甘蓝型油菜与萝卜属间杂种的获得及分子鉴定

通过蕾期重复授粉和子房培养克服甘蓝型油菜与萝卜属间杂交障碍，提高杂种获得率。从组合湘油15×萝卜、681A×萝卜和742×萝卜分别获得12、28和18粒种子，前两组合分别得到21和11株F1代植株,而从组合 742×萝卜未得到再生植株。F1植株形态有些相似于母本，有些则不同于双亲。SSR分析显示，由湘油15×萝卜所获得的21株F1植株中有10株是真杂种。     

新疆野生油菜与甘蓝型油菜属间杂种分子鉴定

采用蕾期剥蕾授粉的方法,成功获得了新疆野生油菜和甘蓝型油菜属间杂种.杂种F1植株之间形态表现一致,介于双亲之间,并且具有明显的杂种优势.从F1群体中随机选取9株进行RAPD分析,扩增出的带型完全一致,并且是父母本随机扩增DNA片段的综合,说明这9株全为真杂种.试验结果表明,蕾期授粉可以克服新疆野生油菜和甘蓝型油菜属间杂交的不亲和性,利用RAPD分子标记技术可以快速有效地鉴定远缘杂种.     

白芥和甘蓝型油菜属间杂种后代菌核病抗性鉴定

通过对24个白芥和甘蓝型油菜属间杂种回交后代株系叶片菌核病菌丝接种鉴定,发现有11个株系与抗病品种“中双9号”抗性差异不显著,有4个株系抗性极显著并强于“中双9号”。茎杆接种也验证了这个结果。本试验结果表明,白芥和甘蓝型油菜属间杂种后代部分株系抗菌核病能力得到明显提高,对创造抗菌核病油菜新种质具有重要意义。     

芥菜型油菜与甘蓝型油菜种间杂种二代分离观察

从芥菜型油菜×甘蓝型油菜种间杂种Ｆ１自由授粉获得的Ｆ２的叶型、现蕾期、始花期、雄蕊发育、花粉活性和种子育性的分离观察结果表明,芥甘杂种Ｆ２超亲分离,产生大量变异类型,可根据花粉可染率和角果长度对Ｆ２植株种子育性进行间接选择。     

甘蓝型油菜属间体细胞杂种雄性不育材料的研究

甘蓝型油菜与诸葛菜，新疆野生油菜体细胞杂交产生甘蓝型油菜雄性不育材料NO CMS和NSa CMS。用隐性核不育材料的保持系，波里马CMS和陕2A CMS的保持系，波里马CMS和陕2A CMS的恢复系对NO CMS和NSa,CMS测交，结果表明，NO CMS和NSa CMS是恢保关系明显不同于陕2A CMS和波里马CMS的细胞质雄性不育材料，NO和NSa可育自交后代育性表现3（可育）：1（不育）分离，初步认为不育性由单隐性核基因控制。     

甘蓝型油菜自交不亲和系杂种纯度鉴定

利用共显性分子标记技术SSR、显性形态标记性状花叶及显性生化标记种子芥酸含量鉴定甘蓝型油菜自交不亲和系SI-1300与恢复系花叶恢杂种F1种子纯度.结果表明,3种方法鉴定结果基本一致,F1杂种种子纯度达到91%以上;不同SSR引物鉴定结果完全相同,一对SSR引物即可用于鉴定F1杂种纯度.SSR扩增产物具有很高的多态性和严格的保守性,不仅可以用于油菜杂种纯度鉴定,亦可以用于不同品种(组合)真实性鉴别.研究结果还表明,自然条件下放养蜜蜂用于自交不亲和系杂种制种是一种稳妥、切实可行的方法.     

甘蓝型油菜与芸芥属间杂种F1的获得及鉴定

常规有性杂交很难获得油菜与芸芥的属间杂种.通过对早期杂种胚胎的子房培养,获得128株小苗.经形态学鉴定,其中24株为真杂种.运用分子标记技术(RAPD)进行真假杂种检测,87%的单株带有芸芥特异的标记带.在培养中,适宜的生长素和细胞分裂素浓度以及恰当的子房离体前的发育时间能提高成胚数和成胚率.     

甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系BAC文库的构建

甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系包含了甘蓝型油菜全基因组和新疆野生油菜一对染色体,携带有恢复基因;以该二体异附加系为材料,以CopyControl&;#8482; pCC1BAC&;#8482; (Hind Ⅲ Cloning-Ready) Vector为载体,构建了其基因组的BAC文库（bacterial artificial chromosome library）。该文库含有69,120个克隆,平均插入片段达110kb,相当于甘蓝型油菜单倍体基因组大小的6.336倍。随机挑选3个大于100kb的克隆进行稳定性继代实验,经100代后插入的DNA片段仍然稳定存在。该材料BAC文库的建成,为我们下一步开展甘蓝型油菜基因组学研究及相关重要功能基因的克隆等提供了必要的技术平台。     

属间杂交获得的甘蓝型油菜雄性不育材料的研究

采用蕾期剥蕾授粉的方法,成功获得了新疆野生油菜野油2000-1和甘蓝型油菜Parol属间杂种。杂种F1育性极低,自由授粉条件下获得少量F2种子。在F2群体中成功选择到一株雄性不育株,用Parol做轮回亲本与不育株回交,BC1、BC2和BC3群体中可育株与不育株均呈1﹕1分离。用波里马细胞质雄性不育的保持系和恢复系、681A的保持系和恢复系、隐性核不育86A的保持系及其它33个甘蓝型油菜品系与BC2群体中的不育株测交,测交后代可育株与不育株呈5﹕3分离的组合有20个,呈1﹕1分离的组合有14个,呈3﹕1分离的组合有3个,有一个组合的后代完全可育,表明该雄性不育材料可能为显性核不育。     

