徐州地区猪源致病性大肠杆菌耐药性检测

为了考察徐州地区猪源致病性大肠杆菌的耐药情况,采用传统微生物法对徐州周边地区52株猪大肠杆菌进行分离鉴定,试管二倍稀释法测定细菌对药物的敏感性,提取耐药菌质粒DNA,PCR扩增耐药基因目的片段。结果表明,氟苯尼考和阿莫西林对徐州周边临床大肠杆菌分离株的最小抑菌浓度(MIC)值与标准菌株相比较,分别提高20～512倍、10～800倍,个别临床分离株对恩诺沙星的MIC值高达80μg/mL,对头孢曲松的MIC值高达80μg/mL,对安普霉素的MIC值高达320μg/mL;经PCR检测临床分离株均扩增出氟苯尼考Flor耐药基因,Tem型ESBLs耐药基因目的片段。说明徐州周边临床大肠杆菌对氟苯尼考和阿莫西林已产生严重耐药性,对恩诺沙星和安普霉素已经耐药,但大部分菌株对头孢曲松敏感。提示徐州周边地区猪场应科学合理、有计划地轮换使用不同药物。     

氟苯尼考与氯霉素对鸡大肠杆菌病的疗效比较

以试管肉汤2倍稀释法测定氟苯尼考及氯霉素对鸡大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度（MIC），然后对实验性鸡大肠杆菌病病鸡进行治疗试验，内服3d,2次／d。结果表明，氟苯尼考及氯霉素对鸡大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度分别是3.2μg/mL和1.6μg/mL；以氟苯尼考40mg/kg和氯霉素40mg/kg体重给鸡（每组40只）内服后，对大肠杆菌病的治愈率分别为77．5％和55．0％,而感染对照组的死亡率为95．0％。     

氟苯尼考与乳酸诺氟沙星联用对鸡大肠杆菌活性的影响

为了研究氟苯尼考与乳酸诺氟沙星在治疗鸡大肠杆菌病时的相互作用,本试验采用肉汤稀释棋盘法,用氟苯尼考与乳酸诺氟沙星对鸡致病性大肠杆菌进行了体外联合药敏试验。氟苯尼考与乳酸诺氟沙星单独用药时的最小抑菌浓度(MIC)分别为16μg/mL、0.8μg/mL,联合用药的MIC分别为16μg/mL、3.2μg/mL,经计算FIC指数为5。结果表明,氟苯尼考与乳酸诺氟沙星联合用药对鸡大肠杆菌呈现拮抗作用。     

禽源烟曲霉菌和黄曲霉菌的分离鉴定及几种中药抑菌作用研究

【目的】对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定,并筛选分离菌株的体外抑菌药物。【方法】通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定,并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)及体外药敏试验统计菌落数量和直径来探究石菖蒲、黄柏、决明子、苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英对烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)的体外抑菌活性。【结果】成功分离到烟曲霉菌和黄曲霉菌。动物回归试验结果显示,雏鸡出现与病鸭相似的症状,剖检可见肝脏长出灰白色结节,且病变组织出现肉芽肿病变,说明2种病原菌均可使雏鸡感染。烟曲霉菌MIC₈₀结果显示,石菖蒲、黄柏、决明子和苦参MIC₈₀分别为8、16、32和64μg/μL,辣蓼、白头翁和蒲公英均为128μg/μL;黄曲霉菌的MIC₈₀结果显示,石菖蒲、决明子和黄柏MIC₈₀分别为8、16和32μg/μL,苦参和辣蓼均为64μg/μL,白头翁和蒲公英均为128μg/μL。体外药敏试验结果显示,在石菖蒲浓度为16...     

达氟沙星对猪胸膜肺炎放线杆菌的野生型临界值与药效学临界值的制订

为了制订达氟沙星对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)的野生型临界值与在猪体内的药效学临界值,试验采用微量肉汤稀释法测定达氟沙星对115株APP的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),制订野生型临界值;选取5株MIC₉₀附近菌株进行毒力试验,测定达氟沙星对毒力最强的菌株的体外和半体内MIC及最小杀菌浓度(MBC),进行体外与间接体内杀菌试验;将18头猪随机分成健康组和患病组(按体重滴鼻接种APP 1×10⁹ cfu/kg),均按体重肌肉注射甲磺酸达氟沙星注射液2.5 mg/kg(以达氟沙星计),分别于给药后0.25,0.5,0.75,1,2,4,6,8,10,24,36小时时采集血液,采用高效液相色谱法测定血浆中的药物浓度;构建PK-PD模型,制订药效学临界值。结果表明：达氟沙星对APP的MIC分布范围为0.004～1μg/mL,制订的野生型临界值为0.5μg/mL;S3菌株的毒力最强;达氟沙星对S3菌株的体外和半体内MIC均为0....     

