海藻酸钠/壳聚糖双层合生元微胶囊制备及储藏稳定性和控制性释放

以海藻酸钠和壳聚糖为包埋剂,在其中加入低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides,GOS),对嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)进行包埋,制备海藻酸钠/壳聚糖双层合生元微胶囊,并对其制备工艺、控制性释放和储藏稳定性进行研究.结果表明:当海藻酸钠的质量浓度为2g/100mL时,微胶囊的外观、粒径和包埋率均较好;在对得到的双层微胶囊进行人工胃肠道抗逆实验,发现双层包埋的微胶囊在人工胃液中比较稳定,S.thermophilus 基本不被释放,而当双层微胶囊在人工肠液液中到150min后微胶囊已经完全崩解,乳酸菌释放完毕.通过对游离状态和双层包埋微胶囊菌体存活率进行计算,游离状态的S.thermophilus菌悬液经过冷藏,菌体存活率下降十分明显,未添加GOS的菌悬液在第13天菌体存活率仅有0.32％,而添加GOS的菌悬液活菌存活率相对较高,可以达到14.64％;但双层微胶囊在添加和未添加GOS时,菌体存活率在整个储藏期内下降幅度均较小,在第17天时,菌体存活率依然能够达到93.64％和87.98％.     

富硒乳酸粪肠球菌微胶囊包埋工艺及产品抗性试验研究

对富硒乳酸粪肠球菌采用0.03%к-卡拉胶、0.25%刺槐豆胶和2.5%明胶喷雾干燥的方法,进行三层微胶囊生物包埋,获得产品率为82.68%,包埋后菌体存活率为72.15%,菌体硒含量为0.571 mg/g.产品抗性试验表明:在人工胃酸 (pH2.1) 环境下,经2h包埋的乳酸肠粪球菌的存活率达96%以上,不受胃酸的影响;耐贮存性试验证明,包埋的富硒乳酸肠粪球菌在常温下贮存1年,由初始的5.7×108cfu/ml活菌数降为5.4×107cfu/ml,菌体存活率保持在19.5%以上,包埋菌体的耐贮存性能好;在一定加热条件下,50℃、30min菌体存活率为89.71%,100℃、5min为86.91%,120℃、2min为89.18%,证明经3层微胶囊包埋的富硒乳酸粪肠球菌,其微胶囊产品的耐热稳定性好.     

果胶/壳聚糖姜黄素微胶囊制备及其体外人工胃肠道耐受性研究

【目的】利用微胶囊技术以果胶、壳聚糖为壁材对姜黄素进行包被处理,制备双层包被微胶囊,通过形态特征、机械强度、包埋率等分析确定最佳制备条件,并对其进行体外人工胃肠道耐受性研究。【方法】以8%果胶、不同浓度姜黄素(3.5、4.0、4.5、5.0和5.5 mg/mL)、氯化钙(CaCl₂)溶液(0.3、0.4、0.5和0.6 mol/L)及不同配比姜黄素与果胶溶液(3∶7、2∶8、1∶9(V/V))为第一层包被,筛选果胶姜黄素微胶囊的最佳制备条件;以不同pH(4.2、4.6、5.0、5.4和5.8)的0.8%壳聚糖为第二层包被,筛选制备果胶/壳聚糖姜黄素微胶囊的最佳条件。以筛选的最佳条件制备3组微胶囊(T1、T2和T3),并对其外貌形态、机械强度、包埋率、载药量及体外人工胃肠道耐受性进行评价。【结果】当以8%果胶、4.5 mg/mL姜黄素、姜黄素与果胶配比为1∶9(V/V)、0.5 mol/L CaCl₂为第一层包被条件时制得的果胶姜黄素微胶囊包埋率达98%;以pH为4.6、5.0和5.4的0.8%壳聚糖为第二层包被条件时制备的微胶囊大小均匀、形状...     

