一株草鱼维氏气单胞菌的分离鉴定及毒力基因分析

为了鉴定贵州芩巩县某养殖场草鱼发病死亡的病原,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验、动物回归试验、16S rDNA与gyr B基因测序及系统分析进行鉴定。结果显示,本研究从发病草鱼体内分离到1株致病菌GZQG2019,分离菌在培养基中呈圆形、表面湿润光滑、边缘整齐半透明的灰白色菌落,菌落周围呈现β-溶血环;革兰氏镜检显示,分离菌呈两端钝圆短小阴性杆菌;16S rDNA、gyr B基因序列分析显示,分离菌与维氏气单胞菌聚为一支,同源性均在99%以上;药敏试验结果显示,在使用的20种抗菌药物中,该菌对四环素、丁胺卡那、多黏菌素B和头孢曲松等10种药物敏感,对苯唑西林、青霉素、阿莫西林和庆大霉素等8种药物中度敏感,对头孢氨苄、复方新诺明2种药物耐药;动物回归试验显示,该菌对健康草鱼具有强致病性;10种毒力基因扩增结果显示,分离菌携带气溶素、热不稳定性肠毒素、溶血素、核酶、丝氨酸蛋白酶、弹性蛋白酶和酯酶7种毒力基因。本试验成功分离到1株草鱼源维氏气单胞菌,具有较强毒力,且携带多种毒力因子;对四环素、丁胺卡那等药物敏感,对四环素、丁胺卡那等耐药,为维氏气单胞菌病临床用药提供参考依据。     

白缘(鱼央)维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

从发病白缘(鱼央)病变组织分离纯化1株G^-细菌,经过染色镜检、生理生化试验、16S rDNA序列分析和动物试验鉴定为气单胞菌属维氏气单胞菌,并编号为LA201001。采用Kirby-Bauer法检测了维氏气单胞菌分离菌株对30种常用抗菌药敏感性。结果显示,维氏气单胞菌分离株LA201001对小鼠和白缘(鱼央)具有致病性,且耐药性较强,对强力霉素、四环素、复方阿莫西林、氨苄青霉素、头孢氨苄、头孢噻吩、卡那霉素等21种受试药物耐受,仅对庆大霉素、丁胺卡那、诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星5种受试药物敏感。     

3株维氏气单胞菌耐药性及毒力基因的比较

为探究不同地区的维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）耐药性及毒力基因是否存在区别,本研究从生长形态、生化试验、药敏试验、人工感染试验、16S rDNA基因测序同源性分析及毒力基因等方面比较了草鱼源菌株GZCY2019、杂交鲟源菌株GZXY2018及斑点叉尾鮰源菌株GZBD2017的差异。结果显示,3株不同源维氏气单胞菌在鲜血平板上均为圆形、表面湿润光滑、边缘整齐半透明的灰白色菌落,菌落周围均有β溶血环;革兰氏染色镜检均为两端钝圆短小阴性杆菌;药敏试验显示,3株菌对丁胺卡那、多西环素等药物均敏感,而对复方新诺明、头孢他啶、多黏菌素B等药物均中度敏感,对其他药物则表现出不同程度的敏感性或者耐药性;人工感染试验显示,菌株GZCY2019与GZBD2017对小鼠累计死亡率为100%,菌株GZXY2018的累计死亡率为80%;16S rDNA同源性分析显示,菌株GZCY2019与菌株GZBD2017同源性为99.9%,二者与菌株GZXY2018同源性均为97.1%;毒力基因检测结果显示,3株菌均携带热不稳定性肠毒素（Alt）、溶血素（hlyA）与鞭毛（Fla）等毒力基因,而对细胞毒性肠毒素（Act）及其热稳定性肠毒素（Ast）毒力基因的携带则表现不同。本研究通过不同源维氏气单胞菌的对比发现,3株菌在生长形态、染色镜检结果、生化结果上基本相似,但耐药性和毒力基因的携带存在较大差异。     

