农药助剂对短短小芽孢杆菌TW-2菌体及芽孢的影响

采用平皿计数法和抑菌圈法研究了24种农药助剂对稻瘟病生防菌短短小芽孢杆菌TW-2菌株菌体和芽孢存活的影响.结果表明,供试的24种农药助剂中有11种农药助剂(D425、D450、D500、EFW、500、505、507、AEO-5、AEO0、NP-10、OP-10)在供试浓度范围内(12.5～100g· L-1)可以完全杀灭短短小芽孢杆菌TW-2菌株的菌体和芽孢,其它助剂随着浓度的提高,对菌体和芽孢存活的抑制作用也越大.在24种农药助剂中,U-3A和By-110对菌体和芽孢的存活影响最小,可用于短短小芽孢杆菌TW-2菌株固体制剂和液体制剂加工中的湿润展布剂.     

短短小芽孢杆菌TW-2菌株对水稻穗颈瘟的防治效果

[目的]探讨生物农药的防治原理,寻找防治稻瘟病的新方法。[方法]采用系列稀释平板法测定生防菌TW-2对水稻稻瘟病菌的菌丝生长的抑菌活力,计算生防菌的抑菌活力回归方程式、EC50值和相对毒力。[结果]生防菌TW-2对田间水稻穗期的穗颈瘟的防效在80%以上。[结论]生防菌TW-2对水稻稻瘟病菌具有强烈的抑制作用,对水稻稻瘟病具有较高的防治效果。     

2种harpin内源表达对短短芽孢杆菌HAB-5菌株抑制和促生能力的影响

采用化学方法分别将来自水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)、棉花角斑病菌(X.citri subsp.malvacearum)hrp基因簇中的hpa1_(Xoo)、hpa_(Xm)基因转化至生防菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevs)HAB-5菌株,测定2种harpin蛋白对短短芽孢杆菌抑菌和促生能力的影响,以期获得更高效的生防菌株。结果表明,获得转入hpa1_(Xoo)的突变体581个,转入hpa_(Xm)的突变体有650个;经PCR及PCR Southern Blot验证,确定hpa1_(Xoo)、hpa_(Xm)基因均成功转化至HAB-5菌株中;经SDS-PAGE电泳,在分子量大小约39、41 ku处可见明显条带,表明hpa1_(Xoo)、hpa_(Xm)基因分别编码的融合蛋白GST-harpin Xoo、GST-harpin Xm在突变体菌株中得到表达;与出发菌株HAB-5菌株相比,转化后的突变体在菌落形态、拮抗活性上均发生了改变,且突变体总蛋白可在烟草叶片上激发过敏性反应,而HAB-5菌株总蛋白不能激发过敏性反应;突变体菌株对番茄种子的促生作用显著提高,且转入hpa_(Xm)基因的菌株效果更佳,使胚芽、胚根的生长分别提高100.77%、69.14%。可见,harpin能够在短短芽孢杆菌HAB-5菌株中得到表达,且转化后的突变体表现出良好的促生效果。     

短短芽孢杆菌发酵液对铜绿微囊藻的抑制效应

[目的]微囊藻水华给湖泊生态系统及人类健康带来很大危害,本研究旨在探寻高效环保的微生物抑藻材料。[方法]通过流式细胞仪测定短短芽孢杆菌B15不同发酵时间及添加量下无菌发酵上清液的抑藻率,通过激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察处理后的藻细胞形态,并通过叶绿素荧光仪测定处理前、后藻细胞光合作用的变化。另外,检测了发酵上清液在不同温度、p H值和蛋白酶处理下的活性变化。[结果]0.3%、0.7%、1.0%和2.0%添加量的发酵液处理6 d后抑藻率分别为51.89%、79.89%、89.47%和86.94%。发酵液发酵48和72 h抑藻活性无明显差异,但略优于发酵24 h。发酵上清液处理6 d后,藻细胞Fv/Fm、ETRmax值均显著下降,表明其光合作用受到抑制。激光共聚焦显微镜观察发现:许多细胞停留在分裂末期,呈2细胞或4细胞状态。1.0%发酵上清液处理6 d后藻液中2细胞和4细胞所占比例分别达到62.23%和14.95%,表明藻细胞分裂增殖严重受阻。透射电镜观察结果显示:经处理后藻细胞严重受损,出现质壁分离、类囊体结构及细胞膜断裂的现象。发酵上清液超滤结果显示抑藻活性物质相对分子质量小于10×103。将抑藻物质在4、25和37℃处理6 h后,抑藻活性和对照相比无显著差异,说明该活性物质在低温下有较好的稳定性。另外,在p H值2~12的范围内,抑藻物质都保持很好的活性。抑藻物质对胰蛋白酶和蛋白酶K均不敏感。[结论]短短芽孢杆菌B15通过分泌小分子化合物高效而持久地抑制铜绿微囊藻的生长繁殖,降低其光合作用效率,并阻遏细胞的分裂。     

