虾青素对小鼠早期胚胎发育及相关基因表达的影响

试验旨在研究培养液中添加虾青素（AX）对小鼠胚胎体外发育和相关基因表达的影响。试验选用23~25 g的ICR系雌性小鼠,利用超数排卵,取卵母细胞进行体外受精,受精1 h后将受精卵随机分组、分别移入浓度为0、5、10、25、50 μmol/L的虾青素培养液中进行体外发育培养,在培养24和96 h后分别观察并统计各组的卵裂率和囊胚率;体外培养至96 h后,对囊胚进行细胞计数,统计囊胚细胞数差异;提取各组囊胚总RNA,利用实时荧光定量PCR技术对各组胚胎的TGF-β和Bcl-2基因的相对表达量进行检测。结果显示,添加10 μmol/L虾青素能够改善小鼠胚胎体外发育环境且显著提高胚胎卵裂率和囊胚率（P<0.05）;显著提高囊胚的细胞数（P<0.05）;极显著提高TGF-β基因表达量（P<0.01）。结果表明,添加10 μmol/L虾青素有利于小鼠胚胎体外发育,可用于改善小鼠胚胎体外发育环境;TGF-β和Bcl-2基因很可能参与了胚胎发育过程中的相关调控。     

哺乳动物早期胚胎发育的基因表达

哺乳动物早期胚胎发育的基因表达是一个复杂而有序的过程.不同作用的基因控制和推动了各发育阶段,由特定的mRNA翻译成起一定作用的蛋白质,表现出了胚胎的各个部分和各个阶段具有不同的功能,并推动发育的不断进展.     

E-钙粘蛋白抗体对小鼠早期胚胎发育的影响

旨在研究E-钙粘蛋白抗体(ECCD-1)对小鼠早期胚胎体内外发育的影响.在体外培养小鼠8-细胞胚胎的培养液中,分别添加不同浓度的ECCD-1,通过胚胎形态观察、碱性磷酸酶染色、多能性因子免疫染色、体外贴壁培养、嵌合体制备以及体内移植试验检测ECCD-1对小鼠胚胎发育能力的影响.结果表明,ECCD-1抗体延迟胚胎致密化和囊胚腔形成,但内细胞团并未受到影响,胚胎碱性磷酸酶和SSEA-1、Oct-4、Sox2、Nanog 4种多能性因子的免疫染色都呈阳性,此外,ECCD-1抗体也不影响胚胎的体外贴壁生长、体内移植着床以及嵌合体的制备.这些数据表明,ECCD-1抗体延迟胚胎致密化但并不影响胚胎的体内外发育能力.     

交感神经对小鼠排卵和早期胚胎发育的影响

为了研究交感神经对妊娠的调控作用,给小鼠连续5 d腹腔注射交感神经化学损毁剂——6-OHDA(100 mg/kg),将交感神经化学性损毁,然后通过阴道涂片法和显微解剖的方法,对交感神经损毁后小鼠发情周期的变化、排卵的数量和妊娠发生后胚胎数量及大小进行了观察。结果表明:交感神经化学损毁后发情周期和排卵的数量没有明显的变化,但是胚胎的数量明显减少,小鼠胚胎数量在妊娠第7天比对照组同期减少了64.4%,在妊娠第9天比对照组同期减少了69.9%;对胚胎的大小进行测量时发现,交感神经损毁组在妊娠第7天与对照组同期相比,长径减小了0.51 mm,短径减小了0.56 mm;妊娠第9天时,交感神经损毁组与对照组同期相比,长径减小了0.37 mm,短径减小了0.47 mm,差异显著(P<0.05)。说明交感神经主要影响胚胎的早期发育,对发情周期和排卵没有明显的影响。     

饲料中添加虾青素对南美白对虾生长、成活率及虾体内虾青素含量的影响

本试验在南美白对虾幼虾(初均重5.4 mg)饲料中添加0、50、100、150、200 mg/kg的虾青素,研究其对幼虾生长、成活率、饲料转化率的影响以及虾青素在对虾体内的含量、虾青素在饲料中的稳定性。实验结果表明,添加虾青素的各试验组增重率和特定生长率要显著高于没有添加虾青素的对照组(P0.05);虾青素试验组对虾的成活率也均高于对照组,其中200mg/kg的虾青素组要显著高于对照组(P0.05);对虾的饲料转化率随着虾青素添加量的增加而升高。试验结束后,对虾体内虾青素的含量随着饲料中虾青素的增加而升高,显著高于对照组(P0.05)。同时,含虾青素的饲料室温放置3个月后,虾青素保留率分别为67.17%、74.38%、79.03%、78.29%。本试验认为在饲料中添加100~150 mg/kg的虾青素可以显著提高南美白对虾幼虾的生长率、成活率和饲料转化率,增加对虾体内虾青素的含量,进而提高对虾的抗应激能力。     