恩诺沙星与其他抗菌药对鸡毒支原体的体外联合抑菌试验

采用2倍稀释法测定了恩诺沙星及其他8种抗菌药对鸡毒支原体BG44T株的最小抑菌浓度（MIC）,再以棋盘法测定恩诺沙星分别与其他8种抗菌药不同联合对鸡毒支原体BG44T株的敏感性。结果显示：恩诺沙星、替米考星、泰乐菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、氯霉素及氟苯尼考对鸡毒支原体BG44T株的MIC分别为0．063、0．004、0．016、0．063、16、〈0．004、0．008、8、8μg／mL。在8种不同联合用药对鸡毒支原体BG44T株的药敏试验中,恩诺沙星＋替米考星、恩诺沙星＋泰乐菌素、恩诺沙星＋吉他霉素、恩诺沙星＋林可霉素、恩诺沙星＋沃尼妙林、恩诺沙星＋泰妙菌素联合表现出相加作用,恩诺沙星＋氯霉素、恩诺沙星＋氟苯尼考表现出拮抗作用。     

达氟沙星对鸡毒支原体的临床疗效试验

试管内抑菌试验测得达氟沙星，氧氟沙星对鸡毒支原体的最小抑菌浓度（MIC）分别为0．048μg/ml，0．098μg/ml。人式感染鸡毒支原体的鸡24小时后，100、50、25ppm的达氟沙星、50ppm的氧氟沙星连续饮水5天给药，死亡率分别为0、0、3．3％、6．7％，而阳性对照组的死亡率为33％。达氟沙星及对照药物能显著降低鸡的死亡率，气囊损伤率及体内抗体阳性率。     

托氟沙星纳米乳的体内外抗菌作用研究

为考察托氟沙星纳米乳的体外抑菌活性及体内药效作用,用CLSI推荐的微量肉汤稀释法测定托氟沙星纳米乳的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并与盐酸左氧氟沙星进行比较;以鼠伤寒沙门菌人工感染的雏鸡为研究对象,测定不同浓度托氟沙星纳米乳的体内药效作用。体外抑菌试验表明,托氟沙星纳米乳对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、多杀巴氏杆菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌、鼠伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌的MIC为0.25μg/mL~2.00μg/mL,其抑菌活性是托氟沙星原药的2倍~4倍,盐酸左氧氟沙星的2倍~8倍;MBC为0.25μg/mL~4.00μg/mL,其抗菌活性是托氟沙星原药的2倍~8倍,盐酸左氧氟沙星的2倍~8倍。体内药效试验结果表明,低剂量(40mg/L)和中剂量(60mg/L)的托氟沙星纳米乳可显著降低鼠伤寒沙门菌感染雏鸡的死亡率和体重损失。托氟沙星纳米乳以纳米乳作为药物载体,增强了托氟沙星对临床常见细菌的体内外抵抗作用,提高了托氟沙星的临床应用价值。     

豫北地区临床分离鸡大肠杆菌的体外药物敏感性测定

为了有效地治疗鸡大肠杆菌病,采用微量倍比稀释方法测定了17种抗菌药物对临床分离的豫北地区15株鸡大肠杆菌的体外最小抑菌浓度(MIC),并根据其MIC及MIC范围(MICRange)使用SPSS 13.0中Probit过程计算出17种抗菌药物的MIC50和MIC90.结果表明:多粘菌素B的抑菌作用最强,MIC50、MIC90分别为0.11、0.87 μg/mL;加替沙星的抑菌作用次之,MIC50、MIC90分别为2.53、3.88 μg/mL,其它3种药物恩诺沙星、左氧氟沙星、环丙沙星的抑菌作用相当,但不及加替沙星,MIC50、MIC90分别为10.11～11.79 μg/mL、15.16～21.13 μg/mL;多西环素和阿莫西林等12种抗菌药物的抑菌作用较小,MIC50、MIC90分别为18.53～388.50 μg/mL和30.59～713.42 μg/mL.     