短短芽孢杆菌JK-2菌株抑菌物质特性的研究

研究短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis) JK-2菌株产生的抑菌物质特性,对其抑菌物质粗提液的稳定性进行测定,同时对其活性成分进行初步分离.稳定性试验结果表明JK-2产生的抑菌物质粗提物对蛋白酶不敏感,耐强酸强碱,紫外线和反复冻融对其活性均无显著影响.从JK-2发酵液中初步分离出分子量约为4.1 kDa的活性肽和具有抑制枯萎菌活性的胞外多糖.     

短短芽孢杆菌DFG对金黄色葡萄球菌的抑制效果

为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)DFG菌株的开发应用提供参考,采用不同化学物质处理方法结合琼脂打孔法研究不同培养基、接种量和发酵时间对其发酵液抑菌活性的影响,并在此基础上研究温度、蛋白酶、酸碱、紫外线照射和反复冻融等因素对其抑菌物质稳定性的影响。结果表明:NA培养基培养的DFG菌株其发酵液对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用最强,抑菌圈直径达2.4cm;发酵液经100℃处理30min,抑菌率仍达65%;对酸碱也具有较强的稳定性;经紫外线照射和反复冻融后性质稳定;对胃蛋白酶、胰蛋白酶及蛋白酶K不敏感,可用有机溶剂对短短芽孢杆菌DFG菌株抑菌物质进行部分萃取。     

pH条件对短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX次生代谢物产生的影响

应用GC-MS对10种不同初始pH条件下发酵的FJAT-0809-GLX发酵液的丙酮萃取液进行初步成分鉴定,从这10种发酵液中得到匹配率≥90%成分11种,各发酵液中的成分存在明显差异,其中共有成分1种,为六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮。在匹配率≥90%成分中,功能性成分按其功能可分为2类,一类为挥发性或芳香类物质,与该发酵液具有的特殊香气有关,包括5-甲基呋喃醛、2-甲基-3-羟基-4-吡喃酮、苯乙醛、棕榈酸、顺式十八碳-9-烯酸、甲基环戊烯醇酮;另一类为防腐或抑菌类成分,包括2-甲基-3-羟基-4-吡喃酮、2-呋喃甲醇、六氢-吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮和5-羟甲基糠醛。初始pH 6～12的发酵液对大肠杆菌K88均有抑制效果,其中初始pH为7的抑菌效果最佳,抑菌圈直径达到20.33mm。不同的初始pH影响着发酵终点pH,进而影响着短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX次生代谢物的产生。     

短短芽孢杆菌TetR基因家族的鉴定及表达模式分析

采用生物信息学方法从生防菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)X23全基因组水平鉴定出13个TetR家族基因,将其命名为BbTetR1、…、BbTetR13,对其基本性质、基因结构和高级结构进行分析。结果表明：短短芽孢杆菌TetR家族成员在进化上具有保守性,基因序列长度为477~681 bp,编码的蛋白由168~226 个氨基酸组成,相对分子质量为1.9×104~2.57×104,等电点为4.84~7.77;其基因家族成员可划分为3个亚族,亚族Ⅰ包含5个成员,亚族Ⅱ、亚族Ⅲ各包含4个成员;所有BbTetR蛋白均含有大量α–螺旋,且这些蛋白的空间结构呈现多样化;转录组分析结果表明,不同的BbTetR在短短芽孢杆菌不同生长时期的表达模式和表达量差异显著,BbTetR1、BbTetR5、BbTetR8和BbTetR10在短短芽孢杆菌不同生长阶段均有较高表达,推测其可能发挥更重要的调控作用。     

