猪伪狂犬病的诊断和防控效果评估

为了研究山西某规模化猪场发病原因、感染猪伪狂犬病毒(PRV)毒株及防控措施的有效性。通过观察分析猪群生产指标、临床表现和剖检变化,采集病猪组织、血清和猪场使用的疫苗,采用实时荧光定量PCR(qPCR)、病毒分离培养、PRV gC基因测序、中和抗体检测和ELISA抗体检测等方法,确诊疾病、鉴定病原、评估防控效果。表明猪场发病猪只检测PRV核酸阳性,从仔猪脑组织中分离到PRV,将其命名为PRV-TZ,母猪gE抗体阳性率从15.00%升高到84.62%,确诊猪场感染了PRV,且此毒株gC基因与国内2012年后流行变异毒株TJ、CD 2019和SN 2018等毒株同源性高达100.00%,与市场上HB2000弱毒疫苗同源性为99.70%,与C株弱毒疫苗同源性为95.82%,推断该猪场因免疫不能提供完全保护而造成猪只发病。猪场更换成HB2000疫苗免疫后2个月,母猪流产率降至0%,仔猪成活率恢复到发病前,针对PRV-TZ株的中和抗体1∶32所占比例由更换疫苗前的0.00%升高到68.75%,预测当中和抗体1∶32以上的比例达到60%时可阻止猪群继续感染。     

北疆地区猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测与分析

为了解2014年2月至2016年4月新疆北疆地区猪伪狂犬病病毒野毒感染情况,试验从北疆地区的17个规模化猪场(克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯4个不同区域)采集血样932份,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测猪伪狂犬病病毒g E蛋白抗体水平,结果发现有139份阳性血清,平均阳性率为14.91%。对4个不同区域PRV g E蛋白抗体分析发现,玛纳斯区域的平均阳性率最高,为18.27%。试验对猪场的PRV g E蛋白抗体检测呈阳性的个体进行分析发现,玛纳斯区域的阳性个体平均S/N值最大,为0.269 1。研究表明,虽然北疆地区PRV g E蛋白抗体阳性率较低,但各猪场普遍存在PRV,希望该试验对北疆乃至全疆各猪场PR的预防和净化工作有所帮助。     

新疆巴州地区部分猪场猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测与分析

为调查新疆巴州地区猪群PRV野毒感染情况,本试验从巴州地区的18个规模化猪场采集血样865份,采用间接ELISA方法检测PRV-gE蛋白抗体情况。865份血清中检出gE抗体阳性血清82份,阳性率9.48%;检出可疑血清8份,可疑率为0.92%;18个猪场中,阳性率最大值为17.78%,最小值为2.22%。统计巴州地区的9个区域发现,库尔勒市PRV-gE蛋白抗体检测平均阳性率最高,为16.79%;焉耆县仅次于库尔勒市,为11.22%;且末县最低,为3.44%;分析不同年龄阶段猪群发现,后备母猪的PRV-gE蛋白抗体阳性率最低,为2.52%;阳性率最高的猪群是0～10日龄仔猪,为18.95%。希望该调查结果对巴州乃至全疆各猪场PR的预防和净化工作提供参考。     

2012—2015年我国部分地区规模化猪场伪狂犬病血清流行病学调查

为了解我国规模化猪场猪伪狂犬病毒(PRV)野毒感染情况,对2012年1月—2015年8月送检的16个省(直辖市)包括240个规模化猪场的7 443份血清样品进行PRV gp I(gE)抗体的检测。结果显示:送检样品中PRVgp I(g E)抗体阳性率在2012年、2013年、2014年和2015年8月份前分别为39.4%,39.6%,43.8%和50.8%。对不同生长阶段的猪群检测结果分析表明,不同生长阶段猪群PRV野毒抗体阳性率差异明显,后备母猪和公猪的PRV gpI(gE)的阳性率偏高;不同季度送检的血清PRV野毒抗体阳性率也有差异。送检样品的规模化养猪场使用的猪伪狂犬疫苗均是gE基因缺失的活疫苗,因此,gE抗体阳性的猪场可以判定为PRV野毒感染阳性场。     

