玉米基因枪遗传转化体系的研究

以玉米自交系81162的胚性愈伤组织为受体材料,通过基因枪轰击法将nptII基因和afp基因转入玉米细胞,获得了抗性愈伤组织和再生植株。确定了筛选剂Geneticin的筛选浓度和方法,愈伤组织生长阶段和分化阶段Geneticin的有效浓度分别为60mg/L和30mg/L。对2个轰击参数氦气压力与轰击距离进行了组合试验,结果表明1100psi的氦气压力和8cm的轰击距离为最佳组合。PCR检测证明,目的基因已整合到玉米基因组中。     

用基因枪转化花粉获得转基因谷子和玉米

以国产基因枪JQ-700分别将GUS（β-葡糖醛酸苷酶）基因射入谷子和玉米的花粉,经人工授粉获得种子。在加卡那霉素（Kan）的培养液中筛选获得Kan抗性植株。对抗性植株进行GUS组织化学和Southern杂交检测,结果表明有外源基因的整合与表达。转基因谷子和玉米的频率分别为0.18%和0.05%～0.21%。     

基因枪介导的玉米NPR1基因的遗传转化

[目的]探索玉米基因枪转化的条件。[方法]以玉米自交系7239的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,研究了轰击距离、气体压力、真空度和轰击次数对转化率的影响。[结果]转化时以金粉用量100μg/枪、发射点与靶细胞距离9 cm、气体压力1 350 psi、真空度25In.Hg、轰击次数2次的组合最佳。经潮霉素(Hygromycin)筛选,获得了再生植株,PCR分析及Southern杂交结果表明NPR1基因已整合到玉米基因组中,平均转化率为1.76%。[结论]该研究为玉米优良抗病品种的培育奠定了基础。     

玉米基因枪转化Bt基因的研究

以玉米自交系A188为试材,将含有Bar基因和Bt基因的质粒pBW3导入玉米幼胚内,获得了转基因抗性苗。抗性植株点杂交及Southern杂交结果显示,该基因已整合到抗性玉米植株体内,外源基因在玉米基因组内有4个拷贝。     

玉米自交系幼胚培养与基因枪转化研究

玉米自交系幼胚在添加 1～ 2mg/L 2 ,4-D的N6培养基上能够诱导形成不同类型的胚性愈伤组织。愈伤组织的诱导率与基因型和 2 ,4-D浓度有关 ,6个自交系的诱导率在 5 2 %～ 89%。将淡黄色颗粒状结构致密型愈伤组织在N6诱导培养基上继代培养 2 0个月 ,仍具有较强的分化能力。在附加 2mg/L 6 -BA和0 .2mg/LNAA的N6分化培养基上 ,有 2 7%～ 41%的愈伤组织分化成苗。通过基因枪轰击成功地将 pbarGUS基因转入玉米细胞 ,获得了大量的转化胚性愈伤组织。用 0 .4mol/L的甘露醇高渗处理幼胚 ,能显著提高pbarGUS基因在细胞中的表达 ,高渗处理转化率较对照提高了 3倍     

水稻基因枪转化的研究

自 198 7年以来 ,基因枪转化被广泛应用于水稻转化 ,转化系统得到了优化 ,在水稻抗病虫、抗逆、品质改良方面取得了长足的进展     

玉米优良自交系转基因受体系统建立及转化后的筛选与再生

通过对培养基和培养条件的筛选和改进 ,提高了诱导玉米优良自交系幼胚产生胚性愈伤组织 ,建立转基因受体系统的效率。通过比较试验 ,确定了潮霉素筛选的浓度和方法。PCR检测证明 ,目的基因已整合到玉米基因组中。     

水稻基因枪转化过程中选择标记基因的研究

标记基因的利用是筛选和鉴定基因转化的细胞、组织和转基因植株的有效方法。针对目前植物遗传转化中常用的4种抗性标记基因：卡那霉素抗性基因（nptⅡ）、潮霉素抗性基因（hpt）、草丁膦（Glufosinate）抗性基因（bar）和草甘膦（Glyfosinate）抗性基因（epsps）对水稻遗传转化过程所起的选择作用的差异作了较系统的比较，得到适合水稻遗传转化的合适选择标记基因。     

基因枪介导的玉米NPR1基因的遗传转化(英文)