海藻酸钠/羧甲基微胶囊对副干酪乳杆菌生存率影响的研究

为探究提高食品中副干酪乳杆菌在胃肠道存活的方法，本试验以海藻酸钠（Alg）和N，O-羧甲基壳聚糖（CMCS）为囊材，采用静电液滴法和传统挤出法分别制备海藻酸钠-羧甲基壳聚糖微胶囊|以Alg和CMCS的不同配比为影响因素，测定其包埋产率、抗酶活性、过胃肠道模拟液后的存活率以及耐储存性。对微胶囊进行傅利叶红外分析和扫描电镜分析。结果表明：静电液滴法能够明显改善微胶囊粒径大小|Alg和CMCS比例为1:1时（E-AC）微胶囊包埋产率最大，为（92.20±1.02）%。与游离的副干酪乳杆菌相比，过胃肠道模拟液后（SIF）后，E-AC微胶囊包埋的益生菌存活率显著提高（P < 0.01），存活量为（7.6±0.65) Log10 cfu/mL。综上，采用静电液滴法制备的微胶囊与传统挤出法相比粒径较小，存活率无统计学差异。储存性试验表明，E-AC在储存4周后，益生菌存活率较高。综上，Alg和CMCS为壁材制备的微胶囊在一定程度上改善了益生菌的存活率和耐储存性。 [关键词] 海藻酸钠|N,O-羧甲基壳聚糖|副干酪乳杆菌|存活率     

益生菌、低聚壳聚糖、酸化剂及复合酶对1~66日龄黄羽肉鸡生长性能、免疫功能、胴体性能和肉品质的影响

试验旨在研究益生菌、低聚壳聚糖、酸化剂单独使用及与复合酶组合使用对1~66日龄黄羽肉鸡生长性能、免疫功能、胴体性能和肉品质的影响。选用1 440只1日龄快速型岭南黄羽肉公雏,根据体重一致原则分为8个处理组：对照组（无抗生素添加）、抗生素组（225 mg/kg金霉素+200 mg/kg恩拉霉素）、益生菌1组（500 mg/kg枯草芽孢杆菌+200 mg/kg乳酸杆菌+1 000 mg/kg活性酵母）、益生菌2组（200 mg/kg混合菌产品）、低聚壳聚糖组（50 mg/kg低聚壳聚糖）、酸化剂组（2 000 mg/kg苯甲酸+2 000 mg/kg柠檬酸）、无抗组合1组（50 mg/kg低聚壳聚糖+1 000 mg/kg酸化剂+500 mg/kg复合酶）、无抗组合2组（益生菌1组+无抗组合1组）,每个处理6个重复,每个重复30只鸡。试验分3个阶段,试验期66 d。结果显示,1~21日龄,与对照组相比,低聚壳聚糖组和无抗组合1组料重比显著降低（P<0.05）;与抗生素组相比,益生菌1、2组体重和平均日增重显著降低,无抗组合2组平均日增重显著降低,益生菌1组和无抗组合2组料重比显著升高（P<0.05）;低聚壳聚糖组和无抗组合1组胸腺指数均高于对照组和抗生素组（P>0.05）;无抗组合1组血浆IgG含量高于抗生素组（P>0.05）,显著高于对照组（P<0.05）;除酸化剂组外,其他各组血浆IgM含量均显著高于对照组和抗生素组（P<0.05）。22~42日龄,益生菌1组、低聚壳聚糖组和无抗组合1、2组体重、平均日增重均高于抗生素组,且低聚壳聚糖组平均日增重显著高于抗生素组（P<0.05）,益生菌1组、低聚壳聚糖组和无抗组合1组料重比均低于抗生素组（P>0.05）;不同无抗组合对免疫器官指数和血浆生化指标均无显著影响（P>0.05）。43~66日龄,不同无抗组合对生长性能和免疫器官指数均无显著影响（P>0.05）;益生菌1组、低聚壳聚糖组和无抗组合1、2组血浆IgM含量均高于抗生素组（P>0.05）,显著高于对照组（P<0.05）。益生菌2组和无抗组合1、2组腹脂率均低于抗生素组（P>0.05）,酸化剂组腹脂率低于对照组（P>0.05）,显著低于抗生素组（P<0.05）;益生菌2组和无抗组合1、2组45 min肉色L^*值低于抗生素组（P>0.05）,低聚壳聚糖组45 min肉色L^*值低于对照组（P>0.05）,显著低于抗生素组（P<0.05）。综合本试验3个阶段生长性能、免疫功能、胴体性能和肉品质等结果,推荐1~66日龄快大型黄羽肉公鸡基础无抗日粮中同时添加50 mg/kg低聚壳聚糖、1 000 mg/kg酸化剂和500 mg/kg复合酶代替抗生素来提高生长性能、免疫功能、胴体性能和肉品质。     

