一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

5株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌活性研究

【目的】探究5株自筛解淀粉芽孢杆菌(YN-BA1、YN-BA2、YN-BA3、YN-BA4、YN-BA5)的生长曲线、pH和胆盐耐受性、抑菌活性和抗生素敏感性等特性,为将其开发成微生态制剂应用于养殖中提供理论依据。【方法】采用比浊法测定解淀粉芽孢杆菌生长曲线,将5株解淀粉芽孢杆菌分别接种于经盐酸配制成pH为2.0、3.0、4.0和7.0的LB肉汤中培养2 h和0.3%胆盐环境中培养5 h,以评价其在人工胃肠液中的耐受性;采用琼脂打孔法测定体外抑菌活性,采用KB纸片法测定抗生素敏感性。【结果】5株解淀粉芽孢杆菌在经过0～2 h的缓慢生长和6～8 h生长速度降低后,其生长量快速上升,进入对数生长期;36 h后生长量下降,进入衰退期。5株解淀粉芽孢杆菌均具有不同的耐酸、耐胆盐能力,其中YN-BA2菌株在pH 2.0、3.0、4.0存活率分别为42.10%、51.50%和74.67%,均高于另外4株菌;在0.3%胆盐处理5 h后,YN-BA2菌株存活率为51.00%,高于另外4株菌,表明YN-BA2菌株的耐受力最高。5株解淀粉芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌(YN-S1、YN-S2)、鸡白痢沙门菌(YN...     

预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化

试验旨在研究预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化。通过研究嗜酸乳杆菌、布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌不同浓度人工胃液、人工肠液、牛胆盐的耐受性及其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性,确定其生物学特性;以大肠杆菌K99为指示菌,研究3种益生菌不同配比对大肠杆菌K99的抑菌效果,以确定其最佳组合。结果表明:(1)3种益生菌在不同pH人工胃培养条件下都具有较好的耐受性,其中嗜酸乳杆菌、芽孢杆菌在pH为5时,存活率达到了118.75%、142.24%,布氏酵母菌对不同pH均表现成活率达到了100%以上。(2)3种益生菌在人工胃液中9 h存活率较高,与0 h的OD600相比,布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌存活率分别为108.7%、129.73%、96.37%。(3)在含有不同浓度的牛胆盐培养基中,布氏酵母菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌存活率较对照组的存活率最高为60.49%、85.1%、47.42%。(4)3株益生菌按照不同配比在培养12 h后,试验组第2、4、8组较对照组相比差异显著(P<0.05);培养24 h后,试验组第3、4、5、6较对照组差异显著(P<0.05),组间差异不显著(P>0.05);第8个处理组在培养12 h后对大肠杆菌K99的抑菌效果较好。综合分析,3株益生菌对人工胃液、人工肠液、牛胆盐具有较好的耐受性,并具对大肠杆菌K99、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌均有一定的抑菌特性。嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏酵母菌最佳的优化配比为3:3:1。     

5株凝结芽孢杆菌的鉴定及抗逆性分析

通过细菌形态学、生理生化特征分析,5株鉴定均为凝结芽孢杆菌。以总菌数、抑菌性、热稳定性、耐人工胃肠液、耐胆盐能力等为评价指标,比较5个凝结芽孢杆菌产品的抗逆性。结果表明,5株凝结芽孢杆菌经65℃处理30 min后,存活率均超过100%;A株抑菌性最好,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌率分别可达99.85%和101.4%,显著高于D株(P0.01)和E株(P0.01)。经过人工胃液和人工肠液处理后,菌株A和B在模拟胃液(pH 2.0)存活率较高,均在80%以上,同时这A株菌完全耐受模拟肠液(pH 7.6);A株和B株耐受胆盐浓度可达1%,其他三株的耐受胆盐浓度可达0.3%。A株较其他株凝结芽孢杆菌具有较好的益生特性,在饲料生产上具有重要的应用价值。     

饲用地衣芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨地衣芽孢杆菌的抗逆性与益生性,研究通过5个试验评定地衣芽孢杆菌的耐高温、耐酸性、耐胆盐、抑菌性和黏附性,于85℃水浴分别处理地衣芽孢杆菌2.5 min、5 min、7.5 min模拟制粒条件;利用pH值分别为2,3,4的人工胃液模拟胃液环境;用0.3%的胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定地衣芽孢杆菌的黏附能力。结果表明:85℃处理地衣芽孢杆菌2.5 min后活菌数最高,与对照组相比提高了2.25%(P>0.05);用pH值为2,3,4的胃液分别处理,与对照组相比活菌数分别提高0.77%(P>0.05)、1.54%(P>0.05)、1.34%(P>0.05);地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0和16.16 mm;在黏附性试验中,每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上平均可以黏附27个地衣芽孢杆菌。说明制粒过程、人工胃液、人工肠液不影响地衣芽孢杆菌的活菌数,地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著抑制作用,使金黄色葡萄球菌基本不能在蛋鸡消化道内定植。     