冷冻干燥保护剂和再水化剂对短短小芽孢杆菌TW的存活率与贮藏稳定性的影响

利用冷冻干燥方法,阐明了冷冻干燥保护剂和再水化剂对生防短短小芽孢杆菌菌株TW (Brevibacillus brevis strain TW) 的存活率和贮藏稳定性的影响.研究结果表明,使TW菌株冷冻干燥后存活率最大(达80%)的保护剂是二糖类物质.当以1%海藻糖作冷冻干燥保护剂时,使TW菌株复苏率最高(>80%)的再水化剂是0.05 mol/L磷酸缓冲液和1%蛋白胨;当以1%蔗糖作保护剂时,使TW菌株复苏率最高(>80%)的再水化剂是磷酸缓冲液(0.05 mol/L)、蛋白胨 (10%、5%、1%)、蔗糖(5%、1%)和脱脂奶粉(5%、10%).贮藏试验结果表明,当添加1%蔗糖作为保护剂的冷冻干燥菌粉,分别在起伏常温(6～33 ℃)和恒定低温(4 ℃)下贮藏18个月后,用0.05 mol/L磷酸缓冲液作再水化剂,TW存活率分别可达70%和90%以上.该方法通过改进后可应用于工业化生产.     

短短芽孢杆菌JK-2菌株抑茵活性物质产生条件的优化

短短芽孢杆菌JK-2菌株对多种植物病原真菌和病原细菌具有明显的抑制作用。以JK．2发酵液对番茄枯萎病菌的抑制作用为活性指标,对其培养基成分和培养条件进行了优化。由正交试验和单因素试验得出的最佳培养基配方为淀粉1,0％、牛肉浸膏0．5％、蛋白胨0．3％、蔗糖1．0％、酵母粉0．5％和CaCl2 0．5％,初始pH值7．0。在30℃、170r／min振荡培养条件下,最佳发酵时间为48h,装液量100mL／瓶,接种量1％。     

短短芽孢杆菌A57对棉花主要病原真菌的拮抗机理

短短芽孢杆菌A57(Brevibacillus brevs,A57)是从棉花根际土壤分离出来的桔抗细菌。该细菌对棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)、枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum)和黄萎病菌(Verticilli-um dahliae)具有较强拮抗作用,在PDA平板上对峙培养,平均抑制率分别是33.5%、39.5%、29.5%。该菌菌液稀释10倍对立枯病、枯萎病、黄萎病的防效分别是49.8%、56.8%、48.9%。还利用A57不同稀释度的无细胞滤液培养棉花无菌胚,发现无细胞滤液对棉花幼苗具有一定的促生作用,其中稀释500倍的促生作用最大,其胚轴20.2 mm,对照16.4 mm,较对照增加24.4%,从其无菌胚长成的幼苗提取浸提液,发现浸提液对棉花枯萎病菌仍有一定的拮抗作用,抑制率为5.7%。通过显微镜观察,发现A57菌株的主要拮抗机理是通过产生拮抗物质造成病原真菌菌丝体断裂、扭曲、畸形,抑制分生孢子的萌发,造成孢子畸形。用(NH4)2SO4沉淀法提取A57菌株的粗蛋白,对供试的病原菌仍具有较高的拮抗活性,70%浓度时其拮抗活性最大,A57粗提蛋白对棉花枯萎病菌的最大抑制率为23.7%,同时该菌经(NH4)2SO4沉淀后获得的粗提蛋白的上清液对病原指示菌仍具有一定的拮抗活性。以枯萎病菌为指示菌,研究了该菌株表现最佳拮抗活性时的菌液发酵条件,结果表明,A57适宜培养基为LB培养基,pH8,好气条件下抑菌活性最好。     