表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌微胶囊制备工艺的优化

为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行控制单一变量试验,测定其包埋量,以筛选出最佳壁材及浓度。通过模拟胃肠液环境试验,比较微胶囊释放率,并对不同壁材进行保存期试验,比较最低活菌数,利用响应面试验确定最佳工艺条件,使用最佳工艺条件制备微胶囊后进行验证。优化后的结果为:选取海藻酸钠和壳聚糖作为壁材,在海藻酸钠浓度为2.49%,壳聚糖浓度为0.96%,CaCl₂浓度为6.67%,凝固时间为57 min的条件下微胶囊效果最佳,预测包埋量为7.85×10⁸ CFU/g。微胶囊在模拟胃液中稳定存在,在模拟肠液中可完全破裂,能释放出微胶囊内95%以上的乳酸乳球菌。海藻酸钠-壳聚糖微胶囊在4 ℃保存3周后,微胶囊中活菌数为1.41×10⁷ CFU/g。对微胶囊的最佳工艺条件验证结果为微胶囊的包埋量为8.08×10⁸ CFU/g;常温保存2周后,活菌数仍可达到3.89×10⁶ CFU/g;ELISA方法检测微胶囊内重组乳酸乳球菌可见表达的牛乳铁蛋白肽,抑菌试验可见微胶囊内重组乳酸乳球菌表达的牛乳铁蛋白肽对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌仍具有明显的抑制作用。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌可制备成为低成本、保存期长、耐胃液的微胶囊,为重组乳酸菌在生产中的进一步应用奠定基础。     

体外法研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响

本试验旨在研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响。选取3头体重约为（650±50）kg、安装永久性瘤胃瘘管的水牛作为瘤胃液供体动物,通过体外批次培养,设计发酵底物的精粗比为40：60,试验设4个组,每组5个重复,每组各添加0.25 mg/mL的α-亚麻酸,硝酸钠添加水平分别为0（对照）、1、2、3 mg/mL。分别培养3、6、9、12、24 h时测定产气量和甲烷产量,在培养24 h结束后测定体外发酵参数和脂肪酸含量。结果表明：①添加硝酸钠显著降低了瘤胃培养液24 h的总产气量、甲烷（CH₄）含量和甲烷/总产气量的比例（P<0.05）,添加1、2和3 mg/mL硝酸钠后瘤胃液甲烷含量分别降低了89.62%、91.20%、91.75%。②添加硝酸钠组瘤胃培养液的pH和氨态氮（NH₃-N）含量显著高于对照组（P<0.05）,添加1 mg/mL硝酸钠组微生物蛋白（MCP）含量也显著高于对照组（P<0.05）,其他组别差异不显著（P>0.05）;添加硝酸钠组瘤胃液乙酸浓度差异不显著（P>0.05）,但丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸浓度显著低于对照组（P<0.05）,乙酸/丙酸显著高于对照组（P<0.05）,添加3 mg/mL硝酸钠组瘤胃液总挥发性脂肪酸（TVFA）含量显著低于对照组（P<0.05）。③添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18：2 cis-9,trans-11、C18：2 trans-10,cis-12、C20：1、不饱和脂肪酸（UFA）含量及UFA/SFA显著高于其他组（P<0.05）;添加硝酸钠组瘤胃液C18：2n6c、C18：1n9t、C20：5n3（EPA）和C22：6n3（DHA）的含量均高于对照组,且1 mg/mL硝酸钠组含量最高,但差异不显著（P>0.05）;添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18：3n3、C18：2n6c和C18：1n9c含量均高于对照组,差异不显著（P>0.05）。由此可见,体外添加硝酸钠显著降低了瘤胃液总产气量和甲烷含量,pH和NH₃-N含量显著升高,TVFA含量降低,通过显著减少丙酸含量而升高乙酸/丙酸;添加1 mg/mL硝酸钠可显著提高瘤胃液共轭亚油酸（CLA）和UFA含量,且在抑制甲烷产生的同时能够降低不饱和脂肪酸的生物氢化程度。     