乙酸钠对小鼠摄食及摄食相关基因表达的影响

旨在通过小鼠腹腔注射乙酸钠溶液,探究其对小鼠摄食活动及摄食调控相关基因表达的影响.选取60只昆明小鼠,随机分为3组,分别为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组,每组20只.试验期间对照组每天注射生理盐水,试验组分别注射0.3,0.5 kg/L的乙酸钠.每7d测定小鼠体质量和采食量,并从各组随机选取5只小鼠,观测小肠绒毛和肝脏发育...     

虾青素对氧化应激小鼠肝原代细胞的保护作用

试验旨在研究虾青素对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠肝原代细胞产生氧化应激的影响。采用改进的原位二步灌流法提取ICR小鼠肝原代细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、活细胞率的变化,生物化学法测定细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的活性变化;荧光定量PCR测定CAT、γ-GCS催化亚基(GCLC)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA相对表达量的变化,ELISA法检测细胞中Keap1、Nrf2蛋白的变化。结果表明:虾青素能够降低H_2O_2诱导小鼠肝原代细胞产生氧化应激的细胞凋亡率、MDA含量、Nrf2和Keap1 mRNA相对表达量(P<0.05),提升活细胞率、CAT和γ-GCS活性(P<0.05)、CAT和GCLC的mRNA相对表达量(P<0.05),抑制Nrf2蛋白及Keap1蛋白的表达(P<0.05)。虾青素能够促进相关抗氧化酶的活性,抑制Nrf2蛋白及Keap1蛋白表达进而抑制Keap1-Nrf2-ARE信号通路的激活。     

虾青素对小鼠结肠急性氧化损伤的保护作用

试验旨在研究虾青素对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性结肠炎及氧化应激的影响。选择 6 周龄健康雄性 ICR 小鼠 32 只,随机分为 4 组,其中对照组和 LPS 组小鼠连续 15 d 灌胃橄榄油,虾青素组和虾青素保护组小鼠连续 15 d 灌胃 50 mg/kg 虾青素,15 d 后对照组和虾青素组腹腔注射生理盐水,LPS 组和虾青素保护组腹腔注射 1 mg/kg LPS,3 h 后处死,采集血液及结肠组织。ELISA 和荧光定量 PCR 检测血清及结肠中炎性因子和抗氧化酶水平,生物化学法测定结肠中氧化水平,Western blot 检测结肠中 p-NF-κB p65 蛋白相对表达量,HE 染色观察结肠病理形态学变化。结果表明:与对照组相比,LPS 组小鼠血清和结肠组织中炎症因子的表达及 NF-κB p65 蛋白的活化均显著升高(P<0.05),组织抗氧化水平低(P<0.05),结肠黏膜损伤严重;与 LPS 组相比,保护组小鼠血清和结肠组织中炎症因子表达及 NF-κB p65 蛋白的活化均显著降低(P<0.05),组织抗氧化水平高(P<0.05),且结肠黏膜损伤程度低。虾青素可保护小鼠结肠黏膜结构,通过抑制 NF-κB信号通路降低机体中炎性因子的分泌,提高组织抗氧化水平,缓解 LPS 引起的急性结肠损伤。     