生物有机肥对盆栽烟草根际青枯病原菌和短短芽孢杆菌数量的影响

采用荧光定量PCR方法,研究了生物有机肥对盆栽烟草根际青枯病原菌和拮抗菌动态变化的影响。结果表明:施用生物有机肥显著降低了抗病品种‘K326’和感病品种‘南江三号’烟草青枯病的发病率,促进了烟草生长,生物量增加14%以上;只接种病原菌处理(RS)土壤中青枯病原菌的fliC基因拷贝数显著高于先接种病原菌再施用生物有机肥处理(RS+BIO)和先施用生物有机肥后接种病原菌处理(BIO+RS),且这种效应与生育期和品种无关;旺盛生长期前,施用生物有机肥处理土壤中短短芽孢杆菌16S rDNA基因拷贝数也显著高于RS处理。上述结果表明,施用生物有机肥防治烟草青枯病主要是通过抑制土壤青枯菌的增长和促进植物生长来实现的。     

5种杀菌剂对12种真菌生长的影响

[目的]筛选出既能抑制霉菌又不影响食用菌生长的杀菌剂及其适宜的使用浓度。[方法]通过食用菌菌丝和霉菌的培养及抑菌试验,研究了5种杀菌剂对12种真菌生长的影响。[结果]克霉灵250倍液有效抑制青霉,对灵芝和黑木耳（29）没有抑制作用。克霉净400倍液有效抑制青霉,对灵芝没有抑制作用。多菌灵600倍液有效抑制曲霉和青霉,对杏鲍菇和黑木耳（29）没有抑制作用。菇宝对曲霉的有效浓度分别是1 500和2 500倍液,菇宝2 500倍液对白金针、香菇、黑木耳（29）、杏鲍菇、桑黄和冬虫夏草没有抑制作用。50%氯溴异氰尿酸对3种霉菌的有效浓度分别是800和1 200倍液,50%氯溴异氰尿酸1 200倍液对白灵菇、黑木耳（29）、灵芝和杏鲍菇没有抑制作用。[结论]该研究为杀菌剂在菇类种植中的应用提供了依据。     

几种芽孢杆菌共培养对产蛋白酶的影响

[目的]为了研究芽孢杆菌的共发酵对蛋白酶产量的影响。[方法]对4株具有产蛋白酶能力的芽孢杆菌,通过菌株两两配伍发酵或三者配伍共发酵培养,分别检测单一菌株发酵产物和不同菌株共发酵产物的蛋白酶活性。[结果]枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌均具有一定的产蛋白酶能力,枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌共发酵培养48 h后蛋白酶活力有显著提高。[结论]菌株之间的科学配伍在共发酵中可以显著提高蛋白酶的活性。     

植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的影响

【目的】探讨植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体对猪肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IPEC-J2细胞)的黏附特性,以及对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的抑制作用.【方法】分别用植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体处理IPEC-J2细胞,结合显微镜观察和黏附计数方法评估其黏附特性;评价其在竞争、排阻和置换3种方式下对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的影响.【结果】植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体均能黏附于IPEC-J2细胞,其中活菌体对IPEC-J2细胞的黏附指数较热灭活菌体高,但差异不显著(P>0.05);活菌体对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的竞争抑制和置换抑制率显著高于热灭活菌体(P<0.05);两种生物学状态的植物乳杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的排阻抑制率差异不显著(P>0.05).【结论】植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体均能黏附于IPEC-J2细胞,并可通过竞争、排阻和置换方式抑制大肠杆菌对IPEC-J2细胞的黏附,且其活菌体对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的竞争和置换抑制效果优于热灭活菌体.     