低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞紧密连接蛋白表达的影响

试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮（zearalenon，ZEN）对猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组（C）、ZEN （30 μg/mL ZEN）、ZEN+0.5 Se （30 μg/mL ZEN+0.5 μmol/L低聚壳聚糖硒，以Se计）、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组。待细胞长至60%~70%汇合时，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液，C和ZEN组更换为正常培养液，12 h后向含ZEN组加入30 μg/mL ZEN，继续培养24 h。收集各组细胞培养液，检测碱性磷酸酶（AKP）活性；Western blotting法检测闭锁连接蛋白（zonula occludens-1，ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）的表达，免疫荧光法检测ZO-1和Occludin蛋白的表达和定位情况。AKP活性检测结果表明，与对照组相比，ZEN、ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se组AKP活性均显著升高（P<0.05），ZEN+3 Se组AKP活性差异不显著（P>0.05）；与ZEN组相比，ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组AKP活性均显著降低（P<0.05）。Western blotting检测结果表明，与对照组比，ZEN组ZO-1和Occludin蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）；与ZEN组比，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组ZO-1表达水平均差异不显著（P>0.05），但随着Se浓度的增加，ZO-1表达水平逐渐升高，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3 Se组Occludin表达水平均显著升高（P<0.05）。免疫荧光结果表明，低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的ZO-1和Occludin蛋白荧光信号减弱现象，并恢复ZO-1和Occludin蛋白的定位分布。由此说明，低聚壳聚糖硒可降低ZEN引起的IPEC-J2细胞AKP活性升高，上调ZEN引起的ZO-1、Occludin蛋白表达水平下降，并调节其定位分布。     

单宁酸对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响

研究旨在探讨单宁酸对猪卵母细胞体外成熟质量及其胚胎发育能力的影响。在猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）体外成熟培养液中添加不同浓度（0、1、10、100 μg/mL）单宁酸培养42 h后,检测COCs的扩散程度和卵丘细胞扩散指数,统计COCs的体外成熟率,检测成熟卵母细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）和生长分化因子9（growth differentiation factor 9,GDF9）的水平,并统计孤雌激活及体外受精胚胎48和168 h的卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数。结果显示,与对照组相比,10 μg/mL单宁酸组卵丘细胞扩散指数显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率差异不显著（P>0.05）,100 μg/mL单宁酸组卵母细胞成熟率显著降低（P<0.05）;1和10 μg/mL单宁酸组GSH和GDF9水平显著提高（P<0.05）,ROS水平显著降低（P<0.05）。孤雌胚胎和体外受精胚胎发育能力结果显示,与对照组相比,各单宁酸组卵裂率差异不显著（P>0.05）,10 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚率及体外受精胚胎囊胚率显著提高（P<0.05）,100 μg/mL单宁酸组孤雌胚胎囊胚细胞数及体外受精胚胎囊胚细胞数均显著低于其他各组（P<0.05）。以上结果表明,10 μg/mL单宁酸可通过提高卵丘细胞扩散能力及GSH和GDF9水平、降低卵母细胞内ROS水平,改善猪卵母细胞成熟质量,提高孤雌胚胎及体外受精胚胎的发育能力。     