饲用芽孢乳酸菌的生物学特性研究

试验研究了芽孢乳酸菌的生长特性、泌酸能力、高温耐受性、耐酸性、胆盐耐受性和抑菌能力,旨在为微生态饲料添加剂的研发提供试验依据。结果表明,芽孢乳酸菌在30 h时菌体质量浓度达到最高值,在32 h时产酸量最高,最后在pH 3.80左右趋于稳定;芽孢乳酸菌经90℃处理10 min后存活率达到73.47%,pH 2.0及1.0%胆盐处理3 h后存活率分别为54.69%、24.36%;芽孢乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌性能,抑菌圈直径分别为18.38、19.76、17.42 mm。结果说明,芽孢乳酸菌具备良好的生物学特性,是一株优异的益生菌株。     

猪肠源型枯草芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了筛选具有优良生物活性的猪肠源型枯草芽孢杆菌，差异化开发出功能性微生态制剂，试验以高温孵育的健康猪肠道内容物为分离基质，金黄色葡萄球菌为指示菌，通过胆盐耐受性分离、指示菌的对峙培养和产酶试验进行菌株筛选，并综合菌株形态特征及16S rDNA基因序列进行鉴定。另外，采用琼脂扩散法对菌株发酵上清液进行抑菌谱及温度、胆盐、pH值、人工胃液和肠液的耐受性及溶血性的考察。结果表明：肠道内容物中有多株可以抑制指示菌和产酶的细菌，其中有2株不仅具有较好的抑菌性能，而且同时具有蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和木聚糖酶的活性，其中N65菌株的抑菌性能和产酶活性最好。N65菌株与枯草芽孢杆菌的亲缘关系最近，综合其形态特征鉴定为枯草芽孢杆菌。N65菌株发酵上清液对金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌、无乳链球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌均有较好的抑制效果，抑菌谱广，而且具有良好的温度、胆盐、pH值及人工胃液和肠液的耐受性，并且溶血率低，无溶血风险。说明猪肠源型枯草芽孢杆菌N65具有较好的抗逆、抑菌、产酶等益生特性，具有开发为饲用抗生素替代类功能性微生态制剂的潜力。     

饲用干酪乳杆菌的生物学特性研究

针对一株干酪乳杆菌生长特性、泌酸能力、耐酸性、胆盐耐受性和抑菌能力进行研究,旨在为微生态饲料添加剂的研发提供理论依据.结果表明:干酪乳杆菌在24 h时菌体质量浓度达到最高值,在28 h时产酸量最高,pH在3.80左右维持稳定;干酪乳杆菌分别经pH 2.0和1.0％胆盐处理3h后存活率分别为81.29％、150.81％;该菌株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌性能,抑菌圈直径分别为17.47、18.53、16.36 mm.     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

一株颉颃黄曲霉菌枯草芽孢杆菌的生物学特性研究

对筛选出的一株枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究。将枯草芽孢杆菌全菌液、上清液及超声波菌体分别进行抑制黄曲霉菌生长试验和降解黄曲霉毒素解毒效率,并进行抑制大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌抑菌试验,以及耐酸、耐胆盐、胃肠耐受能力和温度敏感试验。结果表明该株枯草芽孢杆菌超声波菌体对黄曲霉生长具有明显抑制作用,对黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素M1的降解活性分别为75%、70%和62%,而全菌液和上清液效果较差。对大肠杆菌和沙门菌抑菌效果较好,对金黄色葡萄球菌较差,能够耐酸、耐胆盐、胃肠耐受能力和耐高温。试验对该株枯草芽孢杆菌应用临床提供理论依据。     

2株地衣芽孢杆菌抗逆性及益生性的研究

对2株地衣芽孢杆菌(Bacillus clicheniformis)C10和C46进行耐酸性及耐胆盐等抗逆性试验,进而进行抑菌测定、产酸和产酶等益生性试验,对13种抗生素进行药敏性测定.结果表明,2株地衣芽孢杆菌C10和C46在pH 2.0、3.0和4.0的人工胃液中处理2和6 h,存活率均为94 %,0.03 %～0.3 %胆盐溶液里存活率均超过91 %,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌K88和鸡白痢沙门菌均有明显的抑制作用,有机酸总量分别达到1 230.99和298.69 mg/L,蛋白酶活力分别为256和291 IU/mL,对10种抗生素有耐药性,对3种抗生素有药敏性.说明2株地衣芽孢杆菌具有很强的抗消化道生境及较好的益生功能.     