安徽省玉米小斑病菌对5种杀菌剂的敏感性分析

为了进一步研究清楚玉米小班病菌对杀菌剂的敏感性,从安徽省玉米主产区的分离出6个玉米典型小班病菌,然后采用生长速率法测定上述6个病株对5杀菌剂(百菌清、烯唑醇、腐霉利、甲基硫菌灵和多菌灵)的敏感性。实验结果显示,玉米小班病菌对前三种杀菌剂敏感性最强,并且不同菌株之间对同一种杀菌剂的敏感性差异显著。而所有菌株对多菌灵不敏感。在选择药剂防治时应该选择百菌清、烯唑醇、腐霉利进行防治,效果较好。     

5种杀菌剂对保山小粒咖啡褐斑病的田间防治效果

为有效防控咖啡褐斑病,试验选用10%苯醚甲环唑WG,19%啶氧·丙环唑SC,24%腈苯唑SC,64%恶霜·锰锌WP,70%甲基硫菌灵WP 5种杀菌剂进行田间药效试验。结果表明,5种杀菌剂对咖啡褐斑病都有一定防效,以24%腈苯唑SC 300 mL/hm2、19%啶氧·丙环唑SC 1 200 mL/hm2防效较为突出,在第3次药后7 d,成株防效分别可达86.37%、85.60%;幼苗防效分别可达90.97%、89.46%。可在实际生产中轮换使用,尤其在幼苗期初感病阶段尽早防控。     

饲料添加凝结芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌对生长猪的生长性能影响

选择初始体重30.2±0.3 kg试验猪28头随机分为4个处理组:对照组添加杆菌肽锌40 g·t~(-1);试验组1添加饲用凝结芽孢杆菌2×10~6cfu·g~(-1);试验组2添加饲用枯草芽孢杆菌2×10~6cfu·g~(-1);试验组3同时添加2×10~6cfu·g~(-1)凝结芽孢杆菌与2×10~6cfu·g~(-1)枯草芽孢杆菌,用于研究饲料添加凝结芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌对30～60 kg阶段生长猪的生长性能影响。试验结果表明,平均日增重、饲料增重比指标,试验组1显著优于对照组(P0.05),且对照组、试验组2和试验组3之间差异不显著(P0.05)。饲料干物质与总能表观消化率,试验组1最高,其他3个处理组之间差异不显著(P0.05)。试验结果表明,与使用杆菌肽锌相比,单一添加饲用凝结芽孢杆菌2×10~6cfu·g~(-1)的生长猪生长性能最佳;然而,单一添加同样剂量的枯草芽孢杆菌、或组合添加枯草芽孢杆菌与凝结芽孢杆菌,没有获得生长性能的进一步改善。     

三种芽孢杆菌菌剂对烤烟育苗效果的影响

为深入了解微生物菌剂在烟草育苗期的作用,探究其对烟草幼苗根系生长发育和烤后烟叶品质的影响,在烟草育苗时期,向漂浮育苗营养液中分别添加3种微生物菌剂：侧孢芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,研究微生物菌剂对烟草幼苗农艺性状、根系活力、抗氧化酶相关指标以及烤后烟叶化学成分的影响。结果表明,使用微生物菌剂对烤烟农艺性状、根系活力、抗氧化酶相关指标和烤后烟叶化学成分均有影响。随着烟苗的生长,3种微生物菌剂处理中,添加侧孢芽孢杆菌较对照显著提高了烟苗的根鲜重、根长度、根表面积、根体积及SOD、POD 和CAT活性,显著增强了根系活力,增加了可溶性蛋白含量,降低了MDA含量,烤后烟叶化学成分更加协调。因此,在实际生产中,推荐在烟草漂浮育苗营养液中添加侧胞芽孢杆菌促进烟苗根系发育,培育壮苗,提升烟叶品质。     

5种杀菌剂对灵芝菌丝及绿色木霉生长的影响

研究了5种杀菌剂对灵芝菌丝及绿色木霉生长的影响。结果表明，不同种类杀菌剂和同一杀菌剂不同使用浓度对菌丝生长的影响存在着显著差异。其中可杀得在使用质量浓度为0.538-0.359g.L^-1时，既能抑制绿色木霉的生长，又对灵芝菌丝的生长发育无不良影响。可望在灵芝栽培中应用，表4参9。