[目的]探索出玉米基因枪转化的条件。[方法]以玉米自交系7239的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,研究了轰击距离、气体压力、真空度和轰击次数对转化率的影响。[结果]转化时以金粉用量100μg/枪、发射点与靶细胞距离9cm、气体压力1350psi、真空度25In·Hg、轰击次数2次的组合最佳。经潮霉素(Hygromycin)筛选,获得了再生植株,PCR分析及Southern杂交结果表明NPR1基因已整合到玉米基因组中,平均转化率为1.76%。[结论]该研究为玉米优良抗病品种的培育奠定了基础。     

影响大豆基因枪转化的几个参数

利用基因枪转化大豆愈伤组织,研究了基因枪不同参数对转化效率的影响。试验表明,ＣａＣｌ２浓度、拟气压力、受体状态对转化频率有重要影响。在基因枪轰击前２４ｈ,用５Ｇｙ辐照处理愈伤组织转化效率提高明显。获得了大量经ＧＵＳ染色为蓝色的抗生愈伤组织。     

Transformation of TrxS Gene into Barley by Particle Bombardment

The production of malting barley in China can＇t meet the demand of beer industries because of poor quality and it becomes a bottleneck problem in beer manufacture industry. In this paper, TrxS gene cloned from Phalaris coerulescens was transferred into barley cultivar Yupi 1 （YP1） via biolistic bombardment. 1206 immature embryos were bombarded and seven transgenic plants carrying TrxS gene were confirmed by PCR and PCR-Southern blotting analysis. TrxS gene was expressed in transgenic plants by RT-PCR analysis. The activity of Trxh and α-amylase of transgenic line were higher than that of non-transgenic line, which is helpful to improve malting quality of barley.     

基因枪法获得Phs-r转基因小麦植株的研究

实验以普通小麦豫麦18-64品种为供试材料,采用基因枪法对报告基因(Bar基因)和目的基因(PHS-r基因)两个重组质粒进行了共转化,获得了再生植株,并对转化植株进行了检测。结果表明:以预培养15d的幼胚愈伤组织作为受体材料其转化频率明显高于当天剥取和预培养3～4d的幼胚;在基因枪轰击前6h和轰击后18h,用0.5moL/L的甘露醇进行渗透处理,其转化频率会有明显的提高;实验通过基因枪转化与再生培养,共获得了12株再生植株,PPT检测且均表现出抗性,其中6株经PCR检测呈阳性,表明PHS-r基因已整合到小麦基因组中并正常表达。     

用基因枪法将防御素基因转入玉米并再生植株初报

用玉米７５、７７、７×１的愈伤组织为受体，通过基因枪轰击法将防御素基因转入玉米细胞，然后用卡那霉素筛选及分化培养，现已获得一再生植株。     

基于壳聚糖纳米颗粒的基因枪法转化洋葱细胞研究

以交联法制备壳聚糖纳米颗粒,用透射电子显微镜和Zeta电位仪对壳聚糖纳米颗粒进行表征,发现颗粒呈球形,粒径约为50rim,微球表面光滑、球形团整、颗粒比较均匀、分散性好,电位约为11．1mv;琼脂糖凝胶电泳结果显示,壳聚糖纳米颗粒能有效地结合质粒DNA,并能保护所结合的DNA防止DNaseⅠ的酶切;将含GFP基因的壳聚糖纳米颗粒复合物使用基因枪转化洋葱表皮细胞,在倒置荧光显微镜下观察,发现细胞表达了绿色荧光蛋白,表达效率为8％．     

利用gus基因瞬时表达探讨菊花叶盘基因枪转化参数

为了将基因枪转化方法应用于菊花的遗传改良和品种选育,以gus基因为报告基因,利用基因枪方法将其转入菊花外植体内,通过检测gus基因在菊花叶盘中的瞬时表达情况,分析了轰击距离、氦气压力、金粉用量、质粒DNA浓度、轰击后培养时间、轰击次数等参数对gus瞬时表达的影响。结果表明,以幼嫩叶片为受体材料,在射程为6 cm、氦气压力为7.584×106Pa,每枪金粉用量为400μg,质粒DNA用量为3μg,轰击2次的条件下,2 d后可检测gus基因的最佳表达活性和最高瞬时表达率。