禽致病性大肠杆菌对氟喹诺酮类药物交叉耐药性研究

以广东省野外分离的 15 8株禽致病性大肠杆菌为样本 ,采用纸片扩散法敏感试验标准方法 ,测定氟喹诺酮类药物诺氟沙星、环丙沙星、左氟沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、恩诺沙星在临床上的交叉耐药程度。结果显示 ,氟喹诺酮类药物之间存在不同程度的交叉耐药性 ,氟罗沙星对其他 5种试验药物的交叉耐药率为 96%～ 10 0 % ,而左氟沙星对其他药物的交叉耐药率最低 ,平均只有 42 .7% ;两种药物之间的交叉耐药率有的相同 ,但有的差异很大 ,说明交叉耐药性的产生可以是双向 ,也可以是单向或半单向 ,同时也揭示了氟喹诺酮类药物的抗菌机理并不完全相同     

132株临床分离仔猪大肠杆菌的耐药性分析

为了解吉林省不同地区猪场仔猪大肠杆菌的耐药性情况,实验采用Kirby-Bauer氏法(K-B法)测定了临床分离的132株致病性大肠杆菌对22种抗菌药物的耐药性,继而通过平皿二倍稀释法测定了其中的40株多重耐药性大肠杆菌对6种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,132株大肠杆菌均表现出不同程度的耐药,并且多数为多重耐药株,其中的40株多重耐药大肠杆菌对6种常用抗菌素的耐药率在31.3%~93.8%之间。这些结果为临床大肠杆菌病的诊断和治疗提供理论依据。     

大熊猫肠道大肠杆菌的分离、鉴定及其耐药性分析

本实验分离大熊猫粪便样品中大肠杆菌,利用形态学和分子生物学方法鉴定菌株,采用药敏纸片扩散法(Kirby-Bauer)进行常用抗生素耐药性试验分析。结果表明,从抗生素大类来比较,耐药率依次为:四环素类(55.6%)>青霉素类(26.7%)>磺胺类(18.9%)>喹诺酮类(10%)>头孢类(7.8%)>氨基糖苷类(1.1%)>单环内酰胺类(0)、碳青霉烯类(0)。大肠杆菌对四环素的耐药率最高,达到55.6%;对头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、亚胺配能及美罗配能等敏感,耐药率为0。其它抗菌药物耐药率依次是:阿莫西林(26.7%)>磺胺复合物(18.9%)>氨苄西林/舒巴坦(17.8%)>复方新诺明(11.1%)>萘啶酸(10%)>头孢噻吩(7.8%)>阿莫西林/克拉维酸(3.3%)>庆大霉素(2.2%),共产生了33种耐药谱,大部分菌株至少耐1种药物,TET为优势耐药谱(18/90),其次为TET、AML(10/90),多重耐药较普遍(40/90),个别菌株耐药谱达到6种,此研究为大熊猫肠道疾病的合理、科学治疗奠定了基础。     

猪源大肠杆菌的分离、鉴定及耐药性监测

为了调查京津冀地区猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型,从河北、北京、天津地区发生仔 猪黄、白痢的十个猪场分离60株大肠杆菌,其中致病性大肠杆菌55株,进行了生化和血清型鉴定,并 对其耐药性进行了监测与分析。结果发现:分离的猪致病性大肠杆菌优势血清型为O101、O152、O93、 O78、O54,这5种血清型占总分离致病菌株的56．4％(31/55)。所分离的60株大肠杆菌药敏试验结果中 抑菌作用最强的是茵必治、多粘菌素、先锋必、先锋霉素和壮观霉素,敏感率分别为95．0％(57/60)、 90．0％(56/60)、88．3％(53/60)、86．7％(52/60)和85％(51/60)。耐药率较高的分别为链霉素(80％)、庆大霉素 (53．3％)、氨苄青霉素(75％)复方新诺明(86．7％)、痢茵净(76．7％)、呋喃唑酮(71．2％)、诺氟沙星、环丙沙 星(51．7％)、喹乙醇(75％)和洛美杀星(70％)氟苯尼考(55％)。60株大肠杆菌多数为6耐以上的菌株 (80％),其中8耐、10耐、6耐最高分别为17％、15％、12％。     