斑点叉尾鮰源致病性维氏气单胞菌的分离与生物学特性鉴定

为鉴定一起致斑点叉尾鮰突然发病死亡的病原，本研究从发病斑点叉尾鮰中分离到1株致病菌GZTL2017，通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、动物回归试验、生化试验、16S rDNA序列分析、部分毒力基因检测和药敏试验进行鉴定。临床解剖观察结果显示，患病斑点叉尾鮰呈现体表溃疡、鳍根部出血、烂腮、肠管充血等症状；分离菌在培养基中呈现表面湿润凸起、边缘光滑半透明、形态均一的乳白色菌落；革兰氏染色镜检显示，分离菌为单个或成双存在、两端钝圆的短直阴性杆菌；动物回归试验显示，该分离菌有较强的致病性；生化试验结果显示，分离菌具有运动性，且氧化酶、V-P、赖氨酸脱氢酶等反应阳性，精氨酸双水解酶、硫化氢等反应阴性；16S rDNA基因序列系统进化树显示，该菌与维氏气单胞菌聚为一支，同源性均>99%；毒力基因检测结果显示，该菌能检出气溶素基因（Aer）、黏附素基因（Aha）、外膜蛋白基因（OmpA）3种毒力基因；药敏试验结果显示，该菌对氟苯尼考、强力霉素、氧氟沙星等14种药物敏感；对诺氟沙星、新霉素、万古霉素等7种药物中度敏感；对麦迪霉素、苯唑西林、头孢拉定等8种药物耐药，且对氟苯尼考、强力霉素的药物最小抑菌浓度分别为1和2 μg/mL。本试验成功分离到1株维氏气单胞菌，为斑点叉尾鮰维氏气单胞菌病防治提供参考依据。     

1株草龟维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏谱分析

旨在确定河北昌黎县某花鸟鱼店宠物草龟发病死亡的病因,笔者从发病草龟体内分离纯化出1株优势菌CLW-1,通过解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、生化鉴定和16S rDNA基因测序对其分析鉴定,并通过药物敏感性测试检测菌株的耐药性,通过斑马鱼接种试验和毒力基因检测其致病性。结果显示,该菌在血琼脂平板形成湿润、表面光滑、呈β溶血的灰白色菌落,在RS琼脂培养基上长出光滑湿润的黄色菌落;革兰染色镜检为阴性短小球杆菌;16S rDNA基因序列同源性分析表明,分离菌株CLW-1与维氏气单胞菌为同一族,相似性均达99%以上;斑马鱼接种试验结果显示,该菌具有较高的致病力,其LD₅₀为1.26×10⁶CFU;毒力基因扩增结果表明,分离菌株CLW-1具有aerA、Exu、Lip和Ser毒力基因;药敏试验结果显示,分离菌株CLW-1对哌拉西林、头孢唑林和恩诺沙星等敏感;对呋喃唑酮、苯唑西林和红霉素等中敏;对麦迪霉素、克林霉素和万古霉素等耐药。通过试验结果确定此分离菌株CLW-1为维氏气单胞菌,携带毒力基因,具有较高致病力,应用对应的抗生素治疗效果较好,为维氏气单胞菌病的防治奠定基础。     

