应用快速ELISA检测蓝舌病抗体

用农业部动物检疫所蓝舌病组提供的蓝舌病快速ELISA方法检测绵羊血清353份,快速ELISA对琼扩阳性检出的覆盖率为100%,而且多检出阳性样品84份(高23.8个百分点),出结果时间由常规法的2.5小时缩短为45分钟。     

检测蓝舌病抗体的快速ELISA程序

在常规ELISA基础上建立了快速ELISA程序,优选出试验条件,经70份牛、羊血清试验,结果表明,快速ELISA对琼扩阳性检出的覆盖率为100%,且比琼扩多检出阳性样品12.85%,45分钟内即可出结果,比常规法缩短时间2/3,与常规ELISA敏感性一致。     

用斑点ELISA和间接ELISA检测蓝舌病病毒抗体的比较

目前广泛应用免疫扩散(ID)试验检测蓝舌病毒(BTV)群特异抗体,但敏感性较差。Manning和Chen(1980)建立的ELISA检测BTV抗体有很高的敏感性。而斑点ELISA(DIA)是一种快速、简便的另一种酶免疫检测方法。其敏感性与ELISA     

蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。     

用VP7—ELISA检测牛,羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅰ：VP7—ELISA检测蓝舌病抗体方

将表达有蓝舌病毒ＶＰ７蛋白的Ｓｆ２１细胞超声波处理制备ＶＰ７抗原,建立了ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检测蓝舌病抗体的方法,确定阴性阳性判定界值及最佳反应条件：待检牛血清阳性下限为３．０,羊血清阳性下限为２．４,ＶＰ７抗原包被浓度为１：８００,用含５％健康鸡血清的磷酸盐缓冲液作封闭液,待检血清１：１００稀释,豚鼠抗牛羊ＩｇＧ－ＨＲＰ结合物１：５００稀释,３７℃避免显色４ｍｉｎ～６ｍｉｎ。试验结果表明：ＶＰ７可与２３个不同血清型ＢＴＶ抗体反应,具有较高的群特异性和敏感性。     

蓝舌病病毒非结构蛋白研究进展

蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)感染动物宿主细胞后,病毒非结构蛋白进行表达而参与病毒基因的复制、基因组的组装及病毒粒子的释放。BTV基因组至少编码NSP1、NSP2、NSP3/NS3a和NSP4 4种非结构蛋白(non-structural proteins,NSPs),这些NSPs在BTV基因组的复制、组装及拮抗宿主细胞干扰素免疫应答等方面发挥重要的作用。本文就BTV主要结构蛋白、非结构蛋白最新的研究进展进行了综述,为BTV新型疫苗的研发、病毒诊断及病毒基因组复制及组装机制提供基础。     

ELISA检测牛口蹄疫非结构蛋白抗体

本实验采用间接ELISA方法检测牛口蹄疫病毒(FMDV)常规疫苗免疫牛的FMD抗体水平。实验采用引进的10头大通野血牦牛接种FND灭活疫苗15d后抗体产生情况,确定了血清抗体产生效价的OD值,实际操作证明该方法简易、快速、灵敏度高。     

两种蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为验证昆明海关检验检疫技术中心等单位联合研发的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTVB-ELISA)的临床适用性,将YN BTV B-ELISA检测试剂盒与法国ID.VET公司研制的蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒(ID.VET C-ELISA)进行比对检测试验。本试验对1 278份牛羊血清进行比对检测,另外对1份已知背景的阳性血清倍比稀释后进行检测,比较两种试剂盒的敏感性。结果显示:YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性分别是99.92%、99.63%、100%;将两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0. 998;YN BTV B-ELISA、ID.VET C-ELISA检测阳性血清效价的最低稀释倍数分别是1:128、1:16。试验表明,YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA检测试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性均较高,并且YN BTV B-ELISA检测试剂盒敏感性更高,在蓝舌病病毒抗体检测中具有良好的实用价值。     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新的适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）。对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感。本研究进一步验证改良后的Ｃ－ＥＬＩＳＡ可取代传统的ＡＧＩＤ方法成为ＢＴＶ群特异性抗体的检测标准方法，且它还具备操作简便，作用时间短等特点     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感，本研究     