江苏省猪伪狂犬病流行病学调查及两种疫苗免疫效果评估

为了掌控江苏地区规模化猪场伪狂犬病野毒的感染情况及其流行性趋势,比较变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的免疫防控效果。于2017年5月份至2019年1月份对江苏地区59个规模场进行采样,通过间接ELISA方法检测猪群中的gE抗体来鉴定猪群是否被伪狂犬病野毒感染。另外,在一猪伪狂犬病阳性的规模猪场进行变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的防控效果的实验,通过检测猪伪狂犬病gE,gB抗体及中和抗体来判定猪群的猪伪狂犬病抗体保护水平。显示4 608份检测血样中,gE阳性1 681份,阳性率36%,母猪群gE阳性率46%,育肥猪群gE阳性率28%,59个猪场中育肥阶段gE阳性的猪场22个,占比37%。在其中一个商品猪群gE抗体100%阳性猪场进行2组猪伪狂犬病疫苗的实验,通过实验2组商品猪gE抗体18周龄至出栏前均为阴性,同时检测发现变异株疫苗(C株)对经典株和变异株的中和抗体效价均高于Bartha-K61疫苗。结果表明,江苏地区猪伪狂犬病感染压力较大,另外C株疫苗相对于进口的Bartha-K61株疫苗在本场的免疫效果更佳。     

猪伪狂犬病抗体检测与分析

为了调查湖北省规模化猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)免疫抗体水平和野毒感染情况,试验应用猪PRV gB和PRV gE抗体ELISA检测试剂盒对采集的湖北省11个市(州)的16个规模化猪场的1 109份血清样品按照不同猪场、不同地区和不同生长阶段三个方面进行了PRV gB和PRV gE抗体的检测(包括阳性数和阳性率),并对检测结果进行统计分析。结果表明:被检测的16个猪场中有12个为野毒阳性感染场,占比为75%。在不同猪场,PRV gB阳性样品数为953份,阳性率为85. 93%; PRV gE阳性样品数为223份,阳性率为20. 11%; PRV gB抗体阳性率与PRV gE抗体阳性率呈显著负相关。在不同地区,PRV gB抗体阳性率最高的地区为鄂中,为90. 36%; PRV gE抗体阳性率最高的地区为鄂东,为30. 75%。在不同生长阶段,PRV gB抗体阳性率最高的猪为后备母猪,为93. 06%; PRV gE抗体阳性率最高的猪为经产母猪,为30. 38%。     

贵州省猪伪狂犬病的分子流行病学调查及变异分析

为了解贵州省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的分子流行病学状况,本试验对贵州省16个规模化猪场2016-2017年间采集的1430份血液样品进行PRV gE/gB抗体ELISA和PCR检测,并对PCR检测呈阳性的部分样品进行gE基因的克隆、测序及分析。结果表明,共检出PRV gE抗体阳性样品27份,其中PRV在保育猪中的gB抗体阳性率为90.35%,相对保护力较为薄弱,野毒检出率最高;克隆测序得到的4株PRV gE基因序列中,株间核苷酸同源性为99.6%～99.9%,氨基酸同源性为99.1%～99.8%;遗传进化树分析得出检测毒株与GenBank上已公布的变异毒株序列同属一个较大而独立的分支。试验为了解和研究PRV贵州流行株的分子流行状况及变异特征提供一定的理论依据。     

检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江4省部分地区收集到的1089份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清流行病学进行初步调查。结果JEV抗体阳性率为68.2%,其中,种猪JEV抗体阳性率为82.1%,商品猪JEV抗体阳性率为62.6%。从中随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92%和96.4%,2种方法的符合率为95.6%;与NS1蛋白包被建立的ELISA比较,两者的符合率为97.7%;同时,本法的阳性检出率显著高于临床普遍使用的乳胶凝集试验结果。由此表明,本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模猪乙型脑炎血清流行病学调查。     

2018—2019年苏豫赣三省猪伪狂犬病病毒野毒抗体流行病学调查

为了解近2年苏豫赣地区猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,采集江苏、河南和江西3省111家规模猪场3 804份猪的血清样品,用PRV gE-ELISA抗体检测方法进行PRV野毒抗体检测,结果:猪场PRV gE抗体阳性率为75.68%(84/111),血清样品总阳性率为36.75%(1 398/3 804),其中,种公猪PRV gE抗体阳性率最高,为68.89%;生产母猪PRV gE抗体阳性率最低,为28.84%。此外,春季血清gE抗体阳性率最高,夏季较低。调查结果表明,该地区猪场PRV野毒感染率依然较高,制定科学合理的免疫程序并加强综合防控十分必要。     

