汉麻内生菌的分离及其抑菌活性研究

本研究以汉麻作为材料,对其内生菌进行了系统分离,并对汉麻内生细菌对病原菌的抑菌活性进行了测定。结果表明,从汉麻中分离得到64株内生菌,汉麻叶中的内生菌资源较丰富;汉麻内生细菌中有抑菌活性的菌株比例较高且抑菌谱较广,对于供试细菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均表现出一定的抑制作用。     

连翘内生菌的分离及对植物病原菌的抑菌活性测定

采用组织块分离法,从药用植物连翘的报、茎、叶中分离出内生菌136株,其中真菌71株,细菌42株,放线菌23株;以烟草赤星菌,苹果干腐病,棉立枯病菌,茄腐皮病镰孢霉,革燕麦镰孢霉5种植物病原菌作为靶标菌,测定了连翘内生菌的抗菌活性.结果表明连翘中有比较丰富的具有抗菌活性的内生菌,并初步筛选出了9株抗菌活性高的内生真菌、7株内生细菌和4株内生放线菌.     

红肉蜜柚内生菌的分离及抑菌活性分析

选取牛肉膏蛋白胨、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)和高氏1号3种培养基,利用组织块法对红肉蜜柚(Citrus grandis)果实的内生菌进行分离纯化,得到9株菌株,经生物学性状分析,9株菌株均为放线菌,分属于诺卡氏菌属(Norcardia)和链霉菌属(Streptomyces)。采用平皿对峙法测定供试菌株的拮抗活性,有6株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的66.7%,其中1株对大肠杆菌(Escherichia coli)、4株对金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、3株对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有明显的抑菌效果;在3种柑橘病原菌的抑菌试验中,有7株菌株表现出不同程度的拮抗作用,占全部分离菌株的77.8%,其中7株对指状青霉(Penicillium digitatum Sacc.)、3株对意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)、3株对柑橘链格孢(Alternaria citri Ellis et.Pierce)的抑菌率超过75%。菌株P1、R2对3种柑橘病原菌均有很高的抑菌活性。     

月腺大戟内生菌分离纯化及抑菌活性筛选

从月腺大戟的根、茎、叶中分离出内生菌41株,细菌18株、真菌23株。7株供试菌用滤纸片法分别对内生菌发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：月腺大戟内生菌对7种供试菌有一定的抑菌活性,内生真菌与内生细菌的抑菌活性存在差异,其中YJX1、YJX6和YJZ15对供试菌具有普遍抑菌作用。     

汉麻内生菌的研究进展

汉麻植物内生菌中广泛分布着抗菌活性菌株,可以保护宿主植物免受其它微生物的侵害。目前已知的抗生素远不能满足需求,汉麻特有的大麻酚类物质是其抗菌性能的主要来源,且大麻酚类物质水溶性较差,所以织物的抗菌性比较持久。人们对其日益关注,从中找寻活性成分渐渐成为研究的热点。     

山苍子内生细菌的分离及抑菌活性研究

[目的]探讨山苍子内生细菌的抑菌活性及生防效果。[方法]从山苍子的根、茎、叶和果中分离出内生细菌52株(其中根23株、茎8株、叶7株、果实14株),采用对峙生长法检测其对植物病原真菌的抑制效果。[结果]5株来自叶和果的内生细菌分别对杨树溃疡病菌、小麦纹枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌和辣椒疫霉病菌有较好的拮抗作用。田间试验结果表明,1株16S rD-NA序列(序列号为JN252095)与Bacillus megaterium最为接近的山苍子叶内生细菌对辣椒疫霉病的防治效果较好,且可促进辣椒植株生长。[结论]山苍子内生细菌作为农作物生防细菌效果明显,值得进一步研究。     

竹肉球内生菌多肽的分离及抑菌活性

采用浸提、离心、沉淀、冻干的方法得到竹肉球内生菌(Engleromyces goetzei P.Hennings)的粗提物,再经分子筛G-25凝胶柱纯化后得到粗多肽,采用滤纸片法和平板对峙法,以抑菌圈直径为指标进行抑菌活性检测,结果表明:粗多肽对农业致病真菌的菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中,内生菌多肽DMSO提取液对小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、核果炭疽病菌(Drupe anthrax)和茄子黄萎病菌(Verticilllium albo-atrum)的抑菌活性最高,IC50分别为8.70、9.48和8.96μg/mL。同时,对抗菌肽在酸碱、高温、酶解和有机溶剂环境下的稳定性进行研究,结果显示:除了具有一定的溶剂选择性及α-淀粉酶、胃蛋白酶对其有一定程度的水解之外,该抗菌肽具有很强的稳定性。用HPLC对粗多肽进一步纯化,得到电泳纯的抗菌肽。     