鸡肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为分析鸡肠道大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药性,试验采集了34个鸡直肠拭子样本,分离并鉴定大肠杆菌,采用微量稀释法测定分离菌对卡那霉素、氯霉素、氨苄西林、环丙沙星、头孢曲松钠、庆大霉素、磺胺嘧啶和强力霉素8种药物的敏感性。结果显示,分离并鉴定出34株鸡肠道大肠杆菌,其中4株经鉴定为产H₂S大肠杆菌。34株菌对卡那霉素、氯霉素、氨苄西林、环丙沙星、头孢曲松钠、庆大霉素、磺胺嘧啶和强力霉素的MIC₅₀分别为>256、256、>256、16、<0.125、256、>512和16 μg/mL,耐药率依次为100.0%、100.0%、100.0%、70.6%、11.8%、94.1%、100.0%和82.3%。34株菌均为多重耐药菌株,最少可对5种药物耐药,最多可对8种药物耐药,其中耐8种药物菌株百分率为2.9%;耐7种药物菌株百分率为58.8%;耐6种药物菌株百分率为32.4%;耐5种药物菌株百分率为5.9%。试验结果表明,34株鸡肠道大肠杆菌对8种常用抗菌药物的耐药谱广、耐药率高,兽医临床应根据试验结果调整用药方案。     

Epidemiological Cut-off Values (ECOFFs) of Salmonella from Chicken Intestinal Tract for Three Animal-specific Antibiotics

In order to establish epidemiological cut-off values (ECOFFs) of Salmonella for three animal-specific antibiotics (florfenicol,apramycin and danofloxacin) in Guangdong province.A total of 166 strains of Salmonella isolates from chicken intestinal tract from veterinary clinics and farms in Guangdong province in 2017 were recruited in this study,the minimum inhibitory concentrations (MIC) of florfenicol,apramycin and danofloxacin were determined in triplicate for each bacterial strain using the agar dilution method on Mueller-Hinton agar plates according to the CLSI reference method (CLSI-M100-S26).ECOFFs were calculated for the MIC data sets by application of nonlinear regression analysis,NRI(normalized resistance interpretation) and ECOFFinder software.MIC distribution of florfenicol,apramycin and danofloxacin against Salmonella from 2 to >512,4 to >512 and 0.015 to 64 μg/mL,respectively.MIC₅₀ and MIC₉₀ for apramycin,florfenicol and danofloxacin were 256 and >512,16 and >512,0.5 and 16 μg/mL,respectively.MIC distribution of apramycin and florfenicol presented obvious unimodal shape,while that of danofloxacin was a discontinuous multi-peak.The ECOFFs of florfenicol,apramycin and danofloxacin were recommended to be 16,16 and 0.125 μg/mL,respectively.In present study,the ECOFFs of Salmonella from chicken intestinal tract for apramycin,florfenicol and danofloxacin were determined,which provided scientific basis for resistance surveillance.     

屠宰场沙门氏菌耐药性分析和毒力基因检测

【目的】研究广东省茂名地区屠宰环节猪肉中携带的沙门氏菌的耐药性和毒力特征,为该地区食源性沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。【方法】从广东省茂名地区屠宰场采集的猪肉、脾脏、肝脏样本中分离到19株沙门氏菌,采用K-B药敏纸片法检测其对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类和磺胺类抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测β-内酰胺类耐药基因(bla_TEM、bla_OXA-1、bla_SHV)、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrS、qnrB)、氨基糖苷类耐药基因(aadA1、aac(6′)-Ⅰb、rmtB)、四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC)、酰胺醇类耐药基因(Cat1、floR)、磺胺类耐药基因(SulⅠ、SulⅡ、SulⅢ)和10种毒力基因(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD)的携带情况。【结果】19株沙门氏菌耐药严重,对四环素、多西环素、氯霉素、氟苯尼考、磺胺异噁唑的耐药率均>50%,对四环素、多西环素和氯霉素的耐药率最高...     