2018年湖南省规模猪场伪狂犬病血清学调查

为了解湖南省规模化猪场猪伪狂犬病免疫状况及猪伪狂犬病毒感染情况,2018年在湖南省14个市州208个规模猪场采集4288份猪血清,采用ELISA方法检测血清中的伪狂犬病毒抗体。结果显示,免疫猪PRV gB抗体个体阳性率为78.1%,PRV gE抗体个体阳性率为21.0%,场阳性率为38.9%;从不同养殖规模来看,存栏量在1000头以上的大型猪场PRV gE抗体阳性率最高,为22.9%;在季节分布上,夏季猪群的PRV gE抗体阳性率最高,为25.1%;在不同的年龄阶段中,以种母猪PRV gE抗体阳性率最高,为36.2%。表明猪伪狂犬病在湖南地区仍广泛流行,野毒感染情况较为普遍。     

2014年－2015年湖南省规模猪场猪伪狂犬病血清学调查

为了解湖南省规模化猪场猪伪狂犬病免疫状况及猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染情况,2014年－2015年,采用随机抽样的方式,采集343个不同规模猪场血清样品7049份,采用 ELISA 方法开展PRV 抗体血清学调查.结果显示,160个规模猪场中,检测免疫猪血清3415份,PRVgB 抗体合格数为2206份,合格率仅为64．60％,表明规模猪场猪伪狂犬病免疫不确实;343个规模猪场中,210个规模猪场PRVgE 抗体阳性,场阳性率61．22％;检测猪血清样品7049份,PRVgE 抗体阳性数为 1661份,阳性率为23．56％,其中2014年 PRVgE 抗体阳性率为21．71％,2015年 PRVgE 抗体阳性率为25．17％,呈上升趋势.全省14个市州的规模猪场均存在不同程度的 PRV 感染,不同地区感染率差异明显,永州感染率最高,长沙感染率最低.不同养殖规模 PRV 的感染率不尽相同,其中,存栏数200头以下 PRV 感染率较高,存栏数500~1000头感染率较低;种猪场免疫抗体优于商品猪场,PRV 感染率较商品猪场低.结果表明,PRV 在湖南省感染普遍存在,疫苗免疫在一定程度上可以阻止临床病例,但仍然无法根除隐性感染,对规模猪场伪狂犬病采取综合防控和净化措施势在必行.     

2012～2017年我国部分地区规模化猪场PRV野毒流行病学调查

为了监测我国规模化猪场伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)野毒感染情况,本研究采用伪狂犬g E抗体ELISA检测试剂盒对2012年2月~2017年7月送检的我国11个省份925个规模化猪场的44809份猪血清样品进行PRV野毒抗体检测。结果显示,925个猪场中有508个野毒阳性猪场,占检测猪场总数的54.91%,检出9153份阳性猪血清,平均阳性率为20.42%。其中种猪的野毒感染情况最明显,检出率较高,阳性率为23.19%;育肥猪的阳性检出率最低为17.22%。调查表明,我国规模化猪场猪群中仍存在PRV野毒感染。同时,本调查分析了不同地区、不同日龄猪的PRV野毒感染情况及该病的流行趋势,为我国伪狂犬病的净化提供思路。     

猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

以猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)VP1重组蛋白为包被抗原,建立了检测EMCV血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).经优化,获得间接ELISA的最佳反应条件为抗原包被浓度0.625 μg/mL,待...     

