黑白花公牛冻精受精力的检测—穿透仓鼠卵的试验

本试验用SPA法(Sperm Penetration Assay)即精子穿透分析法对8头黑白花公牛冻精的受精力进行检测,以预测各公牛精液受精力的水平。结果:每卵表面平均精子数为3.2～9.5个,每卵内精子数为1.6～3.4个,被穿透的卵子比例即穿透率为34.9～65.7％,具雄原核的卵子比例即原核卵率为16.0～32.4％。这些数值与各公牛冻精授精500多头母牛的效果作对照,8头公牛平均80(70～90)天的不返情率为56％(45.8～71.1％),不返情率与雄原核卵率,穿透率呈高度正相关,相关系数分别为 0.82和 0.92。 另一组试验结果表明:授精时间对穿透率特别是对雄原核形成有很大影响。授精2小时后观察,没有雄原核形成,只有附着于卵子表面的精子;授精4小时后,精子已通过卵黄膜进入卵内,并开始形成雄原核;授精6小时后形成发育良好的雄原核。 这些观察结果有助于利用这项技术在生产上对公牛精液的受精力进行客观评定,为选择后备公牛提供重要的生理指标,特别是对评定冷冻精液的品质具有一定的参考价值。并为精子顶体反应、受精机理、体外受精、遗传学和胚胎学等领域的研究提供新的手段。     

用台盼兰—姬姆萨染色检测家畜精子顶导反应的研究

本文探讨了用台盼兰—姬姆萨染色检测家畜精子顶体反应的可行性。用肝素或钙离子载体诱发精子顶体反应。根据染色结果将精子分为四类:a)核后帽部不着色或淡青色,顶体不着色或部分紫红色(有顶体反应活精子);b)核后帽部暗青色.顶体部不着色或部分暗红色(有顶体反应死精子);c)核后帽部不着色或淡青色,顶体部紫红色(无顶体反应活精子);d)核后帽部暗青色,顶体部暗紫红色(无顶体反应死精子)。有顶体反应活精子百分率与仓鼠卵穿透率呈强正相关。从而证明台盼兰—姬姆萨染色是检测家畜精子顶体反应的有效手段,并能预测获能处理后精子的受精能力。     

TST三重染色在评定公牛精子顶体反应上的应用

<正> 前言 顶体反应是精子受精过程的重要步骤,也是估测精子受精能力的重要指标。本文就是从这个角度出发,采用TST三重染色法染色黑白花奶牛不同公牛个体解冻后的精子,观察精子的顶体反应率,同时测定了精子的活力,顶体完整率和畸形率,以及精清中钙的含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性,从而来探讨TST三重染色法是否可作为评定精液品质的可靠方法。     

连续射精对公牛异常精子出现率的影响

使用电刺激采精器,按15分钟间隔连续六次采集19头公牛射出的精液,研究其异常精子的出现率。11头公牛(A组)的严重异常精子数<10％。另外8头公牛(B组)的严重异常精子数则>10％。连续六次射精的畸形精子平均值:A组为6.7,5.6,6.9,7.4,7.2和7.0％。B组为11.7,13.0,11.9,9.0,12.5和10.3％。连续射精对全部严重异常精子或任何其它畸形精子的数值均无显著影响。     

不同介质对公牛精液品质的影响

６头黑白花成年公牛，每头采集３次精液，分别利用精子穿透试验和姬姆萨染色法，评定精子在发情母牛子宫颈粘液、维生素Ｂ＿（１２）、稀释液和解冻液等四种介质中的泳动速度、顶体完整率、畸形率以及精子有效存活时间的变化。结果表明，精子泳动速度在不同介质中的差异极显著，在宫颈粘液中显著高于其他介质，而以在维生素Ｂ＿（１２）中最低；不同介质中精子顶体完整率的差异不明显；畸形率在维生素Ｂ＿（１２）中显著低于解冻液；精子有效存活时间在稀释液和解冻液中显著高于在维生素Ｂ＿（１２）中。不同公牛精子在四种介质中的反应亦有一定差异。     

