柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

柔嫩艾美耳球虫对肉鸡生长性能及免疫性能的影响

选用1日龄的艾维音肉鸡60羽,随机均分为对照组和处理组。处理组每只鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个,24日龄试验结束,测定其生理生化指标。结果显示:处理组鸡体质量显著低于对照组(P0.05);IFN-γ和IL-4水平极显著低于对照组(P0.01),IL-6和IL-12水平显著低于对照组(P0.05);处理组CD8+T细胞水平极显著低于对照组(P0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P0.05),而CD4+T细胞和IgG水平与对照组差异不显著;血清丙二醛(MDA)、尿酸(UA)和葡萄糖有升高趋势(P0.05),一氧化氮合成酶(iNOS)、总蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷草转氨酶(GOT)和甘油三酯(Tg)呈降低趋势(P0.05)。结果表明,柔嫩艾美耳球虫通过影响肉鸡的免疫力进而降低了其生长性能。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠中一些正常厌氧微生物菌群动态的影响

通过对鸡感染柔嫩艾美耳球虫时盲肠中常见正常厌氧微生物的变化情况进行检测研究发现:鸡在感染球虫后第7、10、14天时盲肠中类杆菌(Bacteriodes)的数量显著减少(P<005),而梭状芽孢杆菌(Clostridium)则显著增多;在球虫感染后的第7、10天时,盲肠中的消化球菌(Peptostreptocuccus)和真杆菌(Eubacterium)呈显著下降(P<005)。上述结果从一个方面阐明了柔嫩艾美耳球虫感染导致对某些其它感染抵抗力下降的机制。     

柔嫩艾美耳球虫感染肉鸡后盲肠粘膜iNOS活性变化

本研究旨在探讨肉鸡柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)感染与盲肠粘膜诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)活性之间的时间 -效应和剂量 -效应关系。 1日龄黄羽肉鸡 ,在实验室条件下用雏鸡日粮饲养两周后供试。在时间 -效应关系试验中 ,4 5只肉鸡中用 5只鸡作对照 ,其余每只鸡接种 1.0× 10 4 个球虫孢子化卵囊 ,接种前捕杀对照组雏鸡 ,于接种后每 2 4 h分别捕杀 5只 ,取其盲肠粘膜样本 ,按分光光度法检测 i NOS活性 ,连续 8天。试验结果表明 ,与对照组相比 ,肉鸡盲肠组织 i NOS的活性在接种球虫后不同时间明显不同 ,其中接种后第 96 h活性最高 (2 3.70± 7.6 5) ;在剂量 -效应关系试验中 ,4 0只肉鸡以不同的剂量 0、0 .5× 10 4 、1.0× 10 4 、1.5× 10 4 、2 .0× 10 4 、2 .5× 10 4 、3.0× 10 4 、3.5× 10 4 个 /只分别口服接种 ,然后按时间 -效应关系中酶活性最高的时间点取样 ,以同法检测 i NOS活性。试验结果显示 ,接种不同剂量的雏鸡 ,其盲肠组织中 i NOS活性不同 ,与对照组相比各剂量组 i NOS活性均显著增高 (P<0 .0 1) ,在 7个剂量组中 ,以 2 .5× 10 4 个 /只剂量组活性最高 (2 3.37± 8.32 )     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

柔嫩艾美耳球虫病毒的鉴定

鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的一种单细胞寄生性原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地。感染鸡的艾美耳属球虫中,国外已报道在巨型艾美耳球虫（E.maxima）,堆型艾美耳球虫（E.acervu-lina）,毒害艾美耳球虫（E.necatrix）和布氏艾美耳球虫（E.brunetti）中发现了病毒粒子或病毒RNA。但是作为危害最严重的柔嫩艾美耳球虫是否有病毒感染,国内外迄今尚无报道。本研究首次在柔嫩艾美耳球虫中发现病毒并对其进行了鉴定。通过核酸分析、RNA依赖的RNA聚合酶（RDRP）活性和电镜形态观察对病毒进行鉴定。核酸酶的敏感性试验结果表明在柔嫩艾美耳球虫总核酸电泳图谱上观察到的大小分别为1.4、2.4和3.6kb的3条病毒带均不能被DNA酶（100mg/L）降解,但可被RNA酶（1.0mg/L）降解,表明这些核酸为RNA。另外,这些核酸不能被高盐浓度（0.3mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,但可被低盐浓度（0.015mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,并且采用α-32P标记的UTP掺入法测得该病毒样核酸具有RNA依赖RNA聚合酶（RDRP）活性,表明这些核酸为双链RNA（dsRNA）。利用蔗糖梯度离心和透射电镜技术对柔嫩艾美耳球虫病毒进行了分离和鉴定。电镜负染观察到柔嫩艾美耳球虫病毒粒子外观呈球形,二十面体,无囊膜,直径38nm。     