质量控制图在蓝舌病竞争ELISA检测中的应用

[目的]建立蓝舌病竞争ELISA检测的质量控制图。[方法]采用即刻法与Levey-Jennings常规质控图法结合,绘制连续20次检测结果的质控图。更换质控血清批号和试剂盒批号时,采用双质控法对前3次实验结果做质控,再转入常规质控图。[结果]用即刻法对质控物进行3次连续测定后,就可对第3次检测结果进行质量控制,用此方法积累20次质控物的检测结果后,可用Excel绘制出Levey-Jennings常规质控图,用以实验室日常质控。若实验室更换质控血清批号和试剂盒批号,采用双质控法对前3次实验结果做质控。[结论]采用双质控法对前3次实验结果做质控,改进了即刻法只能从第3次结果进行质控的缺点,加强了即刻法在ELISA检测中的质控作用。     

2种蓝舌病ELISA抗体检测试剂盒的比较和分析

为了验证云南出入境检验检疫局检验检疫技术中心自主研发的蓝舌病病毒C-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTV C-ELISA)的可应用性,将YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒与美国IDEXX公司研制的蓝舌病病毒VP7蛋白抗体ELISA检测试剂盒对田间牛羊的1 028份血清样本进行对比检测试验,并使用YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒对15份检出的已知背景血清进行批内和批间可重复性试验。YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒相对IDEXX公司蓝舌病病毒ELISA抗体试剂盒的符合率、敏感性、特异性分别是98.44%、98.03%、98.85%,两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0.97。批内试验强阳性、弱阳性变异系数在0.23~1.81之间,阴性血清变异系数在3.94~6.64之间,批间试验强阳性、弱阳性变异系数在0.26~2.35之间,阴性血清变异系数在3.55~8.51之间。结果表明:YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒的符合率、敏感性、特异性均较高,具有高度的可靠性、一致性和真实性。YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒的批内和批间有高度的重复性,在蓝舌病的诊断中具有良好的实用价值。     

竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病抗体的研究

用已研制的BTV－11型VP7单克隆抗体建立了竞争酶联免疫吸附试验（C－ELISA）检测蓝舌病抗体的方法，并与琼脂免疫扩散试验（AGID）进行了检测比较，C－ELISA特异性强，不与相关环状病毒发生交叉反应，敏感性比AGID高。用研究制备的C－ELISA诊断试剂盒和美国、澳大利亚制备的诊断试剂盒对1377份临床样品的检测，以及对实验动物人工感染后抗体动脉检测。三种诊断试剂盒检测结果一致，且重复性好。本研究建立的蓝舌病C－ELISA是一种特异性强、敏感性高的蓝舌病抗体检测方法。     

用竞争ELISA检测火鸡冠状病毒抗体

火鸡冠状病毒感染是一种急性、高度传染性肠道疾病,1973年才正式定性本病,最近几年,火鸡冠状病毒已被确定为引起肠道疾病的重要瘸原。以前该病的血清学诊断主要应用间接荧光抗体试验,但该方法繁琐,操作复杂,不便推广应用。虽然也有特异性ELISA用于诊断,然而大量抗原的生产限制了     

蓝舌病单克隆抗体的研制

作者应用淋巴细胞杂交瘤技术,将小鼠骨髓瘤细胞SP_2(?)0—Ag14与提纯篮舌病10型病毒免疫的小鼠脾细胞进行杂交,制备能分泌抗蓝舌病病毒的单克隆细胞株225个,经三次克隆化,选择了35株杂交瘤细胞制备腹水,用间接ELISA和间接免疫荧光与蓝舌病病毒排谱反应表明,获得单抗中有12株具有群特异性。用蓝舌病病毒1、2、3、4、5、6、8、10、15和17型高免血清作阻断ELISA试验,单克隆抗体7D_8和2D_12有很明显阻断作用,可望用于检测临床样品。