4味中药复方治疗鸡大肠杆菌病效果的研究

为了评价由小鱼眼草、凉粉草、圆穗蓼、梁王茶4味中药组成的方剂抗鸡致病性大肠杆菌的效果，首先对病料进行分离鉴定，然后采用药敏试验测定药物抑菌圈直径，通过小鼠测定中药安全性，最后人工诱发大肠杆菌病模型治疗试验，并应用中药分别以高、中、低3个剂量（1、0.5和0.25 g/mL）对试验鸡进行灌服治疗。结果显示，麦康凯培养基上呈现红色菌落，革兰氏染色镜检见红色短小杆菌；生化鉴定结果显示，葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、吲哚和MR显阳性，三糖铁产酸产气，枸橼酸盐、VP和硫化氢显阴性。对分离细菌进行PCR检测，检测基因与对照基因均得到大小为1 466 bp的特异性条带。中药、西药环丙沙星抑菌圈直径分别为15.2和18.3 mm。小鼠灌服中药后全部存活，各试验组小鼠平均增重和空白对照组差异不显著（P>0.05），未见不良反应。中药高、中、低3个剂量组、环丙沙星组、感染对照组、空白对照组的存活率分别为96.7%、93.3%、63.3%、93.3%、50.0%和100%，中药高、中、低3个剂量组和环丙沙星组治愈率分别为96.7%、93.3%、63.3%和93.3%。中药高、中剂量组平均增重及胸腺重差异不显著（P>0.05），但显著高于中药低剂量组（P<0.05）；中药高、中剂量组和环丙沙星组脾脏重差异不显著（P>0.05），但显著高于中药低剂量组和感染对照组（P<0.05）。结果表明，1和0.5 g/mL中药口服液抗菌效果明显，与环丙沙星效果相似，中药低剂量效果不明显。     

Preparation of Pectin/Chitosan Synbiotic Microcapsules and Its Study on Simulated Gastrointestinal Environments and Storage Stability

Pediococcus acidilactici and inulin were used as wall cores,with pectin and chitosan as the shell material.The conditions of microencapsulation were optimized by analyzing the embedding rate,particle morphology,the mechanical strength,gastrointestinal tolerance in vitro and storage performance.The experimental group was divided into three groups:Free Pediococcus acidilactici group (PA),microcapsule group made by embedding Pediococcus acidilactici alone (PC(PA)MCs),synbiotic microcapsule group made by embedding inulin and Pediococcus acidilactici (PC(PA-I)MCs).The results showed that the appearance,particle size,mechanical strength and embedding rate of microcapsules were better when the mass concentration of pectin was 5 g/100 mL,the content of inulin was 25 mg/mL and the mass concentration of chitosan was 0.8 g/100 mL.Through the gastrointestinal tolerance test in vitro, it was found that PC(PA-I)MCs group was relatively stable in the artificial gastric juice in vitro (P<0.05).At the same time,it began to release rapidly in the artificial intestinal fluid in vitro at 30 min and it was almost completely disintegrated after 2 h.It was found that the cell survival rate of PA group decreased significantly at cold and room temperature through the storage test for 4 weeks.While the cell survival rate of PC(PA-I)MCs group decreased slightly.And the cell survival rate of PC(PA-I)MCs group was higher than that of PC(PA)MCs group (P>0.05).At room temperature,the cell survival rate of PC(PA-I)MCs group was higher than that of PC(PA)MCs group (P>0.05).In summary,pectin/chitosan microcapsules with inulin as probiotics had a better embedding effect on Pediococcus acidilactici.     

