2013年-2015年西安宠物门诊家养猫泛白细胞减少症病例调查

猫泛白细胞减少症(FP)是由猫泛白细胞减少症病毒(FPV)引起的猫科动物的急性高度接触性传染病,临床上常以发热、呕吐、腹泻、脱水、肠炎以及白细胞极度减少为主要特征.本病传播速度快,对猫科动物危害极大.近年来,西安地区家养猫数量不断增加,患FP的病例也随之增多.为了解西安地区家养猫FPV感染和发病情况,为本病的防控提供基础资料,2013年7月~2015年7月,用猫泛白细胞减少症病毒检测试剂盒,对西安市部分宠物(动物)医院接诊的疑似FP病猫的467份粪便进行FPV检测,共检出阳性样品71份,占15.2%(71/467),其中2013年5份,2014年57份,2015年9份;阳性患猫中未免疫接种FPV疫苗的有70份,占98.6%(70/71).确诊病例中47.9%(34/71)临床出现呕吐症状,71.8%(51/71)出现腹泻症状.血液分析发现,84.51%的FPV感染猫的白细胞低于正常值;对71个患猫进行对症和支持治疗后存活率为83.1%(59/71).     

北京地区犬猫弓形虫病流行病学调查

为初步调查北京地区犬猫弓形虫感染的流病学特征,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测2010年5月至2011年4月采集的家养犬猫、流浪猫血清样本.其中,家养犬血清样本1876份,家养猫血清样本561份,检测发现,家养犬动物弓形虫IgG抗体阳性率24.9％;家养猫弓形虫IgG阳性率21.2％;同时检测流浪猫样本201份,阳性率30.3％.家养犬弓形虫血清抗体阳性率不同季节间差异显著(P＜0.05),夏季最高,为30.0％,家养猫弓形虫血清抗体阳性率不同季节间无显著差异(P＞0.05).不同性别犬猫弓形虫血清抗体阳性率无显著差异(P＞0.05).随着年龄增长,犬猫弓形虫抗体阳性率均有明显增长.对25例弓形虫抗体阳性家养犬病例和37例弓形虫抗体阳性家养猫病例进行了回访调查,结果发现,该62例动物主人的弓形虫检测结果均为阴性.     

猫瘟热病毒胶体金快速检测试纸的研究

利用双抗体夹心和胶体金免疫层析技术的原理,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金与猫瘟热病毒(FPV)单克隆抗体(3C4)的偶联物、FPV多克隆抗体和羊抗鼠IgG单克隆抗体,制成检测FPV抗原的猫瘟热病毒胶体金快速检测试纸,对临床26份虎粪便样本进行检测,并与PCR检测法及韩国(ASAN ...     

成都市猫泛白细胞减少症病毒、星状病毒和肠道冠状病毒的分子流行病学调查

为了解成都市区猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫星状病毒(FAstV)和猫肠道冠状病毒(FECoV)的分子流行情况,本试验采集了315份家养猫和34份社区流浪猫的肛门拭子,含228份临床发病猫样本和121份临床健康猫样本,采用PCR方法对所有样本进行病毒核酸检测。同时,根据动物年龄、生活状态和免疫情况等因素进行病原流行分析,并根据病毒基因片段序列构建遗传进化树。结果显示,FPV、FAstV和FECoV的检出率分别为38.4%(134/349)、23.2%(81/349)和19.5%(68/349)。在混合感染方面,以FPV/FAstV(9.5%,33/349)、FAstV/FECoV(4.6%,16/349)和FPV/FECoV(4.3%,15/349)双重感染为主。基于部分基因序列的分析结果显示,样本间FPV VP2基因序列的同源性为95.1%～100%,发病猫毒株分为两个分支,其中一支与葡萄牙毒株(GenBank登录号:KT240136)和加拿大毒株(GenBank登录号:MF069445)遗传关系较近;另一支与中国的CPV毒株(GenBank登录号:KY937664)关系较近。样本间FAstV ORF1b基因序列同源性为90.9%～99.7%,发病猫的毒株的两个分支中一支与葡萄牙毒株(GenBank登录号:KF374704)和美国毒株(GenBank登录号:KM017743)关系较近;另一分支与中国香港毒株(GenBank登录号:KF499111)关系紧密。样本间FECoV的N基因序列同源性范围为89.3%～100%,与美国毒株(GenBank登录号:FJ938059)、意大利毒株(GenBank登录号:GU017092/GU017107)和中国毒株(GenBank登录号:KT852997)关系密切。调查结果表明,成都市区猫携带病毒性腹泻病原的情况较为普遍,部分猫存在多病原混合感染,且病毒基因序列存在明显变异,增加了病原流行及带毒猫发病的风险,需积极地进行临床防控。     