昆明小鼠早期胚胎发育时程

以昆明种小鼠为对象,在严格控光条件下,对交配后阴道栓形成时间、排卵时间、精子入卵与原核形成时间以及2-细胞至囊胚的发育时程等进行了系统研究。结果如下:(1)从注射hCG 当天(0 d)21:00(hCG后6 h)至次日(第1 天)1:00(hCG 后10 h),有84.2% 的超排小鼠形成阴道栓;(2)大部分小鼠(66% ～100% )排卵从hCG后第1 天2:00(hCG 后11 h)开始,至3:00～4:00(hCG后12～13 h)结束;(3)从hCG 后第1 天7:00(hCG后16 h)至11:00(hCG 后20 h),小鼠卵受精率为5.6% ～82.4% ;(4)从hCG后第1 天7:00(hCG 后16 h)至11:00(hCG 后20 h),原核形成率为4.4% ～67.5% ;(5)从hCG 后第1 天21:00(hCG 后30 h)至第2 天1:00(hCG后34 h),2-细胞形成率为14.9% ～83.1% ;hCG后第2 天19:00(hCG后52 h)至23:00(hCG后56 h),4-细胞形成率为12.9% ～85.7% ;hCG 后第3 天6:00(hCG后63 h)至10:00(hCG 后67 h),8-细胞形率为12.8% ～88.2% ;(6)从hCG 后第3 天10:00(hCG 后67 h)至24:00(hCG后81 h),8～16 细胞(早期桑葚胚)形成率由100% 下降到42.9% ;从hCG 后第3 天24:00(hCG 后81 h)至第4 天4:00(hCG后85 h),17～32 细胞(晚期桑葚胚)形成率由57.1% 增加到90.0% ;(7)从hCG 后第4 天6:00(hCG后87 h)至8:00(hCG后89 h),囊胚形成率从11.4% 上升到60.9% 。     

L-苯丙氨酸对小鼠妊娠早期胚胎发育及子宫局部肥大细胞的影响

为了研究交感神经对小鼠胚胎着床和发育的作用机制,本文筛选出合适的L-苯丙氨酸浓度(320 mg/kg体重),处理孕鼠,观察胚胎着床和发育,通过甲苯胺蓝染色检测子宫局部肥大细胞的变化.研究结果显示,320 mg/kg体重L-苯丙氨酸能显著降低胚胎着床数目,分别下降了45％ (E7)和58％(E9),并且显著延缓胚胎的发育;与对照组相比,着床后子宫局部肥大细胞数目显著降低,分别在E5～E9降低了36.62％、64.59％和23.30％,差异显著.由本研究结果可以推断一定浓度的L-苯丙氨酸可以激活交感神经,影响妊娠早期子宫局部肥大细胞数量,从而改变子宫局部微环境,影响胚胎着床和发育.     

哺乳动物早期胚胎发育的基因表达及其模式

哺乳动物早期胚胎发育的基因表达及其模式刘红林（南京农业大学动物科技学院，南京２１００９５）范必勤（江苏省农科院）哺乳动物胚胎学用以阐明胚胎发育过程中基因表达活性规律的基本实验方法主要有：（１）直接或间接测量ＲＮＡ的转录；（２）分析蛋白质合成；（３）检...     

影响小鼠早期胚胎发育的几个重要因素

以Ｗｈｉｔｅｎ氏液为基本培养液,研究了卵丘细胞、谷氨酰胺及不同浓度的葡萄糖对ＨＣＧ注射后１７～１８ｈ、２５～２７ｈ和３６～３８ｈ昆明小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明,不论葡萄糖或谷氨酰胺存在与否,卵丘细胞与受精卵的共同培养对胚胎克服体外发育阻断无明显效果。葡萄糖能抑制１－细胞胚胎发育,促进４－细胞以后的胚胎发育。谷氨酰胺是小鼠早期胚胎发育的良好能源物质,可使９６％（３０８／３２１）的体外发育到２－细胞的胚胎克服阻断而继续发育到４－细胞。谷氨酰胺与葡萄糖联合使用,则可使小鼠受精卵的囊胚发育率达５７．５％（２２９／３９８）。ＨＣＧ注射后３６～３８ｈ的小鼠胚胎能利用葡萄糖。     

虾青素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本研究旨在探讨虾青素(astaxanthin, Ast)对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活胚胎发育的影响,为进一步优化猪卵母细胞体外成熟培养体系提供参考。首先,将GV期猪卵母细胞培养在添加有不同浓度虾青素(0,5,10,20,40μmol/L)的体外成熟液中,40～44 h后统计第一极体排出率。结果显示与对照组相比,各处理组卵母细胞的第一极体排出率均显著升高(P<0.05),其中10μmol/L处理组卵母细胞的第一极体排出率显著高于5,20,40μmol/L处理组(P<0.05)。随后对MⅡ期卵母细胞进行孤雌激活处理,结果发现10μmol/L和20μmol/L处理组的卵裂率和囊胚发育率显著高于对照组(P<0.05),且10μmol/L处理组囊胚发育率显著高于20μmol/L处理组(P<0.05)。最后,检测虾青素处理后MⅡ期卵母细胞的活性氧水平、丙二醛及谷胱甘肽的含量,以及整个胚胎发育阶段中抗氧化酶相关基因SOD1和GPX4的表达变化,发现GV期卵母细胞经10μmol/L虾青素处理后,孤雌激活囊胚的细胞数极显著升高(P<0.01);而MⅡ期卵母细胞的活性氧水平...     