复合酶与复合酶菌制剂对日粮体外降解率及不同泌乳阶段奶牛产奶性能的影响

本试验旨在研究复合酶及复合酶菌制剂对奶牛日粮体外降解率及不同阶段奶牛产奶性能的影响。在体外试验中,分别以基础日粮（Ⅰ组）及基础日粮中分别添加复合酶制剂（Ⅱ组）、复合酶菌制剂（Ⅲ组）的日粮作为发酵底物,体外培养72 h,测定不同时间点（6、12、24、36、48、72 h）日粮干物质降解率（DMD）和粗蛋白质降解率（CPD）。在饲养试验中,分别选取体重、胎次、体况相近的泌乳前期（30 d±5 d）、泌乳中期（100 d±5 d）和泌乳后期（250 d±5 d）奶牛各24头,平均分成3组,其中对照组（Ⅰ组）奶牛饲喂全混合日粮（TMR）,复合酶制剂组（Ⅱ组）和复合酶菌制剂组（Ⅲ组）奶牛在TMR中分别添加1 kg/t的复合酶制剂和复合酶菌制剂。每期试验持续74 d,其中预试期14 d,正试期60 d,每天记录产奶量。结果显示：①体外试验中,Ⅱ、Ⅲ组的DMD、CPD均随处理时间的延长而增加。在各个时间点,Ⅲ组的DMD、CPD均高于Ⅱ组,其中DMD在6、72 h时差异显著（P<0.05）,CPD在36、72 h时差异显著（P<0.05）,在其他时间点差异均不显著（P>0.05）。②在泌乳前期,Ⅱ、Ⅲ组的平均日产奶量与Ⅰ组相比分别提高了3.68%和4.10%,差异显著（P<0.05）,Ⅱ、Ⅲ组之间差异不显著（P>0.05）;泌乳中期,Ⅱ、Ⅲ组的平均日产奶量与Ⅰ组相比分别提高了7.53%和10.66%,差异显著（P<0.05）,Ⅱ、Ⅲ组之间差异不显著（P>0.05）;泌乳后期,Ⅱ、Ⅲ组的平均日产奶量与Ⅰ组相比分别提高了7.06%和5.16%,差异显著（P<0.05）,Ⅱ组、Ⅲ组之间差异不显著（P>0.05）。综上,复合酶与复合酶菌制剂均能在一定程度上提高日粮体外DMD和CPD以及奶牛在不同时期的产奶量,其中,复合酶制剂对提高泌乳后期奶牛产奶量效果更好,复合酶菌制剂对提高泌乳中期奶牛产奶量效果更好。     

Effect of Compound Enzyme and Compound Enzyme Probiotics Preparation on Degradation Rate of Diet in vitro and Milk Production Performance of Dairy Cows at Different Lactation Stages

The purpose of this experiment was to study the effect of compound enzyme and compound enzyme bacteria preparation on the degradation rate of diet in vitro and milk production performance of dairy cows at different lactation stages.In in vitro experiment,the basic diet (group Ⅰ) and the basic diet added with compound enzyme (group Ⅱ) and compound enzyme probiotics preparation (group Ⅲ) were used as fermentation substrate respectively.After 72 h of culture in vitro,the dry matter degradation rate (DMD) and crude protein degradation rate (CPD) of the diet were measured at different time (6,12,24,36,48 and 72 h).In feeding experiment,24 dairy cows with similar body weight,parity and condition were divided into three groups at early lactation (30 d±5 d),middle lactation (100 d±5 d) and late lactation (250 d±5 d),respectively.The cows in control group (group Ⅰ) were fed with TMR,in compound enzyme group (group Ⅱ) and the compound enzyme probiotics group (group Ⅲ) were fed with the TMR added with 1 kg/t compound enzyme and compound enzyme probiotics respectively.The trial period was 74 days,including 14 days of pre trial period and 60 days of normal trial period.`The results showed that:①In vitro DMD and CPD of the two groups increased with the prolongation of treatment time.At each time point,the values of DMD and CPD in group Ⅲ were higher than those in group Ⅱ,the difference of DMD was significant at 6 and 72 h (P<0.05),CPD was significant at 36 and 72 h (P<0.05),and there was no significant difference at other time points (P>0.05).②In the early stage of lactation,the average daily milk production of groups Ⅱ and Ⅲ increased by 3.68% and 4.10% respectively compared with group Ⅰ,the difference was significant (P<0.05),and the difference between groups Ⅱ and Ⅲ was not significant (P>0.05).In mid-lactation,the average daily milk production of groups Ⅱ and Ⅲ increased by 7.53% and 10.66% respectively compared with group Ⅰ (P<0.05),and the difference between groups Ⅱ and Ⅲ was not significant (P>0.05).In the later stage,the average daily milk production of groups Ⅱ and Ⅲ increased by 7.06% and 5.16% respectively compared with group Ⅰ (P<0.05),and the difference between group Ⅱ and Ⅲ was not significant (P>0.05).In conclusion,both compound enzymes and compound enzyme probiotics preparations could improve the in vitro DMD and CPD of the diet and the milk production of dairy cows in different periods to a certain extent.Among them,the compound enzyme preparation had a better effect on increasing milk production of dairy cows in the late lactation,while the compound enzyme probiotics preparation has a better effect on increasing milk production in mid-lactating dairy cows.     