长春地区鹿源性大肠杆菌的分离鉴定和耐药性分析

调查吉林省长春市周边地区（榆树、农安、九台、双阳和德惠）腹泻梅花鹿源大肠杆菌的血清型分布和耐药性。对梅花鹿源大肠杆菌进行分离、培养和生化反应鉴定;并对所得菌株进行玻片凝集法确定血清型;用平板扩散法或肉汤微量稀释法测定其对15种抗菌药物的敏感性;利用PCR方法检测9种耐药基因。共得到127株大肠杆菌,84株大肠杆菌属于36种不同的血清型,其中47株属于11种血清型,即O2,O7,O9,O21,O26,O87,O126,O128,O138,O142和O154;所得菌株对15种抗菌药物呈现不同程度的耐药性;耐药基因strB、strA、aadA、tetA和sul2在被检菌株中最为流行。菌株对磺胺类和四环素耐药性最严重,而且大多数菌株呈多重耐药性;对阿莫西林、卡那霉素较为敏感。对临床用药有指导意义。     

鸡大肠杆菌的分离和鉴定及耐药性监测

鸡大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的一种常见疾病。包括大肠杆菌性腹膜炎,输卵管炎,滑膜炎,脐炎,气囊炎,肉芽肿,炎和其他疾病,大肠杆菌到处是广泛存在于自然环境中,因此,形成一个鸡威胁整个过程,对家禽业的重大损失。大肠杆菌血清型,对当地流行菌株和不同血清型,同时,随着抗生素的广泛使用,并在强大肠杆菌的耐药性,为临床合理用药,我们确定了滑县境内的大肠杆菌菌株,大型养鸡场,并在此基础上对药物耐药性的监测。     

陕西仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定和耐药性测定

从陕西十县市24个大小猪场(户)腹泻仔猪病例采集186份病料中,分离并鉴定出68株致病性大肠杆菌,通过14种大肠杆菌O抗原单因子血清鉴定,证明有13种血清型(尚有1株未定型)存在,其中以O139,O101、O149,O141,O60为优势血清型,占定型菌株的71.6%。选用16种常用抗生素对32株地方代表菌株做耐药性试验:结果表明对丁胺卡那霉素、诺氟沙星、新霉素高敏,林可霉素、头孢唑啉和麦地霉素等中敏,氧氟沙星、先锋霉素和链霉素等药物产生耐药;同时从高、中敏区向中敏区和低敏区过渡的趋势明显。这一结果为该省做到有效防治提供了依据。     

广东省禽源大肠杆菌分离株的耐药性调查

[目的]了解广东省不同地区禽源大肠杆菌的耐药情况。[方法]采用纸片扩散法对不同养禽场分离的229株大肠杆菌进行28种抗菌药物的耐药性试验。[结果]229株大肠杆菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、阿莫西林和氨苄西林的耐药率较高,分别为89.1%、80.0%、76.9%和75.5%,其次是多西环素和链霉素(74.7%和68.6%),但阿米卡星耐药率最低(8.3%)。229株大肠杆菌存在多重耐药性,其中6株大肠杆菌可耐26种药物。[结论]广东省禽源大肠杆菌分离株耐药情况严重,存在多重耐药现象。养殖场应合理使用药物,加强细菌耐药性监测,研究结果为养殖场选用合适药物、控制细菌耐药性的产生和扩散提供了有效的理论依据。     

规模化养殖场大肠杆菌的分离鉴定与耐药性监测

从武汉郊区规模化养殖场采集腹泻仔猪的棉拭子和病死动物的泄殖腔分泌物或肝脏,分离鉴定出致病性大肠杆菌73株,分离率为100%.采用K-B法对分离菌株进行体外药物敏感试验.根据CLSI2006标准判定结果.结果显示,猪源性大肠杆菌仅仅对阿米卡星和大部分头孢类抗菌药物的耐药率较低,对多数抗菌药物均表现为较高的耐药率,并呈现出严重的多重耐药现象,主要表现为7重耐药、8重耐药、9重耐药和10重耐药;禽源性大肠杆菌对头孢类、氨基糖苷类和硝基呋喃类抗菌药物的耐药率<30%,其他的均＞75%,多重耐药主要表现为6重耐药,总体看来.其耐药性较猪源性大肠杆菌轻微.     