柔嫩艾美耳球虫感染鸡的体液免疫机理研究

为了揭示鸡柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）病的免疫机制,试验从分子水平、细胞、亚细胞对人工攻毒病鸡特异性抗体、免疫细胞的动态变化及在抗球虫中的作用进行了探讨,试验结果如下：一是雏鸡感染E．tenella后,第6天即可在外周血液中检测出特异性IgG,于第18天达到峰值,第23天开始下降,第30天时降至感染后第7天的水平;二是揭示了雏鸡感染E．tenella后,鸡体IgG生成细胞的动态变化规律为：主要免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和盲肠局部的IgG生成细胞于第2天和第3天开始增殖,在第9天至第16天达到峰值,然后逐渐下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞在第18天降至对照组水平,盲肠、脾脏和法氏囊中的IgG生成细胞数在第22天仍高于对照组,且差异显著。     

柔嫩艾美耳球虫研究概况

本文简要介绍柔嫩艾美耳球虫生活史、生物学特性、卵囊形状、以及卵囊产量的影响因素，对柔嫩艾美耳球虫日龄与粪便卵囊产量进行科学的分析，旨在为疾病的治疗和预防提供依据。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

包被植物乳杆菌和屎肠球菌对肉鸡生长性能、免疫和抗氧化功能以及肠道菌群的影响

本试验旨在研究双层包被植物乳杆菌和屎肠球菌对肉鸡生长性能、免疫和抗氧化功能以及肠道菌群的影响。选取144只体重相近、健康的1日龄爱拔益加(AA)肉公鸡,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复6只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮基础上添加1 g/kg包被植物乳杆菌(活菌数为1.0×1010CFU/g)(ELP组)、1 g/kg包被屎肠球菌(活菌数为1.0×1010CFU/g)(EEF组)和1 g/kg包被植物乳杆菌+1 g/kg包被屎肠球菌(ELE组)的饲粮。试验期42 d。结果表明：1)与对照组相比,试验组肉鸡1～21日龄末重和平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),其中ELP组末重和ADG比对照组分别提高了12.77%和13.86%。2)21日龄,与对照组相比,ELE组肉鸡血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白A(IgA)含量显著提高(P<0.05),EEF组血清IgA和免疫球蛋白M含量显著提高(P<0.05);21和42日龄,与对照组相比,试验组肉鸡血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-2和白细胞介素-6含量显著降低(P<0.05),血清白细胞介素-...     

地克珠利对球虫感染雏鸡血清抗氧化功能的影响

选择120只14日龄雏鸡,随机分为对照组(Ⅰ)、感染组(Ⅱ)和地克珠利组(Ⅲ),每组40只.除Ⅰ组外,其余每只鸡口服感染8.0x104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染后第0、3、6、9、12天,每组随机取鸡5只,心脏采血,对血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量进行测定.结果表明,与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清SOD活性在感染后3、6、9 d极显著降低(P《0.01),GSH-Px活性在感染后6 d下降显著(p《0.05),MDA含量和CAT活性均表现不同程度的升降,但差异不显著(p》0.05).在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清SOD、GSH-Px、CAT活性虽然与Ⅱ组的差异未达显著水平,但分别较其提高了7.33%、19.82%和52.08%,MDA含量降低了14.58%,且GSH-Px、CAT活性与MDA含量与Ⅰ组比较差异不显著.提示地克珠利在一定程度上能增强球虫感染鸡的抗氧化能力.     

雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后脂质过氧化物的变化

为了探讨柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)对感染雏鸡的损伤机制 ,本试验给 10日龄海兰白公雏鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 8× 10 4个 /只 ,在感染后 2、4、6、7、9、12、16和 2 1d分别各取 5只雏鸡剖检 ,取盲肠并采血 ,观察盲肠病理组织学变化 ,测定盲肠组织及血清中的丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的水平。结果表明 ,雏鸡在感染 E.tenella后 2～ 4d,盲肠开始出现损伤 ,同时 SOD和 GSH- Px活性也开始下降 ;感染后 4～ 7d,盲肠粘膜上皮和肠腺上皮细胞大量变性、坏死崩解 ,发生严重损伤时 ,盲肠及血清中 MDA含量显著增加 ,并持续到 9d,同时 SOD和 GSH- Px活性也显著下降 ;感染 9d后 ,损伤的盲肠组织及 MDA、SOD和 GSH- Px水平逐渐恢复 ,至 2 1d基本达到正常     

柔嫩艾美耳球虫感染后组织抗氧化功能的动态变化

选择 8 0只 33日龄健康罗曼公鸡 ,随机分成感染组 (n=40 )和对照组 (n=40 )。感染组口服接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 1.5× 10 5个 /只 ,对照组不感染。分别于感染前 (0 d)和感染后 (2、4、6、8d)扑杀 ,采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏 ,测定组织中丙二醛 (MDA)及过氧化氢酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的活性。结果表明 ,柔嫩艾美耳球虫感染后 ,心脏和脾脏 MDA含量与对照组相比差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,肝脏、肺脏、肾脏中 MDA含量呈波动变化 ;与对照组相比 ,除肾脏 SOD差异不显著外 ,其他 4种组织 SOD在感染后 2、4、6、8d均显著高于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;在整个试验期间 ,心脏、脾脏中 GSH- Px与对照组相比差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,肝脏在感染后 6、8d显著高于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,肺脏、肾脏 GSH- Px仅在感染后 2 d与对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 ) ;肝脏和脾脏 CAT与对照组相比差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,心脏 CAT只在感染后 8d差异显著(P<0 .0 5 ) ,肺脏 CAT只在感染后 4d差异显著 (P<0 .0 5 ) ,肾脏 CAT只在感染后 2 d差异显著 (P<0 .0 5 )。提示感染柔嫩艾美耳球虫后 ,机体的抗氧化功能发生了一定的变化 ,自由基参与了球虫病的发病过程     

内源性NO在雏鸡球虫感染中的作用

以腹腔注射途径给予感染柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)雏鸡细菌脂多糖 (L PS)和地塞米松 (Dex) ,用铜离子活化镉还原法检测血清 NO- 2 水平 ,并通过测定 NBT阳性细胞百分率、雏鸡增重、免疫器官的脏器系数、OPG值以及盲肠病变记分等指标 ,探讨了 NO在雏鸡感染球虫过程中的作用。试验结果表明 ,与空白对照组相比 ,给予 L PS可使 NBT阳性细胞百分率明显升高 (P<0 .0 1) ,并使盲肠病变及球虫感染引起的增重下降有所减轻 ,这提示 L PS对雏鸡具一定的保护作用 ;而给予 Dex不仅降低了感染雏鸡血清 NO- 2 的水平、NBT阳性细胞百分率、增重和胸腺的脏器系数 ,还增加了 OPG值和盲肠病变记分 ,说明在雏鸡感染球虫过程中 ,Dex会减少 NO的生成 ,并使雏鸡抗球虫免疫力下降。     

