基于网络药理学探讨葛根芩连汤治疗猪腹泻的靶点与通路

本研究旨在探讨葛根芩连汤治疗猪腹泻的靶点与通路。利用中药系统药理学分析平台（TCMSP）检测葛根芩连汤的化学成分和靶点,运用cytoscape 3.7.1软件构建并分析化合物-靶点网络、蛋白相互作用（PPI）网络和核心靶点通路网络。结果显示,经筛选后,共获得大豆苷元（daidzein）、葛根素（puerarin）、汉黄芩苷（oroxindin）、芒柄花素（formononetin）等60个活性成分,这些成分作用206个靶点,其中,TP53、TNF、IL-6、IL-8、JUN、STAT3等为核心靶点,这些核心靶点涉及磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B信号通路、病毒致癌机制等。基于网络药理学分析结果,葛根芩连汤可能是通过TP53、TNF、IL-6、IL-8、JUN、STAT3等靶点调控腹泻与发热,本文为葛根芩连汤在猪腹泻治疗中的深入研究提供理论依据与线索。     

The Target and Pathway of Gegen Qinlian Decoction in Treating Swine Diarrhea Based on Network Pharmacology

This experiment was conducted to explore the mechanism of Gegen Qinlian decoction in treating swine diarrhea. The chemical composition and targets of Gegen Qinlian decoction were searched by the analysis of the traditional Chinese medicine system pharmacology platform (TCMSP). The software of Cytoscape 3.7.1 was used to construct and analyze compound-targets networks, protein-protein interaction (PPI) network and key targets-signaling pathway network. The results showed that 60 active compounds including daidzein, puerarin, oroxindin and formononetin were obtained after screening. The compounds acted on 206 targets, among which TP53, TNF, IL-6, IL-8, Jun and STAT3 were the key targets. These key targets involve in PI3K-Akt signaling pathway, Viral carcinogenesis, and so on. Based on the results of network pharmacological analysis, Gegen Qinlian decoction may regulate diarrhea and fever through TP53, TNF, IL-6, IL-8, Jun, STAT3 and other targets. The paper provides theoretical basis and clues for the further study of Gegen Qinlian decoction in the treatment of swine diarrhea.     

芩连液与白虎汤对气分证家兔补体经典途径活化的影响比较

为比较经方白虎汤与自拟方芩连液的分子疗效区别,以静脉注射内毒素建立了具有高热证候的气分证家兔模型,并用白虎汤和自拟方芩连液分别进行治疗,通过ELISA检测比较治疗前后血清总补体(CH50)的含量变化,并采用实时荧光定量PCR技术检测了肝组织中补体第三成分(C3)基因和C-反应蛋白(CRP)基因的表达变化。结果表明,在气分证家兔模型中,补体系统以经典途径活化。白虎汤的治疗能同时保证C3基因和CRP基因的高表达起到治愈作用,而芩连液仅以提高CRP的表达量发挥一定的保护作用。研究表明白虎汤对动物气分证的疗效优于芩连液。     