中药对大肠杆菌抑制作用及耐药性诱导作用的研究

本文研究了黄芩等10味中药及复方对大肠杆菌的抑制效果,并研究了在中药选择性压力下传代培养200代的大肠杆菌对中药及抗菌药物敏感性的变化。结果发现,黄芩对大肠杆菌抑制作用最强,其最低抑菌浓度(M IC)为31 mg/mL,黄芩分别与连翘、秦皮、蒲公英的组合以及秦皮与连翘的组合均有协同作用。传代菌对中药不易形成耐药性,耐药株经中药作用后对某些抗菌药物的敏感性有所提高,而标准菌株的敏感性基本不变。     

紫外线诱变拮抗木霉产生对百菌清抗药性菌株的研究

[目的]筛选出性状优良的抗药性木霉菌株,并研究其与8种常用化学药剂的交互抗性．[方法]采用紫外线诱变处理和含药（百菌清）培养基驯化相结合的方法,对拮抗木霉菌株T30进行改良,获得了6株在百菌清杀菌剂1100mg／L浓度水平下仍能较好生长的抗药性木霉菌株,并通过其敏感性、拮抗作用以及遗传稳定性和交互抗性等一系列测定,从中筛选出了性状优良的抗药性菌株T30B．3—3m。[结果]诱变的木霉菌株T30B－—3m与亲本木霉菌株T30相比较,其抗药性提高了279．81倍,生长速率和产孢量与亲本菌株相近,连续转接10代,其抗药性随传代仍然表现稳定;对供试5种病原真菌均具有很好的抑制作用,抑制率达86．58～94．90％;T30B－3—3m对速克灵、霜脲·烯啉、代森锰锌、甲基托布津以及尿素、磷酸二氢钾的抗药性较好,药剂对其抑制率只有0～10．4％,对福美双也具有一定的交互抗性,但对多菌灵却无交互抗性。[结论]为设施蔬菜病害的生物防治提供了优良菌株,同时为实现生物农药与化学农药的综合协同作用奠定了良好基础。     

大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究

使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a(+)的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。     

壳聚糖酶解液对抗药性大肠杆菌的抑制作用

采用微波法从根霉菌丝体中提取壳聚糖,经纤维素酶非特异性降解得到其寡糖溶液。采用其中初步抑菌效果较好的COS3-2、COS4-2、COS4-3、COS4-4分别对氨苄青霉素抗性大肠杆菌进行抑菌实验,结果表明:壳聚糖纤维素酶解液COS3-2、COS4-2、COS4-3、COS4-4对抗药性大肠杆菌均有较好的抑制作用,其中酶解液COS3-2的抑菌活性最强,当浓度为2.5%时抑菌圈直径达到18.6 mm,最低抑菌浓度(minimal inhibiting concentration,MIC)为0.05%;壳聚糖酶解液的抑菌作用随着酶解液浓度的增加而增强,并且抑菌作用需要一定的环境,在pH值5.5～6.0范围内,对氨苄青霉素抗性大肠杆菌有很好地抑制作用,pH值过高抑菌作用减弱。     

河南省几种主要禾谷类作物丝核菌的鉴定及交互侵染研究

通过细胞核快速染色鉴定及与日本生越明博士的标准丝核菌株配合测定，分离自河南省小麦，玉米，水稻，谷子和高染等作物纹枯病斑上的丝核菌株分属于双核丝核菌和多核丝核菌２大类，以多核丝核菌为主。其中小麦丝核菌株为双核丝核菌的ＡＧ－Ｂ（０）融合群，玉米和水稻丝核菌株均为多核丝核菌的ＡＧ－１－ＩＡ融合群，谷子和高梁丝核菌株分别为多核丝核菌的ＡＧ－１－ＩＣ融合群和ＡＧ－５融合群。大田人工接种试验结果表明，供试的５     

郑州市宠物源大肠杆菌生物被膜表型与耐药谱型分析

为分析郑州市宠物源大肠杆菌的生物被膜表型与耐药谱型,分别采用微量肉汤稀释法和改良结晶紫法对194株宠物源大肠杆菌进行耐药率和生物被膜形成能力检测。结果表明,弱生物被膜表型菌株比例最高,占63.4%;耐药谱多样性是造成生物被膜形成能力差异的主要原因,但耐药谱中抗菌药物种类对生物被膜表型能力的影响不明显。     

不同宿主大肠杆菌对15种抗生素抗药性差异研究

采用96孔板微量肉汤稀释法,测定SPF鸡、商品肉鸡、鸡场饲养员、医院病人等不同宿主粪样140株大肠杆菌对15种抗生素的抗药性,比较不同用药环境下大肠杆菌的抗药性差异。结果表明：SPF鸡分离菌株的抗药性最低,平均抗药性频率为46．08％,大部分菌株对8～9种抗生素存在低水平抗药性。医院病人大肠杆菌平均抗药性频率达到67．47％,多数菌株对12—13种抗生素产生抗药性。由于商品鸡场大量使用抗生素,鸡场饲养员和肉鸡分离株平均抗药性频率远高于SPF鸡,分别达80．00％和72．27％,并对12—13种抗生素产生抗药性,其中对磺胺二甲嘧啶、利福平的抗药性频率都在90％以上。建议测定区域使用抗药性频率低于50％的抗生素：头孢唑啉、头孢噻呋、硫酸黏菌素、阿米卡星。     