葡萄糖氧化酶抑菌、产酸及耐受性试验

为了解饲料添加剂葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOD)在畜禽养殖过程中的应用效果,试验采取体外法进行了不同温度、不同pH值条件下不同浓度GOD对金黄色葡萄球菌、鸭沙门氏菌以及不同来源大肠杆菌的抑菌效果研究,同时评估了GOD的产酸性能及在人工胃液、人工肠液、猪胆盐中的耐受性。结果表明:GOD对不同致病菌均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,不同浓度GOD的抑菌效果间存在显著差异(P0.05);随着作用时间的延长GOD的产酸效果明显,pH值逐渐降低,且在试验开始的前4个小时中差异显著(P0.05);人工胃液对GOD的活性影响较大,人工肠液和猪胆盐对GOD活性影响较小。说明GOD有较明显的产酸效果,对大肠杆菌和沙门氏菌有较好的抑制效果,并且在消化道内有较好的耐受性。     

一株植物乳杆菌生物学特性的研究

文章探讨了植物乳杆菌BLCC2-0001在胃肠道中的耐受性及作为益生菌的功能特性。人工模拟胃肠道环境,研究植物乳杆菌的耐受情况。同时对肠道中致病性大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌等的拮抗特性和安全性试验进行研究。作用4h,在pH2.5和pH3.5的酸性环境及人工胃液、肠液中的存活率皆在80%以上,在0.3%的胆盐环境中,存活率为60%左右。对致病菌的抑菌圈直径均在20mm以上。安全性试验结果表明,该株乳杆菌不会产生硝基还原酶、无溶血现象发生,能产生少量的D-乳酸。植物乳杆菌BLCC2-0001具有较强的耐受胃肠道环境的作用,能抑制病原菌的生长,可以作为动物微生态制剂的菌株使用。     

狐源罗伊氏乳杆菌ZJF036益生特性研究

本试验旨在研究狐源罗伊氏乳杆菌ZJF036发酵特性、黏附能力及动物安全性,探究罗伊氏乳杆菌ZJF036的益生特性。试验检测了罗伊氏乳杆菌ZJF036的生长特性、产酸性能、药物敏感性,对人工胃液、人工肠液和胆盐的耐受性,细菌的疏水率和自凝聚率,对狐狸小肠上皮细胞的黏附能力以及对小鼠血液生理生化指标的影响。结果表明:罗伊氏乳杆菌ZJF036培养4～10 h进入对数生长期;培养菌液的最低pH为3.80;罗伊氏乳杆菌ZJF036对麦迪霉素、头孢曲松和素氯霉敏感,对万古霉素、环丙沙星、丁胺卡那和氨苄西林不敏感;细菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有良好的抑菌作用;罗伊氏乳杆菌ZJF036在人工胃液和人工肠液中3 h存活率可达90%以上,能够耐受0.4%的胆盐环境;罗伊氏乳杆菌ZJF036的疏水率为82.27%,在2和4 h自凝聚率分别为32.47%和41.70%;罗伊氏乳杆菌ZJF036对狐狸小肠上皮细胞的黏附数为(77.0±8.0) CFU/细胞,明显高于鸡源鼠李糖乳杆菌GG;此外,小鼠安全性试验表明,血液生理生化指标均未见异常。综上所述,罗伊氏乳杆菌ZJF036生长迅速,具有良好产酸性能和抑菌能力,可以耐受人工胃液、人工肠液和胆盐,对狐狸小肠上皮细胞具有很强的黏附能力,对小鼠安全可靠。罗伊氏乳杆菌ZJF036可作为犬科动物益生菌制剂的备选菌株。     

蚯蚓源贝莱斯芽孢杆菌Y1鉴定及生物学特性研究

为了获得生长性能优良和抗逆性好的蚯蚓源芽孢杆菌菌株,本试验从蚯蚓肠道内分离1株生长较快的细菌并命名为Y1,随后进行16S rRNA测序、生理生化鉴定、抗逆性试验、药敏试验、抑菌试验和动物安全性试验。结果显示：该菌为贝莱斯芽孢杆菌,革兰染色呈阳性;生长曲线显示该菌6～12 h为对数期,15～27 h为稳定生长期;在人工胃液、人工肠液中10 h的存活率分别达到60.40%和61.60%;能够耐受0.3%胆盐;对氨苄西林、青霉素G、羟氨苄青霉素耐药,对环丙沙星、头孢羟氨苄、氟苯尼考、替米考星、庆大霉素高度敏感;对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌均有良好的抑制作用;在动物安全性试验中,接种该菌的SPF级KM小鼠未出现异常及死亡现象。结果表明,蚯蚓源贝莱斯芽孢杆菌Y1具有良好的生长性能,能耐受动物胃肠道环境,有可能作为益生菌应用于畜禽养殖。     