斑点叉尾鮰源致病性维氏气单胞菌的分离与生物学特性鉴定

为鉴定一起致斑点叉尾鮰突然发病死亡的病原,本研究从发病斑点叉尾鮰中分离到1株致病菌GZTL2017,通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、动物回归试验、生化试验、16SrDNA序列分析、部分毒力基因检测和药敏试验进行鉴定。临床解剖观察结果显示,患病斑点叉尾鮰呈现体表溃疡、鳍根部出血、烂腮、肠管充血等症状;分离菌在培养基中呈现表面湿润凸起、边缘光滑半透明、形态均一的乳白色菌落;革兰氏染色镜检显示,分离菌为单个或成双存在、两端钝圆的短直阴性杆菌;动物回归试验显示,该分离菌有较强的致病性;生化试验结果显示,分离菌具有运动性,且氧化酶、V-P、赖氨酸脱氢酶等反应阳性,精氨酸双水解酶、硫化氢等反应阴性;16SrDNA基因序列系统进化树显示,该菌与维氏气单胞菌聚为一支,同源性均99%;毒力基因检测结果显示,该菌能检出气溶素基因(Aer)、黏附素基因(Aha)、外膜蛋白基因(OmpA)3种毒力基因;药敏试验结果显示,该菌对氟苯尼考、强力霉素、氧氟沙星等14种药物敏感;对诺氟沙星、新霉素、万古霉素等7种药物中度敏感;对麦迪霉素、苯唑西林、头孢拉定等8种药物耐药,且对氟苯尼考、强力霉素的药物最小抑菌浓度分别为1和2μg/mL。本试验成功分离到1株维氏气单胞菌,为斑点叉尾鮰维氏气单胞菌病防治提供参考依据。     

杂交鲟维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析

试验旨在对贵州省某养鱼场发病杂交鲟体内分离的优势菌株进行鉴定、致病力探究及耐药性分析。本试验通过革兰染色、生化鉴定、细菌16S rDNA基因分析、动物回归试验、药敏试验、部分毒力基因检测与耐药基因检测。结果显示:分离菌为革兰阴性短杆菌,细菌16S rDNA扩增测序与比对,得大小为1 477 bp的片段,其片段基因序列与GenBank中的维氏气单胞菌序列相似度达99.00%,药敏试验显示:分离菌对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感,对四环素、磺胺异唑、苯唑西林药物出现耐药,耐药基因检测显示:分离菌含有耐磺胺基因(Sul1,sul2)、Ⅰ类整合子(Intl1)3种耐药基因,毒力基因检测显示:分离菌含有气溶素(Aer)和粘附素(Aha)两种毒力基因。综合本试验结果,分离菌为维氏气单胞菌(A.veronii),含有毒力基因,并对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。本试验对贵州地区鲟发病流行的病因做出准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防与合理用药提供依据。     

花斑副沙鳅源致病性维氏气单胞菌的分离、鉴定及药物敏感性分析

为了对引起养殖花斑副沙鳅(Parabotia fasciata Dabry)幼鳅死亡的分离菌株(XQS1)进行鉴定,本研究对其进行了生理生化分析、16S rRNA基因和gyr B基因序列测定及系统进化树分析。结果显示,该致病菌与维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)形态特征以及生理生化特性相似,通过对其16S rRNA基因和gyr B基因序列比对及进化树分析,显示该菌株与GenBank中维氏气单胞菌相关基因序列的一致性均在98%以上,而且在系统进化树中与维氏气单胞菌聚为一簇,综合以上结果确定该致病菌为维氏气单胞菌。溶血性分析和毒力基因检测结果显示,菌株XQS1能够使兔血平板呈β溶血,并携带了act、alt、aer、hlyA毒力基因,进一步证实了该菌株具有较强的致病性。药敏结果显示,该菌株对多西环素、诺氟沙星、氧氟沙星、氟苯尼考等药物敏感,而对其它药物中度敏感或耐药。本研究首次报道了维氏气单胞菌对人工养殖花斑副沙鳅的危害,并为临床上该病的防治提供了药物参考,对花斑副沙鳅产业化养殖具有重要意义。     