基于网络药理学分析白头翁汤治疗猪腹泻的作用机制

试验利用网络药理学研究方法尝试揭示白头翁汤治疗猪腹泻的活性成分、作用靶点及其基因功能、信号通路的机制。首先在中药系统药理学分析数据库中检索白头翁汤的所有化学成分、作用靶点,进而利用STRING、DAVID、NCBI数据库,Cytoscape软件构建化合物-靶点网络、蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络、靶点-通路网络,研究白头翁汤治疗猪腹泻的作用机制。通过化合物的口服利用度和类药性筛选得出白头翁汤11个活性化合物,化合物-靶点网络结果显示,11个活性化合物含有63个相应靶点;白头翁汤作用于猪腹泻的PPI网络图包含45个靶点,主要靶点是雌激素受体1（estrogen receptor,ESR1）、CREB结合蛋白（CREB binding protein,CREBBP）、丝裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1）、雄激素受体（androgen receptor,AR）等,与猪腹泻靶点基因直接相关的靶点是拓扑异构酶Ⅱβ（DNA topoisomerase Ⅱ,TOP2B）、ESR1、ESR2、糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,NR3C1）、AR和细胞核受体共激活剂2（nuclear receptor coactivator 2,NCOA2）;白头翁汤-猪腹泻PPI网络图关键靶点GO富集条目为5个,其中生物过程、分子功能、细胞组成相关的条目分别有3、1、1个;白头翁汤作用于猪腹泻PPI网络图KEGG信号通路有1条。白头翁汤可能主要通过金鱼草素、掌叶防己碱、8-异戊烯基二氢茆酚-7-葡糖苷、延胡索乙素、足叶草脂素、黄麻苷和8-羟基松脂醇等调控TOP2B、ESR1、ESR2、NR3C1、AR和NCOA2等靶点,基因功能富集于磷脂酶C激活G蛋白偶联受体信号通路、腺苷酸环化酶激活肾上腺素能受体信号通路、DNA模板转录、类固醇结合、细胞膜的组成部分,以及通过KEGG信号通路中神经活性的配体-受体相互作用信号通路来治疗猪腹泻。     

五加芪水煎液对小鼠免疫功能的影响

旨在研究五加芪水煎液对小鼠免疫功能的影响。将6周龄雌性昆明小鼠随机分成正常小鼠组(正常对照,高、中、低剂量组)和免疫抑制小鼠组(正常对照,Hy+蒸馏水组,Hy+高剂量组,Hy+中剂量组,Hy+低剂量组),连续灌胃7d,测定小鼠免疫器官指数、碳粒廓清指数、血清溶血素水平和脾内抗体形成细胞(PFC)的变化。结果表明,高、中剂量五加芪水煎液可显著提高正常小鼠脾指数(P0.01),各给药组均能显著提高正常小鼠胸腺指数(P0.01或P0.05)和碳粒廓清指数(P0.01),高剂量五加芪水煎液能显著提高正常小鼠血清溶血素水平(P0.01),各给药组均对正常小鼠脾内抗体形成细胞数量无明显影响(P0.05)。各剂量五加芪水煎液均使免疫抑制小鼠脾指数、胸腺指数、碳粒廓清指数、血清溶血素水平和脾内抗体形成细胞数量显著提高(与Hy+蒸馏水组相比,P0.01或P0.05),且恢复至正常水平(与正常组相比,P0.05)。     

四君子汤体外抗脂质过氧化和活性氧自由基的作用

本研究观察了四君子汤体外对肝组织自发生成MDA、Fe2+-Vit C诱导心、肝、肾生成MDA、H2O2诱导红细胞溶血试验及对O2生成的影响。结果显示四君子汤能够明显抑制肝组织自发性和Fe2+-VitC体系诱导的心、肝、肾MDA生成（P<0.01）,并能够明显抑制H2O2诱导的红细胞溶血（P<0.01）,同时,对O2生成也有显著抑制作用（P<0.01）,表明四君子汤在体外能够抑制或清除OH、O2、H2O2等自由基的生成,阻止自由基引发对生物膜的过氧化损伤。     

四君子汤对仔猪胸腺及脾脏生长激素受体mRNA表达的影响

选用90头新生"杜×长×大"三元杂交仔猪,随机分为3组,每组30头,分别为中药I组(中药添加剂量10 g/kg),中药Ⅱ组(中药添加剂量20 g/kg),对照组(基础日粮组),试验期为31 d.45日龄时每窝随机选取6头仔猪屠宰后,分别采集胸腺和脾脏.采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,定量分析仔猪胸腺及脾脏中生长激素受体(GHR)mRNA的相对丰度.结果显示,与对照组相比较,2种剂量中药组的仔猪胸腺及脾脏中生长激素受体mRNA的含量均不同程度地提高,中药Ⅱ组效果更为显著.     