芽孢杆菌B13的分离鉴定及其抑菌作用研究

试验旨在发掘有效的抗性菌以替代部分抗生素,并研究其抑菌作用,以大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用凝胶打孔法从猪肠道内容物中筛选出一株对3种病原菌均具有抑菌活性的菌株,利用形态特征观察、革兰氏染色、16SrDNA序列同源性比对鉴定菌株,并对其抑菌条件和生长条件进行优化。结果显示,试验筛选到1株对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有较强抑制作用的菌株,经鉴定确定其为芽孢杆菌(Bacillus sp.),并命名为芽孢杆菌B13。此分离菌为革兰氏阳性菌,单生或成对生长。生长试验结果表明,该分离菌在pH为6.0,温度为34℃,以蔗糖为碳源、蛋白胨为氮源时,生长速度最快;在pH为7.0,温度为35℃,以麦芽糖为碳源、蛋白胨为氮源时,抗鼠伤寒沙门氏菌、黄色葡萄球菌和大肠杆菌K88活性最高。本试验通过对芽孢杆菌B13的特性进行研究发现,此菌株具有较好的抑菌效果,在抑菌方面具有良好的开发应用前景。     

一株嗜酸乳杆菌的抑菌效果及相关特性分析

为研究一株嗜酸乳杆菌(编号为HLA)的基本特性,从而为该菌株的生产应用提供理论依据,通过药敏试验、耐酸耐胆盐试验以及抑菌试验,研究了HLA菌株对抗生素、胃酸和胆盐的耐受能力以及对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血弧菌的抑菌效果和抑菌机理。结果表明:嗜酸乳杆菌HLA具有较高的耐酸、耐胆盐能力,能够产生有机酸抑制副溶血弧菌的生长,产生蛋白类物质抑制沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长,在畜禽微生态制剂产品开发方面具有应用潜力。     

芽孢杆菌B13的分离鉴定及其抑菌作用研究

试验旨在发掘有效的抗性菌以替代部分抗生素,并研究其抑菌作用,以大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用凝胶打孔法从猪肠道内容物中筛选出一株对3种病原菌均具有抑菌活性的菌株,利用形态特征观察、革兰氏染色、16SrDNA序列同源性比对鉴定菌株,并对其抑菌条件和生长条件进行优化。结果显示,试验筛选到1株对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有较强抑制作用的菌株,经鉴定确定其为芽孢杆菌(Bacillus sp.),并命名为芽孢杆菌B13。此分离菌为革兰氏阳性菌,单生或成对生长。生长试验结果表明,该分离菌在pH为6.0,温度为34℃,以蔗糖为碳源、蛋白胨为氮源时,生长速度最快;在pH为7.0,温度为35℃,以麦芽糖为碳源、蛋白胨为氮源时,抗鼠伤寒沙门氏菌、黄色葡萄球菌和大肠杆菌K88活性最高。本试验通过对芽孢杆菌B13的特性进行研究发现,此菌株具有较好的抑菌效果,在抑菌方面具有良好的开发应用前景。     

动物益生菌短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA制剂的制备及其益生特性评价

为优化短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂配方,获得性状稳定可长期贮存的菌剂,同时对其作为益生菌进行益生特性评价,本试验研究了不同稳定剂、pH、NaCl及防腐剂浓度对短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA发酵液保存特性的影响,并对其产芽孢率、耐热性、抗生素敏感性、人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性等生物学特性进行评估。结果显示,添加4% NaCl、0.1‰柠檬酸钙、0.1‰双乙酸钠、0.1‰山梨酸钾、2.0‰黄原胶,调节pH为7,可作为短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂保存的参考条件。短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA能够抑制沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3种动物肠道病原菌的生长,具有产孢率高、耐热、耐酸、耐胆盐的特点,可与链霉素、氨苄西林同时使用,益生效果良好。因此,短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA可作为益生菌菌株应用于畜牧生产。     

猪源益生枯草芽孢杆菌的分离鉴定及培养条件优化

采集健康仔猪肠道,从空肠黏膜分离到23株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有拮抗作用的芽孢杆菌,复筛获得5株拮抗活性较高者;从中筛选出可耐受胆盐、人工胃液和肠液的菌株JN-16,分子生物学和部分生化试验鉴定结果表明:该菌为枯草芽孢杆菌。对菌株JN-16进行抑菌培养条件优化,结果表明,以葡萄糖为碳源、大豆蛋白胨为氮源、pH为6.5的培养基在33℃或37℃下,培养24 h时,发酵液的抑菌效果最强。该菌株可用作饲料添加剂,为微生态制剂的研发奠定了基础。