瓯江彩鲤简达气单胞菌的16S rDNA分子鉴定与药敏分析

为了研究分离自患病瓯江彩鲤的1株气单胞菌(HX201006-2)的分类地位与药敏特性,试验采用细菌的16S rDNA基因的分类鉴定与生化方法对该分离菌进行研究,通过NCBI的Blast搜索同源序列,应用MegAlign软件进行序列比对并构建系统发育树。结果表明:该分离菌的16S rDNA(GenBank登录号为JF713702.1)基因,与简达气单胞菌类聚,初步确定该分离菌株的分类地位,结合分离菌的形态、生理生化特征,鉴定该分离菌为简达气单胞菌;该分离菌对头孢噻吩、丁胺卡那、庆大霉素等12种药物敏感;对新霉素、利福平、红霉素3种药物中度敏感;对头孢拉定、多黏菌素B和O/129等7种药物存在不同程度的耐药性。     

中华条颈龟致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为明确一起致中华条颈龟发病死亡的病原,本研究从患病的中华条颈龟体内分离出一株优势菌株,通过对分离菌的培养、革兰氏染色观察、生化试验、16S rRNA序列比对分析、动物攻毒试验和药物敏感试验对其进行鉴定。结果显示,分离菌在普通营养琼脂培养基上呈灰白色、不透明、圆形、边缘整齐、表面湿润且光滑、中间凸起的菌落;在SS琼脂培养基上形成浅橘红色、圆形、光滑的菌落;革兰氏染色结果显示,分离菌为革兰氏阴性菌,短杆状,菌体两端钝圆,单个或成对排列,并将该分离菌命名为HNJ002;生化试验结果显示,该菌具有运动性,且葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、果糖、精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶、D-葡萄糖产酸、D-葡萄糖产气、明胶水解、氧化酶、吲哚、V-P试验反应为阳性;进化树分析显示,其与GenBank中登录的维氏气单胞菌聚为一簇,且同源性达99%以上;动物攻毒试验显示,该菌对中华条颈龟有较强的致病性;药物敏感试验显示,其对多数抗菌药较为敏感,对罗红霉素、妥布霉素、新霉素中度敏感,仅对少数抗菌药物如氨苄西林、青霉素及克林霉素耐药。研究结果可为防治中华条颈龟维氏气单胞菌感染提供参考依据。     

中华条颈龟致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

为明确一起致中华条颈龟发病死亡的病原，本研究从患病的中华条颈龟体内分离出一株优势菌株，通过对分离菌的培养、革兰氏染色观察、生化试验、16S rRNA序列比对分析、动物攻毒试验和药物敏感试验对其进行鉴定。结果显示，分离菌在普通营养琼脂培养基上呈灰白色、不透明、圆形、边缘整齐、表面湿润且光滑、中间凸起的菌落；在SS琼脂培养基上形成浅橘红色、圆形、光滑的菌落；革兰氏染色结果显示，分离菌为革兰氏阴性菌，短杆状，菌体两端钝圆，单个或成对排列，并将该分离菌命名为HNJ002；生化试验结果显示，该菌具有运动性，且葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、果糖、精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶、D-葡萄糖产酸、D-葡萄糖产气、明胶水解、氧化酶、吲哚、V-P试验反应为阳性；进化树分析显示，其与GenBank中登录的维氏气单胞菌聚为一簇，且同源性达99%以上；动物攻毒试验显示，该菌对中华条颈龟有较强的致病性；药物敏感试验显示，其对多数抗菌药较为敏感，对罗红霉素、妥布霉素、新霉素中度敏感，仅对少数抗菌药物如氨苄西林、青霉素及克林霉素耐药。研究结果可为防治中华条颈龟维氏气单胞菌感染提供参考依据。     