公牛精子对自体血清的反应与母牛受胎效果

母牛授精效果不好,原因很多。其中一个原因是种公牛体内存在着不可预测的自体免疫现象。但要查出这种公牛是困难的,因为这种公牛的精子活力临床变化不明显。本文介绍用精子沉降法查明公牛血清中自体免疫体与公牛精子的关系和精子沉降反应与母牛授精效果的关系。为了试验,采取了116头公牛的正常血清,灭菌后用1%的Nacl溶液做2、4、8、16倍稀释(倍倍稀释),各取0.1毫升放在滴定板(凝集板)凹槽里,分别加0.1毫升稀释     

公牛精子在四种介质中的品质变化

６头荷斯坦成年公牛，每头采集３次精液，分别利用精子穿透试验和姬姆萨染色法，评定精子在发情母牛子宫颈粘液、ＶＢ１２、稀释液和解冻液等四种介质中的泳动速度、顶体完整车、畸形率以及精子有效存活时间的变化。结果表明，精子泳动速度在不同介质中的差异极显著，在宫颈粘液中显著高于其它介质，在ＶＢ１２中最低；不同介质中精子顶体完整率的差异不明显；畸形率在ＴＢ１２中显著低于解冻液；精子有效存活时间在稀释液和解冻液中显著高于ＶＢ１２中。不同公牛在四种介质中的反应亦有一定差异。     

精子动力学分析与其体内、体外受精能力的相关性

旨在通过对精子动力学参数的分析,预测其在体外受精和人工授精中的受精能力。本研究采用计算机辅助精子分析系统(CASA)对3头荷斯坦公牛的性控分离精子进行动力学检测;同时进行体外受精和人工授精试验,统计体外受精的受精率、卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数(TCN)、内细胞团细胞数/囊胚细胞数比例(ICM/TCN)和人工授精妊娠率。结果发现,精子的路径速度(102.82、91.55、80.67)、曲线速度(201.75、180.23、168.58)、侧摆幅度(9.33、8.31、7.42)在公牛A、B、C间呈显著差异(P0.05),并与其体外受精过程中的受精率、胚胎卵裂率呈显著正相关。公牛A精子的鞭打频率(20.36)、直线性(46.06)显著高于公牛B(18.05、42.00)、C(16.23、40.81),且与体外受精的囊胚率呈显著正相关(P0.05)。公牛A、B精子的活力(38.00、36.50)、直线速度(80.62、79.00)显著高于公牛C(29.00、68.20),该参数与ICM/TCN呈正相关(P0.05)。然而精子动力学的所有参数均与人工授精的妊娠率之间无相关性。综上表明,精子的动力学参数可以预测体外受精中公牛的受精能力,但对其人工授精结果的预测还需要进一步研究。     

不同种公牛精子分离效果的比较

本研究对使用经流式细胞仪分离的4头种公牛精液的分离速率、死精率以及分离后的雌性准确率进行了比较分析,结果表明,3号种公牛的精子分离速率显著高于1号和2号种公牛(P＜0.05);1号种公牛的死精率显著高于2号和3号种公牛(P＜0.05).但是3头种公牛精液分离后的雌性准确率没有显著差异.4号种公牛的死精率达到32％,所以没有分离.同时对3头种公牛精液分离及解冻后的活率进行了比较,结果表明,3头种公牛精液经流式细胞仪分离后鲜精活率差异不显著,冷冻后0h活率差异不显著,而在冷冻4h后的精子活率差异显著(p＜0.05).     

精子活率与精子完整率和质膜完整率的相关性分析

采用考马斯亮蓝（R250）染色法和低渗膨胀试验（HOST试验）检测精子顶体反应和质膜完整性,以检测和评价这2种方法在猪精液质量检测中的实际应用价值。结果表明,冷冻复苏后,精子活率为37.97%,精子平均速度为55.72μm/s,顶体完整率和质膜完整率分别为51.01%和39.95%。经相关性分析得出,猪精子顶体反应率和质膜完整性与精子活率相关系数为0.904 0和0.817 6,呈显著相关（P〈0.01）,而精子的平均游动速度与顶体反应率和质膜完整性相关系数为-0.056 2和-0.151 8,无明显相关性（P〉0.05）,精子活率与精子平均游动速度间也无明显相关性（P〉0.05）。     