红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究

[目的]从红树林植物组织中分离出对动物病原菌具有广谱抑菌活性的植物内生菌。[方法]以铜绿假单胞菌、多杀性巴氏杆菌、产气肠杆菌、粪肠球菌4种常见的致病菌作为指示菌,采用M10和P3培养基从红树林植物根、茎、叶组织中分离内生菌,以固体琼脂打孔法筛选具有抑菌活性的菌株,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S rDNA基因并测序,通过邻接法构建系统发育树。[结果]从红树林植物组织中共分离857株可培养的内生菌,有145株菌有抑菌活性,占分离菌株的16.6%。其中通过M10培养基从红树林植物叶组织分离的菌株32-5对铜绿假单胞菌、产气肠杆菌都具有最强抑菌活性,其抑菌圈直径分别为38和42 mm;通过P3培养基从红树林植物茎组织分离的菌株12-4对粪肠球菌具有最强抑菌活性,其抑菌圈直径为56 mm;通过M10培养基从红树林植物茎组织分离的菌株13-2对多杀性巴氏杆菌具有最强抑菌活性,其抑菌圈直径为64 mm。有抑菌活性菌株分为10个属,其中芽孢杆菌属是优势菌属。[结论]该试验初步揭示红树植物根、茎、叶组织中植物内生菌的抑菌活性和多样性,为开发新型抗菌药物及应用提供理论依据。     

鹅掌楸内生菌分离纯化及其抗菌活性初步研究

从鹅掌楸的茎、叶中分离出内生菌5株,以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）为供试菌,用杯碟法分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：鹅掌楸内生菌对4种供试菌有一定的押菌活性,不同组织中内生菌的抑菌活性存在差异,其中J1、Y3对供试菌具有普遍抑茼作用。     

大叶黄杨内生真菌的分离及抑菌活性研究

[目的]从大叶黄杨中找到具有抗菌活性的内生真菌。[方法]采用PDA双抗培养基从大叶黄杨茎和叶中分离内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵后所得的发酵液用乙酸乙酯萃取处理,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为试验菌株,用纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌试验。[结果]从大叶黄杨茎和叶中分离得到28株内生真菌,其中有21株内生真菌的发酵液粗提物对指示菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的75%。[结论]大叶黄杨内生真菌的次生代谢产物中存在着丰富的天然活性抑菌物质,可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

4种茄科作物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

番茄、茄子、烟草和辣椒健康植株内生细菌的分离及拮抗菌的筛选结果表明,植物的不同种、品种及植物的不同部位,内生细菌数量有所不同.不同作物每克鲜重平均内生细菌数量为1180-11160 cfu;各作物植株不同部位均以果中内生细菌的数量最少,根和茎中的内生菌数量较多.拮抗测定表明,各植物体内均存在对番茄青枯病菌和黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌,对番茄青枯病菌具有拮抗作用的植物内生细菌占总数的16.21%,而对黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌占总数的28.53%.从拮抗菌株中筛选出3株对多种植物病原真菌有较好拮抗作用的菌株,对黄瓜枯萎病有20.83%-79.17%的防病效果,此3菌株对水稻白叶枯病菌和番茄青枯病菌也有一定拮抗作用,内生性测定表明,3菌株均能进入宿主植物番茄和茄子体内,经初步鉴定3菌株均为芽孢杆菌(Bacillussp.).     

具氯氰菊酯降解功能的植物内生细菌分离鉴定及降解特性研究

从上海郊区某农药厂附近生长的牛筋草中分离到一株能以氯氰菊酯作为唯一碳源生长的植物内生菌,命名为A-24。该菌在48 h内对20 mg·L^-1的氯氰菊酯的降解率为91.8%,72 h内可完全降解氯氰菊酯。通过生理生化观察,结合16S rRNA基因序列分析,将该菌株鉴定为Achromobacter sp.。菌株A-24降解氯氰菊酯的最适温度和pH分别为30℃和7.0;当菌株A-24的接种量≥2%时,其对20 mg·L^-1氯氰菊酯的降解效果较好,降解率在80%以上;当氯氰菊酯浓度≤50 mg·L^-1时,菌株A-24对氯氰菊酯有较高的降解率,降解率在70%以上。通过HPLC鉴定降解产物3-苯氧基苯甲酸,推测氯氰菊酯通过酯键断裂生成二氯菊酸和3-苯氧基苯甲醛,然后3-苯氧基苯甲醛生成3-苯氧基苯甲酸。本研究结果为利用功能内生细菌调控植物代谢氯氰菊酯,进而有效规避作物污染风险提供新途径。     

药用植物金银花内生细菌的分离和特性研究

以药用植物金银花为材料,对其根部、茎部、叶片不同部位的内生细菌进行分离纯化,对细胞特征采用革兰氏染色、芽孢染色法进行研究,结合菌落特征和生理生化特性将其内生细菌初步分为第1类型和第2类型两大类.采用稀释涂布法对金银花不同部位分别进行可培养内生细菌计数.结果表明,内生菌的总体数量分布为根部＞叶片＞茎部,说明内生细菌在金银花组织中的分布因部位不同而不同.基于细胞染色特征、显微观察结果和培养特性,内生菌中第1类型符合芽孢杆菌属(Bacillus)的特点,第2类型具有类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的特征.     

虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.     

玉米内生联合固氮菌的分离与鉴定

试验对玉米内生固氮菌进行分离、鉴定,并研究内生细菌与玉米的联合固氮活性。结果表明,从玉米中分离出5株具有联合固氮活性的菌株,分别为1株弯曲假单胞菌NFR19(Pseudomonas geniculata),2株产酸克雷伯氏菌NFL28与NFSt18(Klebsiella oxytoca),1株节杆菌NFR7(Arthrobacter sp.),1株纤维化纤维菌NFR10(Cellulosimicrobium cellulans)。研究首次分离出具有固氮活性的纤维化纤维菌,并证实节杆菌具有固氮活性。从环境中筛选新的玉米内生固氮菌资源,促进玉米生长,为玉米内生联合固氮细菌的应用奠定基础。     

1株烟草青枯病拮抗内生细菌的分离及鉴定

为了筛选具有生防价值的拮抗烟草青枯雷尔氏菌的内生细菌,从湖南长沙、永州、郴州烟草青枯病发病区的健康烟株采集茎秆,采用稀释平板分离法获得150个内生菌株.抑菌结果表明,21个内生菌株对烟草青枯雷尔氏菌2316菌株有拮抗效果,占总菌株数的14.0％.拮抗菌株中,F1菌株24 h对烟草青枯雷尔氏菌株2316抑菌圈直径达6.5...     

苦豆子(Sophora alopecuroides)内生颉颃细菌的筛选及鉴定

用w(次氯酸钠)=3%采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生细菌进行分离.结果表明:消毒3min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生细菌的数量,根部比茎、叶部多.从20株苦豆子内生细菌中筛选出对黄瓜枯萎病、番茄枯萎病和茄子枯萎病菌有较强颉颃活性的菌株12株.经初步鉴定,5菌株为芽孢杆菌属,3菌株为链球菌属,2菌株为肠杆菌属,假单胞菌属和奈瑟氏球菌属各1株.     

内生细菌对荔枝果实营养成分的影响

研究了内生细菌对荔枝果实的保鲜效果及对其可溶性糖、还原性VC、游离有机酸和氨基酸含量等的影响.结果表明:内生细菌对荔枝果实具有一定的保鲜效果,如经内生细菌BS-2和TB2处理的荔枝果实在常温下放置6 d,好果率为20.45%-31.48%;经这2种内生细菌处理后,荔枝果实的可溶性糖含量降低,还原性VC及游离有机酸含量均比清水处理高,如经BS-2处理的荔枝果实储藏9 d时,其还原性VC含量比清水处理高171.74%;另外,经内生细菌处理后,荔枝果实的氨基酸除了甘氨酸、丙氨酸和精氨酸的含量比清水处理低外,其他氨基酸含量均比清水处理高,经BS-2处理的荔枝果实的氨基酸总量在处理后7 d与刚采摘时相同.     

活性内生细菌对PEG6000胁迫培养小麦脯氨酸和根系活力的影响

实验选择4株无花果活性内生细菌（Bacillus subtilis strain 3251、Bacillus velezensis strain 3252、Bacillus WHG5181、Bacillus WHG5182）为研究对象,以济麦22号为试验材料,采用水培方法模拟干旱胁迫（20% PEG6000）小麦,胁迫培养过程中分别接入4株无花果活性内生细菌,通过测定小麦株高、根系活力和脯氨酸含量,分析4株活性内生细菌对干旱胁迫下小麦幼苗生理特征的影响。结果表明：4株无花果活性内生细菌对缓解小麦幼苗干旱胁迫有一定作用,加入活性内生细菌培养后小麦株高均高于对照组和干旱胁迫（20% PEG6000）实验组;在胁迫培养至14d时,加入活性内生细菌培养后小麦根系活力均高于干旱胁迫（20% PEG6000）实验组;其中,活性内生菌（Bacillus WHG5182）对小麦生长缓解作用达到91.96%,Bacillus WHG5182可以有效的缓解干旱胁迫（20% PEG6000）对小麦影响。     

线叶嵩草内生细菌的鉴定及溶磷效果的初步研究

菌株LXA10分离于东祁连山高寒草地线叶嵩草(Kobresia capillifolia),经PKO培养基培养和溶磷活性测定.结果表明:菌株LXA10对无机磷的溶解能力为28.14 mg·L-1,溶磷量为5.60 mg·g-1.不同的培养基成分对菌株LXA10的溶磷能力有影响,培养基中Fe2+、Mn2+、Mg2+等离子...