塑化剂DEHP对雄性小鼠精液品质及相关基因表达的影响

为了探讨塑化剂DEHP对雄性生殖系统的影响,本研究通过腹腔注射DEHP的方式使新出生雄性小鼠在发育过程中接触DEHP,利用HE染色、染色体免疫荧光分析和RT-PCR的方法,分析了DEHP对小鼠生殖系统的影响。结果显示:处理组小鼠睾丸曲细精管的直径明显缩小;经DEHP处理后,小鼠精子的数量显著降低,且畸形率显著升高;与精液品质相关的基因表达水平显著降低;但是处理组生精细胞染色体的同源重组水平基本没有变化。由此表明,本研究的DEHP浓度影响了雄性小鼠生殖系统的发育和健康。     

基因表达差异对牛胚胎发育潜能的影响

随着牛胚胎体外生产(IVP)技术的不断成熟,体外胚胎生产在一些国家已进入商业化运营阶段.但与体内胚胎相比其移植受体妊娠率、产犊率及胎儿的后天发育能力均较差.因此,开发一种既可靠又实用的检测胚胎发育潜能的技术显得尤为重要.应用实时荧光定量PCR技术检测早期胚胎基因表达,通过分析mRNA的表达丰度来评价卵母细胞成熟情况和胚...     

虾青素复合添加剂对肉鸡生长性能及肉质的影响

旨在研究饲粮中添加虾青素复合添加剂对肉鸡生长性能及鸡肉品质的影响。选用1日龄爱拔益加(AA)肉鸡500只,随机分为4组,每组设5个重复,每个重复25只鸡,其中:Ⅰ组为对照组,Ⅱ~Ⅳ组为试验组,分别添加虾青素复合添加剂0、0.5%、1%和1.5%,试验期42 d。结果:试验Ⅲ组和Ⅳ组的平均日增重、饲料转化率显著高于对照组(P0.05),而Ⅲ和Ⅳ组之间差异不显著(P0.05)。各试验组与对照组相比,肌肉亮度(L*)、红度(a*)显著提高(P0.05),黄度(b*)、滴水损失率、蒸煮损失率和剪切力差异不显著(P0.05),Ⅲ和Ⅳ组p H24h值下降速度显著降低(P0.05)。结果提示,肉鸡饲粮中添加虾青素复合添加剂可以提高其生长性能和改善鸡肉品质,添加量以1%为宜。     

内皮素3对小鼠黑色素沉着相关基因表达的影响

试验旨在探究内皮素3(endothelin 3,EDN3)在不同毛囊时期小鼠皮肤中是否存在差异表达及其对黑色素细胞黑色素沉着相关基因表达的影响。通过RT-PCR技术对EDN3、EDNRB在不同毛囊时期小鼠皮肤的表达情况进行定量分析发现,EDN3和EDNRB在小鼠不同毛囊时期皮肤样品中均有表达,在毛囊生长初期和中期小鼠皮肤中EDN3 mRNA表达量是末期的2.18倍(P0.05)和1.15倍(P0.05),毛囊生长初期和中期EDNRB mRNA表达量是末期的16.8倍(P0.01)和9.9倍(P0.01)。为了进一步揭示EDN3在黑色素细胞色素沉着中的重要作用,通过细胞转染技术使小鼠黑色素细胞过表达EDN3并测定其黑色素含量及色素沉着相关基因的表达水平发现,与空载组相比,体外转染EDN3的黑色素细胞黑色素含量明显增加。此外,MITF mRNA显著降低(P0.05);TYR、TYRP2、EDNRB、c-Kit和EDN1 mRNA显著升高2.04倍(P0.05)、1.44倍(P0.05)、1.41倍(P0.05)、5.21倍(P0.01)和3.27倍(P0.01)。MITF蛋白水平显著降低(P0.05),TYR、TYRP2、EDNRB和c-Kit蛋白水平显著升高1.48倍(P0.01)、4.61倍(P0.01)、1.27倍(P0.05)和2.64倍(P0.01)。综上所述,EDN3在不同毛囊时期小鼠皮肤中均可有效表达,且表达量存在显著差异。黑色素细胞中过量表达EDN3,使色素沉着相关基因的表达量及黑色素含量增加。