诱发和检测牛精子顶体反应的一种简易方法

将冷冻保存的公牛精子解冻,冲洗,以高浓度悬浮于K-3培养液中。K-3溶液含有NaCl,CaCl_2和NaHCO_3。将此悬液预先孵育在39.5℃密闭玻璃管中,然后以台盼兰-姬姆萨(简称TG)染色,用田鼠试验以确定发生了顶体反应的精子。TG染色的涂片显示出四种类型不同着染的精子。发现仅在顶体后区未着色或淡兰色,以及顶体区未着色或部分浅红—深红着色的这两种精子的百分率与去透明带田鼠卵的穿透率之间有显著的正相关关系(r=0.732,P<0.05,n=12)。这样的精子被认为是发生了顶体反应的。公牛A与B,其精子样品预先分别在K-3培养液中孵育2小时和1～2小时,得到了很高的精子顶体反应的百分率(A 37％,B 43.8％～49.2％)和较高的卵子穿透率(A91.7％,B85.4％～97.7％)。这一结果表明公牛精子培养在只含NaCl_2、CaCl_2、NaHCO_3的培养液中,密封玻璃管中39.5℃孵育,即可发生顶体反应。TG方法可用于鉴定发生了顶体反应的精子。     

精子生育相关性抗原对奶牛妊娠率影响研究

为研究精子生育相关性抗原对奶牛妊娠率的影响,测试了16头种公牛精子的生育相关性抗原,进行人工授精,比较奶牛的妊娠情况.结果显示:测试的16头种公牛精子生育相关性抗原,其中13头呈阳性,3头阴性,阴性率为18.75%.在用FAA阳性精液进行人工授精的520头奶牛中,有433头奶牛怀孕,妊娠率为83.26%.而FAA阴性授精的80头奶牛中,只有52头奶牛怀孕,妊娠率为65.0%(P<0.01).因此,奶牛人工授精FAA阳性精子妊娠率比FAA阴性精子高18个百分点,大大提高了奶牛的妊娠率.     

饲料中添加Penergetic-T对种公牛精液品质的影响

试验旨在研究 Penergetic-T 对种公牛精液品质的影响,选择 120 头健康无疾病的西门塔尔种公牛随机分为试验组和对照组,每组 60头,每头牛为 1个重复。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加 0.25 g(/ d 头)Penergetic-T,共饲喂 90 d,检测射精量、精子密度、冻精产量及精子活力、精子畸形率。结果表明:饲料中添加 Penergetic-T 种公牛鲜精的射精量、精子密度、冻后产量、精子活力及畸形率均优于对照组,且差异显著。说明,饲料中添加 Penergetic-T 可显著提高种公牛的精液品质与冻精产量,给种公牛站带来更多的经济价值。     

夏季高温对种公牛精子畸形率影响的初步研究

奶牛育种是一项基础性、长期性的工作,但效益非常显著。根据美国农业部数据,育种在饲料营养、繁殖育种、疾病控制、饲养管理等主要技术因素中,对奶牛生产的贡献比例最大,达到40%。种公牛耐寒、怕热,最适宜生活的环境温度为11~18 ℃,外界气温的变化对种公牛的影响较大,特别是上海夏季高温、高湿严重,极易造成种公牛采食量下降、体温升高、精液品质和产量下降。本研究对2014年上海奶牛育种中心公牛站10 头荷斯坦种公牛精液精子畸形测定资料与上海地区气温变化情况进行分析,得出高温对种公牛冷冻精液精子畸形率影响较大,气温越高,精子畸形率越高的结论。春季和夏季公牛精子畸形率差异显著（P<0.01）,种公牛冷冻精子畸形率在2—4月最低,7—9月最差,因此采精最佳季节为10月至翌年6月。     