中华草龟源维氏气单胞菌的分离及生物学特性鉴定

为了确定引起中华草龟(Chinemys reevesiis)死亡的病原菌并鉴定其生物学特性,从病死中华草龟病变肝脏组织分离得到1株病原菌,经生化鉴定,其为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),命名为CRQ1。采用斑马鱼(Brachydanio rerio)攻毒试验进行了该分离菌的致病性检验;采用PCR方法检测了该分离菌携带的毒力基因及耐药基因;采用K-B药敏纸片法检测其耐药性。结果显示:CRQ1株对斑马鱼的半数致死量(LD₅₀)为3.57×10⁷cfu/m L,携带aer A、act、aha、Ser、Exu、Lip、Hly、omp A和Lux S 9种毒力基因;分离菌对替米考星、环丙沙星和恩诺沙星等9种药物敏感,对阿米卡星、链霉素和磺胺间甲氧嘧啶等8种药物中度敏感,对新斯的明耐药;该分离菌携带四环素类耐药基因tet(A)、tet(E),氟喹诺酮类耐药基因oqx A、gyr A、gyr B、par C、par E,氨基糖苷类耐药基因aac2、aac(6)-Ib、aad B、aac4,磺胺类耐药基因sul-1,大环内酯类耐药基因er...     

黄喉拟水龟致病菌-维氏气单胞菌的鉴定及药敏试验

对患病黄喉拟水龟(Mauremys mutica)进行细菌学检查和分离,对分离到1株革兰阴性细菌进行形态特征、理化特征、VITEK 2 ZOMPACT 30自动微生物鉴定系统鉴定、结合16S rDNA序列的分子鉴定,并构建系统发育树;进行人工感染试验及药物敏感性试验。结果分离到1株优势菌,根据此株分离菌的形态特征、理化特征、自动微生物鉴定系统鉴定、结合16S rDNA序列测定与系统发育树分析结果,判定其为气单胞菌属的维氏气单胞菌。此菌对供试健康黄喉拟水龟和小鼠有较强的致病作用,对供试20种抗菌药物中的头孢吡肟、阿米卡星、氧氟沙星、米诺环素高度敏感;对洛美沙星、恩诺沙星、氯霉素等3种中度敏感;对头孢噻吩、环丙沙星等13种表现耐药。表明所检出的维氏气单胞菌,是导致黄喉拟水龟以出血和腹水为主要病理特征的致病菌。     

中华鳖出血性肠道坏死症病原及其药敏性

从中华鳖出血性肠道坏死症患病个体的血液、脾脏、肝脏及肠壁中共分离到 5株细菌 ,经人工感染、毒力测试 ,鉴定分离菌株为嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila)、豚鼠气单胞菌 (A.Caviae)和类志贺邻单胞菌 (Plesiomonasshigelloides)。药敏试验结果表明 ,此 3种致病菌对新霉素、丁胺卡那、呋喃妥因均高度敏感。     

斑点叉尾鮰套肠病病原嗜水气单胞菌的分离与鉴定

为确定疑似细菌感染的斑点叉尾鮰病原,本试验对临床病例进行细菌分离培养、生物化学鉴定和分子生物学鉴定、动物回归试验和病原菌药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性杆菌,菌落形态和生化特性与嗜水气单胞菌相符;16S rDNA检测与测序分析结果进一步证实分离菌确为嗜水气单胞菌;动物回归试验显示,分离菌能引起与临床自然病例相似的症状;药敏试验显示,分离菌对喹诺酮类药物敏感,对青霉素类、头孢类药物产生耐药性。结果表明,疑似细菌感染斑点叉尾鮰病例为嗜水气单胞菌感染,可选择喹诺酮类药物进行病例的预防治疗。     

草鱼致病性豚鼠气单胞菌的分离鉴定

为鉴定一株引起草鱼(Grass carp)发病的致病菌,并评估其对健康草鱼的致病性和相关药物的敏感性,本研究从患病草鱼病变器官中分离到一株优势菌,对该分离株的形态学、生长特性、生理生化特性、16S rRNA序列等进行鉴定。结果显示:该菌为革兰氏阴性菌,具有β溶血特性,在LB培养基中生长14 h可达7.41×10~9 cfu/mL,其理化特性与豚鼠气单胞菌基本符合,16S rRNA序列与参考菌株ATCC15468序列同源性在99.5%以上。基于16S rRNA序列进化分析显示,该分离株与豚鼠气单胞菌同属一个分支,亲缘关系较近。该分离菌株对草鱼的半数致死量(LD_(50))为4.928×10~6 cfu,对恩诺沙星、卡那霉素、磺胺甲氧嘧啶等药物比较敏感。综合判断该致病菌为豚鼠气单胞菌,命名为JS分离株,对草鱼具有较强致病性,对部分药物较为敏感。     