藏红花素对小鼠卵母细胞体外成熟能力的影响

试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L），小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后，检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量，并进行体外受精（IVF）；体外受精后6 h统计受精率，24 h统计卵裂率，96 h统计囊胚率。结果显示，与对照组相比，10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；当藏红花素浓度继续增加时，卵母细胞的第一极体排出率下降，30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）；5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05），10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比，10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05），15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05），对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明，在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率，显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量，但对受精后的胚胎发育无显著影响。     

高通量SNP芯片在牛体外早期胚胎染色体质量鉴定中的初步应用

旨在基于高通量SNP芯片建立一种可评估牛早期胚胎染色体质量和生产性能的方法,为胚胎牛育种提供技术支撑。本研究通过胚胎切割技术分别对荷斯坦奶牛体内囊胚(n=27)、体外囊胚(n=21)、体外2细胞胚胎(n=6)和8细胞胚胎(n=5)进行切割取样并统计发育率,其中体内囊胚组分为1/2体内胚组(切取半个胚胎)和体内滋养层(trophoblast cells, TE)组(切取体内胚胎少量TE),体外囊胚组、体外2和8细胞胚胎分别为体外TE组(切取体外胚胎少量TE)、体外2细胞(切取体外2细胞胚胎的1个卵裂球)和8细胞组(切取体外8细胞胚胎的1个卵裂球)。切割取样后进行全基因组扩增(whole-genome amplification, WGA),对扩增成功且DNA量大于1 000 ng的样品进行SNP芯片检测,芯片检出率大于90%的进行生产性能评估,低于90%的进行染色体片段缺失分析和数据填充。结果显示：1)切割部分TE后,体内TE组剩余部分和体外TE组剩余部分继续培养24 h后的发育率分别为(94.4±5.6)%和(90.5±6.6)%,而1/2体内胚组剩余部分的发育率显著降低,仅为(22....     

bFGF对3-硝基丙酸处理的小鼠受精卵体外发育能力的影响

【目的】研究在体外培养液中添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对3-硝基丙酸(3-NPA)处理的小鼠受精卵体外发育能力的影响,为提高氧化应激早期胚胎体外发育质量提供参考。【方法】在小鼠受精卵体外培养液中添加0、20、50、100和150 ng/mL bFGF,培养24、48和96 h,统计2-细胞率、4-细胞率和囊胚率,筛选最佳bFGF处理浓度。经腹腔注射12.5 mg/kg 3-NPA生产氧化应激体内受精卵,正常组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,将获得的受精卵分为添加或不添加bFGF组,即3-NPA和3-NPA+bFGF组及对照组(C)和bFGF组,培养到囊胚后,用DCFH-DA检测胚胎内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,CMF2HC检测谷胱甘肽(glutathione, GSH)水平,JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。【结果】0、20、50、100和150 ng/mL bFGF组2-细胞率均无显著差异(P>0.05),100 ng/mL bFGF组囊胚率显著高于其他各组(P<0.05),150 ng/mL bFGF组4-细胞率和囊...     

Effects of Resveratrol on in vitro Fertilization of Sheep Oocytes

The purpose of this study was to investigate the effects of resveratrol (RES) at different concentrations (0,0.5,2.0,5.0 μmol/L) on in vitro fertilization (IVF) and antioxidant capacity of ovine oocytes and the secretion of steroid hormones by cumulus cells.Sheep oocytes were fertilized in vitro after maturated in different concentrations of RES for 24 h,and the in vitro maturation (IVM) medium was collected for detecting the enzyme activity of superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-Px) and the content of monochrome display adapter (MDA).The ELISA method was used to detect the concentration of estradiol (E₂) and progesterone (P₄).The results showed that when compared to the control group,adding 0.5 μmol/L RES to the IVM medium significantly increased the cleavage rate (P<0.05),but had no significant effect on the fertilization rate and blastocyst rate (P>0.05);5.0 μmol/L RES significantly reduced the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05),which had an inhibitory effect on embryonic development.Adding 0.5 μmol/L RES to IVM and IVC (in vitro culture,IVC) medium significantly increased the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05).Compared to the control group,the addition of RES to IVM solution had a certain inhibitory effect on the secretion of E₂ by cumulus cells,5.0 μmol/L RES significantly reduced E₂ concentration (P<0.05);0.5 μmol/L RES significantly increased the P₄ secretion of cumulus cells (P<0.05).0.5 and 2.0 μmol/L RES increased the activity of SOD,GSH-Px and other enzymes,but there was no significant difference when compared with the control group (P>0.05),but significantly reduced MDA content (P<0.05),while 5.0 μmol/L RES significantly reduced the activity of antioxidant enzymes and increased the content of MDA (P>0.05).In conclusion,0.5 μmol/L RES simultaneously added to IVM and IVC medium could enhance the antioxidant capacity of oocytes and concentration of P₄,and reduced the content of MDA,thus improved the cleavage rate and blastocyst rate.     