成都市猫泛白细胞减少症病毒、星状病毒和肠道冠状病毒的分子流行病学调查

为了解成都市区猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫星状病毒(FAstV)和猫肠道冠状病毒(FECoV)的分子流行情况,本试验采集了315份家养猫和34份社区流浪猫的肛门拭子,含228份临床发病猫样本和121份临床健康猫样本,采用PCR方法对所有样本进行病毒核酸检测。同时,根据动物年龄、生活状态和免疫情况等因素进行病原流行分析,并根据病毒基因片段序列构建遗传进化树。结果显示,FPV、FAstV和FECoV的检出率分别为38.4%(134/349)、23.2%(81/349)和19.5%(68/349)。在混合感染方面,以FPV/FAstV(9.5%,33/349)、FAstV/FECoV(4.6%,16/349)和FPV/FECoV(4.3%,15/349)双重感染为主。基于部分基因序列的分析结果显示,样本间FPV VP2基因序列的同源性为95.1%～100%,发病猫毒株分为两个分支,其中一支与葡萄牙毒株(GenBank登录号:KT240136)和加拿大毒株(GenBank登录号:MF069445)遗传关系较近;另一支与中国的CPV毒株(GenBank登录号:KY937664)关系较近。样本间FAstV ORF1b基因序列同源性为90.9%～99.7%,发病猫的毒株的两个分支中一支与葡萄牙毒株(GenBank登录号:KF374704)和美国毒株(GenBank登录号:KM017743)关系较近;另一分支与中国香港毒株(GenBank登录号:KF499111)关系紧密。样本间FECoV的N基因序列同源性范围为89.3%～100%,与美国毒株(GenBank登录号:FJ938059)、意大利毒株(GenBank登录号:GU017092/GU017107)和中国毒株(GenBank登录号:KT852997)关系密切。调查结果表明,成都市区猫携带病毒性腹泻病原的情况较为普遍,部分猫存在多病原混合感染,且病毒基因序列存在明显变异,增加了病原流行及带毒猫发病的风险,需积极地进行临床防控。     

东北三省部分地区猫细小病毒VP2基因进化分析

为了研究我国东北三省部分地区猫细小病毒(Feline parvovirus, FPV)基因的遗传进化情况,试验用PCR方法对我国东北地区25份猫肛拭子进行检测,并对检测结果呈阳性的猫进行细小病毒VP2基因克隆测序,然后进行遗传进化分析。结果表明:经PCR扩增有10份为FPV阳性,其VP2基因序列与标准株M38246和疫苗株EU498681及EU498680的相似性达99.1%以上,有9株属于G1群,1株属于G2群。说明东北地区FPV基因型主要以G1群为主。     

猫泛白细胞减少症病毒VP2基因快速检测方法的建立与应用

为了调查猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)在猫群中的流行情况,根据Gen Bank已登录的FPV VP2基因序列设计PCR引物,建立了FPV PCR快速检测方法,并对3004份猫样品进行了检测。结果显示,该方法扩增的VP2基因片段为468 bp左右,检出的最小基因组DNA浓度为6.19×10-8μg/μL,检出DNA浓度低于1 fg/μL,从3004份样品中检测出13份猫泛白细胞减少症病毒核酸阳性样品。本研究针对FPV VP2基因建立的PCR快速检测方法可作为FPV临床早期诊断及快速筛查手段。     