长沙市对伪狂犬病野毒感染的调查

为了解长沙市规模猪场伪狂犬病流行情况,对市内47个规模猪场送检的1534猪血清样品和22个已免疫伪狂犬基因缺失苗规模场送检的1300份血清样品,用ELISA方法对猪伪狂犬病野毒感染抗体（gpI抗体,下同）和免疫抗体（gB抗体,下同）进行检测。结果表明,长沙市规模猪场猪伪狂犬病gpI抗体阳性率为20.9%,场阳性率为44.7%;22个免疫猪伪狂犬基因缺失苗规模猪场猪伪狂犬病gpI抗体阳性率下降1.8%,场阳性数下降4.6%。结果表明,通过利用猪伪狂犬病基因缺失疫苗科学免疫,同时配合伪狂犬野毒抗体检测技术可以控制和净化规模猪场猪伪狂犬病流行。     

2006-2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查

为了监测现有的防疫控制体系下我国规模化猪场PRV野毒感染情况,本研究应用IDEXX PRV gEELISA试剂盒对2006年9月～2008年9月送检的14个省（直辖市）89个规模化猪场的5312份样品血清进行PRV野毒抗体检测。结果显示,PRV野毒抗体阳性猪场有65个,占检测猪场总数的73．03％;各猪场血清样品中伪狂犬野毒抗体平均阳性率为23．40％。对不同生长阶段的猪群检测结果分析表明,PRV野毒抗体阳性率随猪龄的增长而升高,且不同生长阶段猪群PRV野毒抗体阳性率差异极显著,而不同季度送检的血清PRV野毒抗体阳性率没有显著差异。本次调查表明,我国免疫猪伪狂犬病毒基因缺失疫苗的规模化猪场仍存在猪伪狂犬野毒感染。     

猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型（PCV1）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20 ℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。     

河北省猪场伪狂犬病病毒感染情况调查及gE基因遗传变异分析

采用ELISA检测方法对2018年1月至2019年5月从河北省11个地市195个不同规模猪场采集的10 479份血清进行gE抗体的检测,采用PCR方法对流产胎儿进行猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的抗原检測,并将部分阳性样本进行gE全基因的扩增和遗传变异分析.血清学检测结果显示,所检测的河...     

2020年北疆部分地区猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体ELISA检测与分析

为了解2020年1—12月北疆部分地区猪伪狂犬病野毒株（PRV-gE）感染情况,采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法对从北疆4个地区采集的657份猪血样进行PRV-gE蛋白抗体水平检测。结果显示,4个地区PRV-gE抗体阳性率为29.83%（196/657）,乌苏地区与其他地区的抗体水平存在一定差异（P<0.05）;各猪场中A场的阳性检出率最高,为83.78%（62/74）;D场和H场的阳性检出率最低,为0.00%;不同类别猪群中,保育猪的PRV-gE蛋白抗体阳性率最高,为46.77%（29/62）;哺乳仔猪抗体水平与其他猪群均存在一定差异（P<0.05）。试验表明,各个猪群均存在野毒感染情况,各养猪场之间、不同生长阶段感染情况不一。该试验可为北疆地区猪场PR防控与净化提供参考。     

猪链球菌自溶素的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】 建立快速、准确检测猪链球菌自溶素（atl）抗体的间接ELISA方法。【方法】 根据GenBank登录的猪链球菌atl基因序列设计1对引物,采用PCR方法从猪源链球菌中获得atl基因序列;构建pET-32a-atl和pGEX-4T-1-atl重组质粒,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达;以表达纯化后的atl-His融合蛋白为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;以兔多克隆抗体为一抗,用Western blotting方法检测atl-GST融合蛋白的反应原性;以纯化后的atl-GST融合蛋白为包被抗原,猪链球菌感染阳性血清作为标准血清,建立猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA检测方法。利用本试验建立的ELISA方法与商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒同时对184份血清样品进行检测并用本试验建立的方法进行临床样品检测。【结果】 从猪链球菌中成功扩增出atl基因;构建的重组质粒,经诱导表达和纯化,获得大小为40 ku的atl-His和48 ku的atl-GST融合蛋白;经Western blotting验证,兔抗atl-His抗血清与atl-GST融合蛋白具有良好的反应原性;间接ELISA结果显示,该检测方法的阴阳临界值为0.318,阳性血清稀释至1：1 280检测仍为阳性;批内批间变异系数均<10%,表明该方法具有良好的重复性及敏感性。本试验所建立的ELISA方法检测出96份阳性样品,商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒检测出66份阳性样品,符合率为71.7%。应用建立的方法检测458份不同饲养阶段的猪血清样品,其中检出277份阳性样品,阳性率为60.4%。【结论】 本试验成功建立了检测猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA方法并进行了初步应用,为猪链球菌病血清流行病学调查奠定了基础。