg^-1. After continuously feeding for 6 months, the mRNA and their proteins expression of Ki-67, PCNA, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, NF-κB, TNF-α in renal tissues were detected. The results demonstrated that the relative expressions of Ki-67,PCNA mRNA and proteins in renal tissues were significantly decreased with the increase of copper content in feed (P<0.05). Meanwhile, the mRNA expression levels of inflammatory factors including IL-1β, IL-2, IL-6, IL-18, NF-κB, TNF-α in renal tissues were significantly increased (P<0.05). Besides, the relative expression of IL-1β protein was up-regulated in a dose dependent manner, and the relative expression levels of IL-6 and IL-18 proteins increased first and then decreased. In summary, the finding suggested that high copper stimulation inhibited the cell proliferation of rat kidney tissue, promoted the expression of inflammatory factors, and caused inflammatory damage.     

日粮添加不同水平芦丁对热应激小鼠睾丸组织的影响

本试验旨在探讨日粮添加不同水平芦丁对缓解热应激小鼠睾丸组织损伤的影响。将30只5周龄体重相近（20～22 g）的ICR系雄性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别饲喂基础日粮添加0（CON组）、0（HS组）、250（HS+R250）、500（HS+R500）和1 000（HS+R1000） mg·kg^-1芦丁的日粮,饲养10 d后,除对照组（CON）外,所有小鼠在每天10：00至14：00之间置于42℃恒温箱中连续处理8 d后屠宰取样分析。结果显示：1）与CON组相比,HS组小鼠睾丸指数无显著变化（P>0.05）,而日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著提高热应激小鼠睾丸指数（P<0.05）;小鼠睾丸组织切片结果显示,与CON组相比,HS组小鼠生精小管直径和横截面积显著降低（P<0.05）,生精细胞脱落比率显著增加（P<0.05）;与HS组相比,HS+R250组小鼠生精小管横截面积显著增加（P<0.05）,生精细胞脱落比率显著降低（P<0.05）,HS+R500组生精细胞脱落比率也显著降低（P<0.05）,HS+R1000组小鼠生精小管直径显著增加（P<0.05）;小鼠睾丸指数、生精小管直径及生精小管脱落比率在芦丁处理组与CON组之间无显著差异（P>0.05）,但HS+R250组小鼠睾丸生精小管横截面积显著高于CON组（P<0.05）。2）与CON组相比,HS组小鼠睾丸组织丙二醛（MDA）含量显著升高（P<0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）与还原型谷胱甘肽（GSH）含量以及血红素酶-1（HO-1） mRNA的表达量均显著降低（P<0.05）;日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著降低热应激小鼠睾丸组织中MDA含量（P<0.05）,提高T-AOC与GSH含量（P<0.05）,并增强核因子E2相关因子2（Nrf2）、HO-1和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） mRNA的表达量（P<0.05）,而添加500和1 000 mg·kg^-1芦丁也显著提高了GSH含量（P<0.05）;与CON组相比,除HS+R250组Nrf2 mRNA表达量显著高于CON组（P<0.05）外,芦丁组热应激小鼠睾丸组织抗氧化相应基因与酶活指标均无显著性变化（P>0.05）。3）热应激小鼠睾丸中核因子-κB （NF-κB）、TOLL样受体4（TLR-4）和Bax的mRNA表达量显著增加（P<0.05）,而Bcl-2表达量显著降低（P<0.05）;日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著降低NF-κB、TLR-4、髓样分化因子88（MyD88）、白细胞介素-Iβ（IL-1β）和Bax mRNA表达量（P<0.05）,增强Bcl-2的表达水平（P<0.05）;添加500 mg·kg^-1芦丁显著降低NF-κB和TLR-4表达量（P<0.05）,而1 000 mg·kg^-1芦丁能够显著增加Bcl-2的表达（P<0.05）;小鼠睾丸组织中免疫和增值凋亡相关基因的表达量在添加芦丁组及CON组之间无显著性差异（P>0.05）。结果提示,日粮添加适宜剂量芦丁具有改善热应激小鼠睾丸组织形态及功能的效果,其机制可能与芦丁通过Nrf2信号通路缓解氧化应激,通过TLR-4/NF-κB信号通路抑制炎症反应及调控Bax/Bcl-2 mRNA的表达密切相关。本试验条件下日粮添加250 mg·kg^-1芦丁的效果较好。