AA鸡感染E.tenella后某些血清生化指标变化的研究

23日龄AA鸡36只均分为3组。第1组和第2组分别经口感染E.tenella卵囊35万/只和7万/只，第3组为对照组。在感染前（0天）及感染后第5天和第8天对病鸡10项血清生化指标进行检测。结果如下：（1）血清葡萄糖含量在感染前后无显著差异。（2）总蛋白，白蛋白和甘油三酯含量在第5天显著降低；在第8天，前二者回升，后者继续下降，球蛋白含量在第5天和第8天均显著升高。（3）尿酸含量在第1组的第5天和第2组的第8天极显著升高，（4）天冬氨酸氨基转移酶和酸性磷酸酶活性在第5天均极显著降低。前者在第8天回升，后者在第8天继续显著下降。碱性磷酸酶在第5天升高后，在第8天又回落，胆碱酯酶活性在第1组的第5天极显著降低。在第8天又极显著升高；在第2组无明显变化。（5）绝大多数指标在第1组的变化幅度较第2组大，其中总蛋白和甘油三酯含量在两组间的差异达到显著水平。这些结果表明病鸡能量代谢出现大的调整，病理损伤程度与感染剂量有关。     

柔嫩艾美尔球虫实验感染雏鸡体液免疫机制研究

本文通过人工复制的鸡球虫病鸡,利用免疫组化技术等方法,检测了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)初次感染雏鸡后,盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化。结果表明:攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞分别于第3、3、3、2d开始增殖,在第12、12、16、9d达到峰值,随后即开始下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组,且差异显著(P<0.05)。     

假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响

本试验旨在研究假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响。270只1日龄海南文昌公鸡,随机分为6个组,每组3个重复,每重复15只,T1、T2和T3组为对照组(依次分为不感染不给药组、感染不给药组、感染给药组);T4、T5和T6组为假蒟添加组,分别在基础日粮中添加200、400、600mg/kg假蒟提取物粉剂。15日龄时,每组随机抽取30只鸡,除T1组灌服生理盐水外,其他各组鸡均经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊悬液,分别于接种前1d,接种后3、6、9d清晨采血测定其血液指标。结果表明,与感染球虫不给药的T2组相比,假蒟组(T4、T5、T6)可以显著降低感染球虫鸡粪便中球虫卵囊值(P0.05)。假蒟组在感染球虫后第6天,与T1组比,RBC、HGB、HCT、Ca2+、Na+、Cl-、TP、ALB、GLB、TG、CHOL、T4等指标呈下降趋势;但在感染球虫后第9天,TP、GLB含量均显著高于T1组(P0.05);在感染球虫后第6天,假蒟组与对照组相比,ALT、AST浓度水平均显著降低(P0.05)。结果提示,假蒟提取物能提高感染球虫后鸡机体免疫机能,降低肝脏损伤,降低鸡感染球虫后粪便卵囊值,具有一定的抗球虫效果。     

槟榔提取物对球虫感染鸡血液指标及抗球虫效果的影响

本试验旨在研究槟榔提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标及抗球虫效果的影响。选取270只1日龄文昌鸡公鸡,随机分为6个组,分别为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组及槟榔1、2、3组,其中,3个对照组均饲喂雏鸡基础日粮,槟榔1、2、3组分别饲喂在基础日粮中添加200、400、600 mg/kg槟榔提取物粉剂的试验日粮。15日龄时,随机从每组中抽取30只体重相近的鸡,除空白对照组外,各组每只试验鸡经口灌服1 mL含1×10⁵个球虫孢子化卵囊的生理盐水混合液。结果表明:①感染后第6、9天,与空白对照组、阳性对照组相比,槟榔1、2、3组和阴性对照组血液中红细胞数、血红蛋白浓度、红细胞比容降低;②感染后第3、9天,与空白对照组相比,阳性对照组和槟榔1组血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白含量升高;感染后第9天,槟榔2、3组血清中谷丙转氨酶含量较空白对照组、阳性对照组显著降低(P<0.05),槟榔1组血清中尿酸含量较阴性对照组、阳性对照组及槟榔2、3组显著降低(P<0.05);感染后第6天,阴性对照组血清中Na⁺、Cl^-浓度较空白对照组、阳性对照组显著降低(P<0.05),槟榔1组Na⁺、Cl^-浓度与3个对照组间差异均不显著(P>0.05);③槟榔1、2、3组的抗球虫指数分别为128.48、126.53和141.11。综上所述,日粮中添加200、400和600 mg/kg槟榔提取物粉剂对于球虫感染鸡抗球虫药效中等;200、400 mg/kg槟榔提取物粉剂可维持感染球虫鸡血清中Na⁺、Cl^-浓度的稳定,降低肝脏损伤。