红鲫豚鼠气单胞菌的分离鉴定与毒力、耐药特性分析

为探究长春市某观赏鱼水产养殖基地患病红鲫的病原及特性,采用菌落特性、理化特征、16S rDNA以及gyrB测序结果相结合的方法对病鱼肝脏组织中分离得到的1株优势菌株CI0701进行分析鉴定;同时,进行回归动物试验、药物敏感性试验、毒力基因及耐药基因检测。鉴定结果表明,该菌与豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)聚类,且同源性高达99%以上;后续试验结果发现CI0701具有较强致病性,对红鲫和斑马鱼的半数致死量(LD₅₀)分别为4.3×10³、5.56×10 CFU/尾;该菌对红霉素、四环素、新霉素、氨苄西林、环丙沙星等12种药物耐药,属于多重耐药菌;携带溶血素(hly)、气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、细胞兴奋性肠毒素(alt)、脂肪酶(Lip)、丝氨酸蛋白酶(Ser)和鞭毛蛋白(fla)7种毒力基因;携带氨基糖苷类[ant(3″)-Ia]、四环素类(tetA)、大环内酯类(ermB)、喹诺酮类(qnrS)和β-内酰胺类(bla_TEM)5种耐药基因。本研究可以为红鲫携带豚鼠气单胞菌的分离鉴定以及治疗...     

框镜鲤致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

为鉴定一株致框镜鲤发病病原菌的生物学特性,本研究由濒死框镜鲤体内分离到一株细菌CY0806,对形态学、培养特性、理化特性等生物学特性以及药物敏感性和16S rRNA序列进行检测和分析。结果显示:细菌株CY0806为革兰氏阴性菌,其理化特性与维氏气单胞菌基本相同。系统进化树分析表明,细菌株CY0806序列与维氏气单胞菌模式株ATCC35624无差异,同源性为100%,因此,鉴定该菌株CY0806为维氏气单胞菌。药物敏感性试验结果显示,庆大霉素、新霉素等11种药物对细菌株CY0806有较好的抑菌效果。     

猪胸膜肺炎放线杆菌四川株的分离鉴定及药物敏感性试验

从四川某猪场疑似胸膜肺炎放线杆菌感染的病料中分离到一株革兰氏阴性小球杆菌。经染色镜检、生化试验、PCR检测、血清型检测,致病性试验和药敏试验,鉴定该菌为猪胸膜肺炎放线杆菌1型,且具有较强致病性。药敏试验结果表明,该菌对四环素、甲氧苄啶,以及链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那、新霉素等氨基糖苷类药物高度耐药,对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林和恩诺沙星、诺氟沙星等喹诺酮类受试药物敏感。     

一例牛源性金黄色葡萄球菌感染的确诊鉴定及生物学分析撤回

为有效防治牛的金黄色葡萄球菌病,无菌采集疑似葡萄球菌病例牛的肝、脾等组织,进行病原菌的分离鉴定、革兰氏形态染色镜检、生化特性试验以及致病性试验。通过对菌株基因测序,遗传进化树的构建,结果鉴定该菌为金黄色葡萄球菌。选用12种临床常用抗菌药物针对该病原菌进行药敏试验,其试验结果显示,分离菌株对阿莫西林、多西环素、多粘菌素、环丙沙星等耐药,对丁胺卡那高度敏感。本研究结果为进一步对金黄色葡萄球菌致病性及防治工作提供参考依据。