应用试情小公牛提高奶牛繁殖效率试验

为了提高奶牛产后发情检出率和繁殖效率,用散户自繁的8-12月龄小公牛作为试情小公牛与母牛同圈饲养,并于比邻的单产水平接近的人工观察发情的散户奶牛繁殖效率进行对比。结果表明：试情小公牛组和人工观察发情组奶牛85 d以内配妊率分别为81.13%（43/53）和70.27%（26/37）,差异不显著（P〉0.05）;120 d内配妊率分别为93.06%（67/72）和79.59（39/49）,差异显著（P〈0.05）;年度总受胎率分别为97.22%（70/72）和82.14%（46/56）,差异显著（P〈0.05）。说明应用8-12月龄尚未达到性成熟的试情小公牛,通过爬跨等多种直接刺激可提高奶牛发情检测效率和繁殖效率,缩短产犊间隔,增加经济效益。     

应用试情小公牛提高奶牛繁殖效率试验

为了提高奶牛产后发情检出率和繁殖效率,用散户自繁的8~12月龄小公牛作为试情小公牛与母牛同圈饲养,并于比邻的单产水平接近的人工观察发情的散户奶牛繁殖效率进行对比。结果表明:试情小公牛组和人工观察发情组奶牛85 d以内配妊率分别为81.13%(43/53)和70.27%(26/37),差异不显著(P0.05);120 d内配妊率分别为93.06%(67/72)和79.59(39/49),差异显著(P0.05);年度总受胎率分别为97.22%(70/72)和82.14%(46/56),差异显著(P0.05)。说明应用8~12月龄尚未达到性成熟的试情小公牛,通过爬跨等多种直接刺激可提高奶牛发情检测效率和繁殖效率,缩短产犊间隔,增加经济效益。     

酵母硒对种公牛精液品质影响的研究

试验选用12头荷斯坦成年种公牛为试验牛,并随机分为四组。试验前期饲喂基础日粮,试验期添加不同剂量的酵母硒;90d时,采集种公牛的精液,并对精液量及精液品质进行检测。试验结果表明:日粮中适量添加硒能显著提高种公牛的精子冻前活率和冻后活率,并降低精子畸形率(P0.05),而对精液量、精子密度和精子顶体完整率无显著影响。     

不同剂型的种公牛冷冻精液质量检测结果分析

分析不同剂型的种公牛冷冻精液质量检测结果。选择20头公牛作为研究对象,根据冷冻精液方式的不同把20头公牛精液随机均分为两组,一组为对照组选择10头公牛精液进行颗粒冷冻,另一组为观察组选择10头公牛精液进行细管冷冻。根据公牛冷冻精液的质量标准,对两组公牛精液质量指标进行对比分析,分析两组公牛精液冷冻后的活力和精子有效数、精子畸形率及精子存活时间等。观察组与对照组公牛精液按照不同剂型冷冻后,精液质量存在很大差异,观察组精液冷冻的方式明显优于对照组,两组对比差异明显,具有统计学意义(P0.05)。观察组选择细管冷冻的方式更适用于实际工作中,为细管冷冻精液实践工作中提供重要的参考依据。     

种公牛睾丸周径大小与精液品质相关性的研究

公牛的睾丸大小对其繁殖力有十分重要的影响。本试验以青海省家畜改良中心13头荷斯坦和20头西门塔尔种公牛24月龄、36月龄睾丸周径实际测定数据为基础,分析研究种公牛睾丸周径大小与精液品质的相关关系。统计结果表明,荷斯坦种公牛阴囊周径与精液密度的相关系数r=0.835(P0.01);与射精量的相关系数r=0.569(P0.05);与精子活率的相关系r=0.900(P0.01);而西门塔尔种公牛阴囊周径与精液密度的相关系数r=0.745(P0.01);与射精量的相关系数r=0.360(P0.05);与精子活率的相关系r=0.041(P0.05);荷斯坦与西门塔尔两个不同品种间睾丸周径大小有差异但不显著(P=0.647;P0.05)。研究表明种公牛睾丸周径越长且质地坚硬,弹性越好,精子的产量就越高,精液品质就越好;睾丸过小的公牛不但精子产量低,而且精液品质也差。     

应用孕马血清促性腺激素诱导青年母牛发情试验

对２０头黑白花青年母牛应用孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）处理诱发发情。结果：处理后１～９ｄ内出现发情的有１８头,发情率为９０％,未发情率为１０％;５头对照牛发情率为１０％,未发情率为９０％（Ｐ＜００１）。