新疆野生油菜、野芥和黑芥的遗传分化及系统演化研究

利用HPLC法对284份种子硫代葡萄糖甙组成分析表明，新疆野生油菜依据中特征硫代葡萄糖甙组成可划分为9类，91．2％的新疆野生油菜种子主要含羟基苄硫甙，8．8％的新疆野生油菜种子主要含丙烯基硫甙，与黑芥和芥菜型油菜特征硫代葡萄糖甙组成一致。RAPD分析将新疆野生油菜、野芥和黑芥划分为3簇，表明新疆野生油菜、野芥和黑芥之间存在明显的遗传距离，相对而言，新疆野生油菜与野芥间的遗传距离较近，与黑芥的遗传距离较远。新疆野生油菜可依据RAPD聚类分析结果划分为4簇，其中第1、2和4簇主要由来源于新疆塔城地区的新疆野生油菜组成，种子主要含丙烯基硫甙，第3簇为新疆巩留及其周边地区的新疆野生油菜,种子主要含羟基苄硫甙。研究为阐明我国芥菜型油菜起源进化途径提供了新的证据。     

新疆野生油菜BAC文库的构建

本实验以新疆野生油菜18号的基因组DNA为材料构建了其BAC(bacterial artificial chromosome)文库。该文库共有14592个克隆,插入片段在50-300kb之间,平均插入片段105kb,空载率低于5%,覆盖了新疆野生油菜基因组约4.0倍。新疆野生油菜基因组BAC文库的构建,为进一步研究其基因组结构及功能基因的利用等奠定了基础。     

甘蓝型油菜与诸葛菜属间杂交F12群体的品质及遗传分析

以甘蓝型油菜（AACC,2n=38）品种Oro与诸葛菜（OO,2n=24）属间杂交F4世代中出现的五倍体单株（AACCO,2n=50）为起始材料连续自交选育、鉴定,直至获得F12群体。各F12株系间表现一定的形态差异, 但株系内植株形态特征一致。细胞学观察表明85.3%的F12单株具有与甘蓝型油菜相同的染色体数目,花粉母细胞(PMCs) 减数分裂中正常配对和分离;其余植株的染色体数目分别为37、39和40;红紫色植株在减数分裂中有落后染色体,四分体时期会出现微核。基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization,GISH)分析未检测出整条的诸葛菜染色体;但AFLP分析表明存在渗入的诸葛菜DNA片段。F12植株的脂肪酸组成及硫苷含量表现较大的变异, 有的植株油酸含量高于Oro而硫苷降低。     

甘蓝型油菜与野芥属间体细胞融合杂种后代种皮纹饰亚微结构研究

通过扫描电镜观察,研究了甘蓝型油菜与野芥属间体细胞融合杂种后代与亲本甘蓝型油菜和新疆野生油菜（野芥）的种皮纹饰亚微结构特征,结果表明,甘蓝型油菜（Brassica napus L.）、白芥（Sinapis alba）和野芥（Sinapis arvensis）的种皮纹饰具有种的特异性,同一物种内的不同品种具有相同的种皮纹饰亚微结构特征,如甘蓝型油菜黑籽品种中油821与黄籽品系YEP011具有十分相似的网-穴状结构;2份新疆野芥与2份欧洲来源的野芥都具有相同的由向心条纹组成的近六边“回”字型网-穴状结构, 表明新疆野芥与欧洲野芥同属一个物种。甘蓝型油菜与野芥属间体细胞融合杂种7007-4具有与亲本之一甘蓝型油菜中油821相同的网-穴状结构;同属白芥属的野芥（Sinapis arvensis）与白芥（Sinapis alba）的种皮纹饰存在很大差异,说明种皮纹饰不具有属的特异性。 -----------------------------------     

播娘蒿与甘蓝型油菜的原生质体融合与植株再生

以播娘蒿叶片和甘蓝型油菜子叶为材料提取原生质体.采用PEG-高pH、高钙附加DMSO融合方法,液体浅层静置培养,研究影响播娘蒿与甘蓝型油菜原生质体融合的因素,获得了再生植株.结果表明:4%纤维素酶 0.5%离析酶 5mmol/L MES酶解10b可获得高产率播娘蒿原生质体,1%纤维素酶 0.2%离析酶 3mmol/LMES酶解14h可获得高产率油菜原生质体;30%PEG 0.3mol/L葡萄糖 50mmoL/L CaCl2·2H2O 15%DMSO可获得10%的融合率;改良B5培养基的原生质体培养效果最好;最佳分化培养基为MS 4.0mg/L 6-BA 0.3mg/LNAA 5.0mg/L AgNO3;最佳生根培养基为MS 0.1mg/LIBA 0.1mg/L NAA.     

培养条件对甘蓝型黄籽油菜下胚轴的再生影响

以甘蓝型黄籽油菜GH01的下胚轴为材料，研究影响外植体芽再生的因素。试验结果表明，苗龄、预培养基的激素浓度和预培养时间、分化培养基等对芽再生频率均有较大影响。8d苗龄的下胚轴置MS 1．5mg／L2，4-D 0．1mg／L6-BA培养基预培养4d后，转分化培养基MS 4．0mg／L6-BA 0．05mg／LNAA 5．0mg／LAgNO3 0．6mg,／LGA3培养，可获得较高的芽再生频率。添加5mg／LAgNO3处理可防止外植体褐化并有利于芽分化；0．6mg／L GA3处理可促进胚状体形成，提高芽再生频率。GH01最高芽再生频率为40．50％。