副猪嗜血杆菌对喹诺酮类药物流行病学临界值的建立

为了解副猪嗜血杆菌对喹诺酮类药物的耐药现状，制定副猪嗜血杆菌对喹诺酮类药物的流行病学临界值，本试验根据CLSI-VET中规定的方法，对ScienceDirect、PubMed、中国知网等数据库中副猪嗜血杆菌对喹诺酮药物的耐药数据进行收集，共收集到605株环丙沙星、74株氧氟沙星、322株左氧氟沙星、211株达氟沙星、276株萘啶酸、143株洛美沙星、638株恩诺沙星及262株马波沙星的最小抑菌浓度数据，进行数据修正后利用统计软件ECOFFinder进行整理拟合，得出MIC拟合直方分布图，确定了副猪嗜血杆菌对8种喹诺酮类药物的流行病学临界值和耐药率。8种药物中可用于兽医临床使用的药物为达氟沙星、恩诺沙星、马波沙星、环丙沙星；萘啶酸作为第1代喹诺酮抗菌药，已基本退出市场；另外3种药物不可用于兽医临床。通过调查研究得出副猪嗜血杆菌对氧氟沙星、萘啶酸、洛美沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、马波沙星、恩诺沙星药物的流行病学临界值分别为8、4、4、0.25、0.25、0.0625、0.0625和0.03125 μg/mL，说明目前野生型副猪嗜血杆菌对环丙沙星、达氟沙星、马波沙星和恩诺沙星这4种兽医临床可用药敏感性较高，临床推荐使用。文章得出的数据在国际交流频繁的时代普遍适用，在国内外缺乏相应药效学折点和临床折点时可作为敏感和耐药的判定标准，并为进一步制定临床折点，指导临床用药、延长喹诺酮药物的临床使用寿命奠定了基础。     

Study on Drug Resistance of Escherichia coli Isolated from Chicken and Swine in Organic Farm

To determine the drug resistance of E.coli strains from swine and chicken in organic farm,collection of stool specimens was conducted in one organic farm in Conghua city,Guangdong province in 2014,in which 118 E.coli strains were separated,including 55 from chicken and 63 from swine.The sensitivity of the E.coli strains from swine and chicken to 18 kinds of drugs was detected through agar dilution method.Similar properties in drug resistance were observed both in E.coli strains from swine and chicken in the same organic farm.In consideration of the resistance rate,samples were relatively sensitive to ceftazidime,cefquinome,cefoxitin,amikacin,apramycin,gentamicin,neomycin,florfenicol,chloramphenicol,imipenem,ciprofloxacin and olaquindox (chicken 0 to 21.8%;swine 0 to 14.3%).These isolates showed moderate resistance to ampicillin and streptomycin (chicken 29.1% to 38.2%;swine 23.8% to 27.0%).About 56.4% chicken isolates and 47.6% swine isolates showed resistant to more than 3 kinds of drugs.However,severe resistance was observed in trimethoprim-sulphamethoxazole,tetracyclineand and doxycycline (chicken 45.5%,76.4% and 72.7%;swine 50.8%,81.0% and 68.3%).The results also indicated that under organic farming mode,the drug resistance rates of E.coli strains from swine and chicken were relatively low in general.Multi-drug resistance existed but was relatively slight.Although the drug resistance rate to several specific antimicrobials was high,it was still lower than that in conventional farms.Since most studies focused on the drug resistance of the bacteria under conventional farming model,this study filled the blank of the research of drug resistance under organic farming model.     

有机农场鸡、猪源大肠杆菌耐药性研究

为了解有机养殖模式下鸡、猪源大肠杆菌的耐药情况,2014年从广东从化某有机农场鸡、猪粪便中采集并分离出118株大肠杆菌,包括55株鸡源大肠杆菌和63株猪源大肠杆菌,采用琼脂稀释法测定大肠杆菌对18种抗菌药的敏感性。结果发现,同一有机农场中,鸡源大肠杆菌与猪源大肠杆菌在耐药种类及耐药率上均呈现相似规律,对头孢他啶、头孢喹肟、头孢噻肟、头孢西丁、阿米卡星、安普霉素、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考、氯霉素、亚胺培南、环丙沙星、喹乙醇等较敏感(鸡0~21.8%,猪0~14.3%),对氨苄西林、链霉素呈现轻度耐药(鸡29.1%~38.2%,猪23.8%~27.0%),对复方新诺明、四环素、多西环素呈现较严重耐药(鸡45.5%、76.4%和72.7%,猪50.8%、81.0%和68.3%)。鸡源大肠杆菌中3耐及3耐以上的菌株占56.4%,猪源大肠杆菌占47.6%。结果表明有机养殖模式下鸡、猪源大肠杆菌耐药率相对较低,多重耐药现象存在但相对轻微,对个别临床常用抗菌药耐药率虽较严重但比常规养殖场低。由于目前国内大部分学者致力于研究常规养殖方式下细菌耐药情况,本研究很好地填补了有机养殖模式下畜禽大肠杆菌耐药性研究的空白。     