猪瘟病毒石门株E2基因4个抗原结构域的原核表达

【目的】对猪瘟病毒石门株E2基因进行原核表达，以期获得可溶性表达产物，为检测猪瘟抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】用PCR技术扩增了重组S21质粒载体上的猪瘟病毒石门株E2基因的4个主要抗原结构域ABCD，A1A2，B和C。分别将4个片段克隆于pMAL－p2X载体中，经PCR、双酶切和测序鉴定，E2基因的4个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确。将4个片段分别转化到表达菌TB1、BL21、BL21－CodonPlus(DE3)-RP和BL21(DE3)中，共得到16株重组表达菌，用IPTG进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析。【结果】E2基因的4个主要抗原结构域均可在这4种表达菌中表达，但以BL21－CodonPlus(DE3)-RP的表达效果最好，可表达出可溶性并且产量较高的目的蛋白。免疫印迹结果表明，表达的目的蛋白可以被猪瘟阳性血清和针对E2蛋白的单克隆抗体所识别。【结论】只表达目的基因的抗原结构域，可以缩短表达片段的长度，有利于获得可溶性目的蛋白，并且具有良好的血清学反应的特异性。     

张家口地区仔猪黄痢病原菌血清型检测及药敏试验

为了调查张家口地区仔猪黄痢病例大肠杆菌的耐药性及流行血清型,从发生仔猪黄痢的20个规模化猪场采集90份病料,进行致病性大肠杆菌的分离及生化鉴定。腹腔接种小白鼠以鉴定分离菌的毒力,采用玻板凝集试验和试管凝集试验鉴定分离菌O血清型,并使用16种抗菌药对50株致病性大肠杆菌进行药敏试验。结果表明,从90份病料中分离出86株大肠杆菌,其中致病性大肠杆菌79株。79株致病菌共有10种血清型,其中O8、O151、O149、O141为优势血清型,占能定型分离致病菌株的61.1%。药敏试验结果显示,头孢噻肟钠抑菌作用最强(94%),其次为诺氟沙星(90%)、丁胺卡那霉素(82%)、新霉素(80%)。50株大肠杆菌对16种抗菌药均有不同程度的耐药性,对链霉素完全耐药,其中39株为5耐以上的菌株,占供试菌株的78%。     

动物、环境及饲养员多重耐药大肠杆菌的PFGE分型研究

【目的】了解养殖场多重耐药大肠杆菌耐药性的传播机制，探讨人、动物与环境间耐药菌垂直克隆传播的可能性。【方法】采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对分离自养殖场动物、环境和饲养员的86株耐药谱相近多重耐药大肠杆菌进行DNA指纹图谱分型，比较菌株之间的亲缘关系。【结果】37株鸡场来源大肠杆菌可分为20种PFGE分型；49株猪场来源大肠杆菌可分为24种PFGE分型；同一动物、环境或饲养员采样点分离菌株PFGE指纹图谱相同者较多；同一养殖场不同动物个体、养殖场环境不同采样点、动物和环境以及饲养员和环境都存在PFGE指纹图谱完全相同菌株；鸡场和猪场都发现有属同一PFGE分型的来自动物、饲养员和环境的菌株；86株菌全部对环丙沙星、氨苄西林、链霉素、四环素、多西环素和复方新诺明耐药，相同PFGE分型的菌株其耐药谱型不一定相同。【结论】养殖场动物、环境及饲养员之间存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播。     

牛源大肠杆菌分离株菌体抗原及菌毛特性研究

对一株牛源大肠杆菌JS株的菌体抗原及菌毛特性进行了研究。大肠杆菌JS株在Minca培养基上37℃培养18～24h,能够同时良好地表达菌毛抗原K99和F41。采用保温法和裂解法进行了菌毛提纯,取得了较好的效果。应用玻片凝集试验﹑抗D-甘露糖微量血凝试验(MRHA)进行菌毛特异性和粘附性研究。结果表明,K99、F41两种菌毛抗原不存在交叉凝集反应,其血凝谱能凝集牛﹑鸡的红细胞。