圈养东北虎FPV感染情况的初步调查与研究

猫泛白细胞减少症是由猫泛白细胞减少症病毒引起的高度接触性传染病,近些年来该病严重影响着我国圈养大型野生猫科动物的健康.至今,国内外对大型野生猫科动物的FPV流行状况研究甚少.鉴于此,本研究分别于2006年11月、2007年2月和2007年7月随机收集62份、36份、45份虎粪便,利用PCR方法对其带病情况进行检测.结果表明,FPV的阳性率分别为54.8%,25%和0.在以上实验研究的基础上,对该圈养大型野生猫科动物群体中FPV的感染带毒情况和流行特点进行了探讨.     

猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用

为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus, FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。结果显示：能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。结果表明：研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为...     

猫细小病毒的分离与鉴定

为丰富猫细小病毒(FPV)流行病学资料和制备灭活疫苗,通过猫肾传代细胞(F81)培养方法从疑似感染FPV病猫粪便中分离病毒.对分离到的病毒进行理化性质分析和FPV特异性检测引物PCR鉴定,然后对FPV的VP2基因进行扩增测序.理化性质分析结果与FPV特性均相符,VP2基因测序结果与GenBank已发表的FPV标准株VP2基因序列对比分析,核苷酸序列同源性达到99.0％,证明该分离毒株为猫细小病毒.该毒株的成功分离进一步充实了我国FPV病毒库,也为灭活疫苗的制备奠定了基础.     

猫杯状病毒分离株VP1基因序列与致病性分析

旨在了解上海地区猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)VP1基因与致病性,采用常规方法分离鉴定出13株FCV,经RT-PCR和测序获得分离株VP1的基因序列,与参考株VP1基因进行同源性和遗传演化分析,对2株分离株进行动物致病性试验。结果显示,13株上海地区分离株VP1基因核苷酸序列相互间相似性为74.3%～99.8%,与参考株核苷酸序列和氨基酸序列相似性也较低,符合FCV易突变的特征;进化树分析表明,上海地区FCV流行株主要来自国内北方地区,少数毒株来自国外地区;通过对宿主临床症状、VP1进化树和VS-FCV特征性氨基酸位点进行分析,筛选出7株FCV强毒株;动物致病性试结果验表明,FCV-SH202101株和FCV-SH202113株可导致感染猫发病和死亡,潜伏期为1～2 d,接种后第3天即可检测到排毒,不同年龄段猫的病程不一致,可导致幼猫5 d后死亡,成年猫病程可持续11～18 d, 2株分离株在致病性方面均符合VS-FCV特征。本研究丰富了中国FCV的分子流行病学资料,为VS-FCV毒株的筛选提供了有力的证据,也为FCV疫苗的研究提供了技术支持。     

猫细小病毒的遗传演化及分离毒株的致病性分析

本研究旨在了解猫细小病毒（feline parvovirus,FPV）流行株的遗传演化情况及分离毒株的致病性。2018—2020年,在山东地区采集54份疑似猫瘟粪便拭子,并通过PCR和VP2基因克隆进行VP2基因全长测序,构建遗传进化树,并推导出氨基酸序列并与疫苗株进行比对,分析遗传变异情况。用F81细胞分离培养1株FPV毒株,命名为FPV-QDC20,经电镜观察、间接免疫荧光、血凝试验、TCID₅₀测定、全基因测序及动物回归试验研究该毒株生物学特性。结果表明,采集样品中16份样品VP2基因全长测序成功,其中,15份为FPV,1份为猫源犬细小病毒（CPV）。构建系统进化树显示,本研究的FPV毒株均处于同一大分支,与中国其他地区已发表的FPV毒株亲缘关系较近,与欧洲分离株以及疫苗株亲缘关系较远。氨基酸序列分析表明,某些关键位点的改变可能导致宿主范围和感染性的改变,有可能导致免疫失败情况发生。毒株QDBL2毒株中出现了80、93、103三个FPV保守位点的变异,或许与犬猫细小病毒的共感染和重组有关。动物回归试验表明,毒株FPV-QDC20有较强致病性,试验猫出现典型的临床症状和病理变化,并最终死亡。本研究有助了解我国FPV毒株遗传演化方向,为将来的疫病监控和疫苗研究提供参考。     