响应面法优化蒸汽爆破小麦秸秆工艺

试验旨在利用Box-Behnken响应面法优化蒸汽爆破预处理小麦秸秆最佳条件，从而解决小麦秸秆营养成分利用率较低的问题。选取蒸汽压强（1.5~2.5 MPa）、水分含量（10%~50%）和维压时间（90~210 s）为自变量，瘤胃体外发酵产气速率为响应值，利用响应面建立回归模型并进行回归方程拟合，预测最佳工艺参数。结果显示：维压时间对瘤胃体外发酵产气速率的影响极显著（P<0.01），蒸汽压强和水分含量对瘤胃体外发酵产气速率无显著影响（P>0.05）。由F值可知：3个自变量对瘤胃体外发酵产气速率的影响大小依次为维压时间、蒸汽压强和水分含量。Box-Behnken响应面法优化蒸汽爆破预处理小麦秸秆的最优工艺参数为蒸汽压强1.77 MPa、水分含量49.91%和维压时间209.98 s。此条件下瘤胃体外发酵产气速率可达0.0794 mL/h。3次平行试验验证的体外发酵产气速率为0.0786 mL/h，与理论预测值误差仅为1.02%。将小麦秸秆在最佳爆破条件下重新爆破并进行体外发酵试验，与未蒸汽爆破的小麦秸秆相比，蒸汽爆破极显著降低了小麦秸秆中中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）和半纤维素的含量（P<0.01），同时极显著提高了体外发酵液中挥发性脂肪酸（VFA）和NH₃-N的含量（P<0.01）。综上，采用响应面法优化蒸汽爆破小麦秸秆的条件合理可行，优化的蒸汽爆破参数可用于提高小麦秸秆营养价值的蒸汽爆破工艺中。     

白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外受精的影响

本试验旨在研究不同浓度（0、0.5、2.0、5.0 μmol/L）白藜芦醇（resveratrol,RES）对绵羊卵母细胞体外受精（in vitro fertilization,IVF）、卵母细胞抗氧化能力及卵丘细胞分泌类固醇激素的影响。绵羊卵母细胞在含不同浓度RES的体外成熟（in vitro maturation,IVM）液中培养24 h以后进行体外受精,并收集IVM液,测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（monochrome display adapter,MDA）的含量;用酶联免疫法测定雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,P₄）的浓度。研究结果表明,与对照组相比,在IVM液中添加0.5 μmol/L RES显著提高卵裂率（P<0.05）,但对受精率和囊胚率没有显著影响（P>0.05）;5.0 μmol/L RES显著降低受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）,对胚胎发育有抑制作用;在IVM和体外培养（in vitro culture,IVC）液中分别添加0.5 μmol/L RES均显著提高受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）。与对照组相比,在IVM液中添加RES对卵丘细胞分泌E₂有一定的抑制作用,5.0 μmol/L RES显著降低E₂浓度（P<0.05）;0.5 μmol/L RES显著提高卵丘细胞P₄分泌量（P<0.05）。0.5和2.0 μmol/L RES增加SOD和GSH-Px等酶的活性,但与对照组相比无显著差异（P>0.05）,却显著降低MDA含量（P<0.05）;而5.0 μmol/L RES显著降低抗氧化酶活性并增加MDA含量（P<0.05）。综上所述,在IVM和IVC液中同时添加0.5 μmol/L RES,通过增强卵母细胞抗氧化能力和P₄的浓度,并降低MDA含量,从而提高胚胎卵裂率和囊胚率。