牛至油博落回口服液的研制及体外抑菌活性测定

【目的】 研制牛至油博落回口服液, 并测定其体外抑菌活性及其主要成分的联合抑菌效果, 为临床用药提供理论依据。【方法】 通过预试验和Box-Behnken响应面法优化处方; 采用高效液相色谱法测定口服液主要成分含量; 采用滤纸片法测定口服液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌的抑菌圈直径; 采用试管二倍稀释法测定口服液、5%牛至油溶液及1%博落回溶液对4种细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC); 采用微量棋盘稀释法对5%牛至油溶液与1%博落回溶液进行体外联合药敏试验。【结果】 牛至油博落回口服液最优配方为: 5%牛至油, 1%博落回提取物, 25%增溶剂聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油, 0.02%抗氧化剂2, 6-二叔丁基对甲酚(BHT), 余量为水。口服液中香芹酚的含量为42.59 mg/mL, 血根碱含量为6.51 mg/mL。口服液对4种菌的抑菌圈直径分别为16.9、16.4、23.7和17.0 mm, MIC分别为3.125、3.125、1.5625和1.5625 μL/mL, MBC分别为12.5、6.25、3.125和3.125 μL/mL; 5%牛至油溶液对4种菌的MIC分别为25、12.5、6.25和100 μL/mL, MBC分别为100、50、25和>200 μL/mL; 1%博落回溶液对4种菌的MIC分别为6.25、12.5、3.125和6.25 μL/mL, MBC分别为50、25、6.25和25 μL/mL。联合药敏试验表明, 二者联合用药对大肠杆菌、沙门氏菌起相加作用, 对金黄色葡萄球菌无作用, 对粪链球菌为协同作用。【结论】 试验制备了牛至油博落回口服溶液剂, 该制剂对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌具有良好抑制作用。     

山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及毒力基因分析

本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料,利用四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）进行沙门氏菌选择增菌,并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定,利用沙门氏菌属及血清型特异性引物对分离菌进行PCR扩增鉴定,并利用PCR方法检测分离菌中33种毒力基因分布。结果显示,分离菌在LB固体培养基和麦康凯培养基上呈无色半透明、光滑且边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌。生化试验、培养基菌落形态鉴定、沙门氏菌属及血清型特异性引物PCR扩增结果显示,共分离到25株鸡源沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌9株,鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌各8株。毒力基因检测结果显示,33种毒力基因在25株分离菌中均有检出,其中20种毒力岛基因（invJ、virK、sopA、mogA、hilA、hisJ、ssaB、ssaQ、ssiD、misL、mgtC、orf319、siiE、siiD、bcfA、pipC、sopB、araB、spoB和avrA基因）、肠毒素基因（stn基因）及菌毛毒力基因（fimA基因）检出率均为100%;2种毒力岛基因（sipA和sodC基因）及4种毒力质粒基因（spvA、spvC、spvD和spvR基因）检出率均为96%,spoE基因检出率为68%,fliC基因检出率为36%,gipA与spvB基因检出率均为32%,sseL基因检出率为4%;25株鸡源沙门氏菌中,分别携带31种（8株）、30种（1株）、29种（15株）和24种（1株）毒力基因;毒力基因gipA和spvB只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,且在鼠伤寒沙门氏菌中检出率为100%。本研究结果表明,山东地区鸡源沙门氏菌主要为肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,分离菌皆携带多种毒力基因,其中gipA和spvB毒力基因只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,可作为鼠伤寒沙门氏菌鉴定的备选基因之一。     

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12：i：1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。