Isolation and Identification of Canine Parvovirus Virus and Sequence Analysis of VP2 Gene

A strain of virus was isolated and identified from feces of a suspected canine parvovirus (CPV) infected dog.It was eventually identified as CPV using electron microscope examination,hemagglutination (HA) test,animal regression experiment and molecular biology idenfication,designated as BJ-24 strain.The VP2 gene sequence analysis of BJ-24 strain showed that BJ-24 strain belonged to CPV-2a subtype.The analysis of VP2 gene indicated that the BJ-24 VP2 gene shared higher homology of nucleotide with 19 CPV strains available in GenBank and were more than 98.7%.The highest homology was 100.0% with CPV-JS2 strain.Phylogenetic tree analysis showed that BJ-24 strain belonged to China cluster and there was the closest distant between BJ-24 strain and CPV-JS2 strain.This study provided the basic evidence for further study on molecular epidemiology in Beijing and laid the solid foundation for developing vaccine and preventing the spread of CPV.     

犬细小病毒VP2基因克隆及原核表达分析

试验旨在了解河北与甘肃地区犬细小病毒流行情况,并通过原核表达系统获得犬细小病毒VP2蛋白,制备该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究犬细小病毒致病机理和治疗方法奠定基础。从10份疑似感染犬细小病毒犬的病料中提取病毒基因组DNA,并以其作为模板进行VP2基因的PCR扩增,将目的片段进行测序和分析后克隆至原核表达载体pET-30a中,阳性质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达,诱导产物经SDS-PAGE鉴定表达后切割目的蛋白条带免疫豚鼠制备多克隆抗体。序列分析结果显示成功克隆VP2基因,10株分离株中CPV-2a型占80%,CPV-2b型占20%。本试验检测的毒株与部分中国毒株形成了一个分支,与韩国、美国分离株呈现一定差异,与意大利分离株同源性较低。Western blotting分析证实了通过原核表达系统成功获得的大小为70 ku左右的重组蛋白具有反应原性和免疫原性。该试验初步表明河北与甘肃地区以CPV-2a型为主,原核表达的VP2蛋白具有良好的抗原性,本试验结果为犬细小病毒的防控提供科学依据。     

Analysis of Clone and Prokaryotic Expression of Canine Parvovirus VP2 Gene

The study was aimed to investigate the epidemic situation of canine parvovirus in Hebei and Gansu provinces.VP2 protein was expressed by prokaryotic system and polyclonal antibodies were prepared, which provided a basis for the further researches on pathogenesis and therapy of canine parvovirus.Virus genomic DNA was extracted from 10 epidemic materials of suspected infected dogs and VP2 gene was amplified.The target fragments of VP2 gene were cloned to pET-30a vector after sequencing and analysis, then the positive expression plasmids were transformed into E.coli BL21 (DE3) cell.Polyclonal antibodies were prepared by immunizing guinea pigs with the SDS-PAGE identification of purified protein.The genetic analysis results showed that the VP2 gene was successfully cloned and 80% samples were belonged to CPV-2a and 20% samples were belonged to CPV-2b.The isolated strains of the test and part of China strains were gathered into a branch which had certain distance with strains of Korea and USA, and that had low homology with strains of Italy.SDS-PAGE results indicated that the recombinant protein with a molecular weight of 70 ku was expressed by prokaryotic system.Western blotting results showed that the recombinant protein had good immuneoreactivity and immunogenicity.The study indicated that CPV-2a was the predominant gene type in Hebei and Gansu provinces, meanwhile VP2 protein expressed by prokaryotic system had good antigenicity.This research provided a basis for the future study of the prevention and control of canine parvovirus.     

犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析

本试验从北京某动物医院疑似犬细小病毒(CPV)感染犬粪便中分离出一株病毒。通过电子显微镜观察、血凝试验、动物回归试验和分子生物学鉴定,本试验成功分离出一株CPV,命名为BJ-24。对BJ-24株的VP2基因序列分析发现该分离株为CPV-2a亚型,其VP2基因与GenBank中19株CPV VP2基因核苷酸序列有较高的同源性,均在98.7%以上,甚至与CPV-JS2株达到100.0%。系统进化分析结果表明所分离的BJ-24株属于中国分支,与CPV-JS2株遗传距离最近。本试验对进一步开展北京地区CPV的流行病学调查提供基础依据,并对防制病毒传播和疫苗研制奠定了坚实的基础。     

猪轮状病毒江西株AY01的分离鉴定

【目的】确定江西省某猪场哺乳仔猪发生腹泻的病因。【方法】对送检的仔猪小肠样品进行猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)和猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)的RT-PCR检测,将阳性样品接种MA104细胞传代进行PoRV的分离;对分离毒株进行电镜观察、间接免疫荧光试验、PoRV VP4和VP7基因序列测序和动物回归等试验。【结果】猪小肠病料样品经终浓度15 μg/mL的胰酶处理37 ℃孵育2 h,接种MA104细胞,能在细胞上增殖传代,第6代开始表现稳定的细胞病变;电镜观察可见病毒粒子直径大小为61~70 nm,平均大小为65 nm,呈带有短纤突且外缘光滑的形似车轮状的粒子,具有轮状病毒粒子典型的形态特征;间接免疫荧光试验和RT-PCR检测均为PoRV阳性,确定该分离株为PoRV。分离株VP4和VP7基因序列分析显示,VP4基因型与P[23]基因型相似性最高,VP7基因型与G5基因型相似性最高,根据A群轮状病毒最新分类方法,分离株属于G5P[23]型。动物回归试验结果显示,经口感染该分离株的1日龄初生仔猪于感染后24 h左右陆续出现水样腹泻、呕吐等临床症状,并能在粪便中检测到PoRV。【结论】通过MA104细胞连续传代,从江西某猪场的腹泻仔猪小肠样品成功分离到1株PoRV,该分离株属于G5P[23]型PoRV,为哺乳仔猪发生腹泻的病原。     

浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

为了解2014-2016年浙江地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）ORF5基因变异情况,试验通过RT-PCR方法对从浙江省各地区采集的PRRSV阳性病料进行ORF5基因扩增,应用DNAStar和Mega 5.1软件对所测序列进行同源性和遗传变异分析。结果显示,54株2014-2016年浙江分离株ORF5序列之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.1%~100%和80.6%~100%,与经典株VR2332核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.8%~90.4%和81.6%~90.0%,与高致病PRRSV毒株JXA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.5%~99.5%和83.1%~99.0%。系统进化分析表明,54个毒株均为美洲型毒株,属于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ 3个不同的基因亚型,其中基因亚型Ⅲ和Ⅳ毒株是浙江省近年来新出现的毒株。氨基酸序列分析结果显示,54个毒株在GP5蛋白的信号肽区域、非中和抗体表位的氨基酸序列变异较大,而在中和表位氨基酸序列变异较小。本研究结果表明,浙江地区PRRSV流行出现了新形势,多种基因亚型共同存在,其中以基因亚型Ⅰ毒株为主。