Keap1-Nrf2/ARE信号通路及其在畜禽抗氧化中的研究进展

正常生理状态下,动物体内自由基的产生和清除处于稳定的动态平衡,但发生氧化应激时,体内自由基产生的量超过自身清除能力,引起氧化系统和抗氧化系统的失衡,造成氧化损伤。而Keap1-Nrf2/ARE信号通路的激活在预防氧化应激引起的细胞和组织损伤、维持氧化还原平衡和蛋白质稳态以及调节炎症方面具有关键作用。Keap1是Nrf2的胞浆抑制蛋白,在正常生理状态下,Nrf2与Keap1结合而发生泛素化和蛋白酶体降解,使细胞核内Nrf2的含量维持在一个相对较低的水平。在氧化应激条件下,Keap1对Nrf2的泛素化和降解的能力减弱,细胞核中Nrf2积聚,Nrf2与抗氧化反应元件（ARE）结合后启动下游一系列保护性基因的表达,使机体从氧化应激状态恢复到正常的生理状态。氧化应激参与多种病理生理变化,对畜禽的生产性能、生长发育、繁殖性能、肉品质等有负面影响,Keap1-Nrf2/ARE信号通路是细胞内最重要的抗氧化应激通路之一,对动物的健康保护极其重要。作者总结了Keap1-Nrf2/ARE信号通路的基本结构和活化机制及其在畜禽抗氧化中的研究进展,阐述了其在提高畜禽的抗氧化、抗炎能力和在肉品质中的重要作用,以期为缓解当前畜禽业中严重的氧化应激和炎症提供理论依据。     

四君子汤超微粉对脾虚小鼠总抗氧化能力和NO的影响

为测定四君子汤超微粉的作用效果,用利血平复制脾虚小鼠模型,比较分析了不同剂量水平的四君子汤超微粉混悬液和四君子汤传统水煎液对小鼠总抗氧化能力和一氧化氮(NO)的影响,以期为四君子汤超微粉的临床应用奠定基础。结果表明,在总抗氧化能力方面,2个剂量水平(0.15 mL,0.075 mL)超微粉混悬液的作用效果不及传统水煎液;在NO方面,2个剂量水平(0.15mL,0.075 mL)的超微粉混悬液,其作用效果明显优于传统水煎液。     

鸭疫里默氏菌对鸭盲肠组织形态结构和TLR4信号通路相关基因表达的影响

为探讨鸭疫里默氏菌的可能致病机制,本试验采用显微镜观察鸭疫里默氏菌感染后鸭盲肠组织的形态结构变化,并对肠黏膜厚度、肠绒毛高度及隐窝深度进行测量和统计,采用实时荧光定量PCR法检测鸭疫里默氏菌感染后盲肠组织中TLR4信号通路相关基因的表达变化。病理学观察结果显示,鸭疫里默氏菌感染后肠道结构有明显的损伤,表现为肠绒毛脱落、淤血、出血、淋巴细胞浸润和淋巴细胞增生;统计结果表明,2 d时,鸭疫里默氏菌感染组的肠黏膜厚度（383.58 μm）显著低于对照组（643.39 μm）（P<0.05）;2和5 d时,感染组的肠绒毛高度（173.04和168.68 μm）均显著低于对照组（355.79和276.54 μm）（P<0.05）;9 d时,鸭疫里默氏菌感染组的绒毛高度/隐窝深度的比值（3.42）显著低于对照组（5.34）（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,鸭疫里默氏菌感染后2和5 d,TLR4信号通路相关基因TLR4、MD2、MyD88、TRAF6、NF-κB、IL-4和IL-8 mRNA的表达量上调。说明鸭疫里默氏菌感染可导致盲肠的肠黏膜组织物理损伤和炎性病变,且TLR4信号通路参与了该炎性反应过程。